2009—2020年延安市流感监测结果分析

刘 玮，贺 莉，纪建军，白 跳，马 园，王玲玲

(延安市疾病预防控制中心，陕西 延安 716000)

流行性感冒病毒(influenza virus)简称流感病毒，属于正黏病毒科(Orthomyxoviridae)，根据核蛋白(nuclear protein,NP)和基质蛋白(matrix protein,MP)的不同可分为甲型、乙型、丙型和丁型[1]。甲型流感可引起人群间严重的急性呼吸道传染病，造成全世界范围的大流行，乙型流感可以造成地区的局部流行[2]。20世纪甲型流感病毒曾引起三次世界大流行，其中1918年的西班牙流感导致几千万人在短短几个月内死亡[3]。开展流感监测可以及时了解流感的活动水平和流行特征，掌握病毒的变异情况[4]，为流感疫苗的研制提供重要的基础数据[5]，因此对于流感的预防控制有重大意义。2000年，我国开始在国内建设流感监测网络[6]，由于2009年新甲型H1N1流感疫情在全球大流行，国家流感中心决定扩大流感监测范围。延安市疾病预防控制中心于2009年9月加入国家流感监测网络，成立了流感实验室，负责流感病毒的核酸检测、分离鉴定和网络报告等工作。延安大学附属医院和延安市人民医院先后被确定为国家级流感监测哨点医院，负责急诊与门诊患者中流感样病例的统计上报和采样送检。本文对2009年9月至2020年12月延安市流感监测结果进行分析，探讨流感的活动水平和流行特征，为本市今后的流感防控工作提供依据。

1 资料和方法

1.1 资料来源

根据《全国流感监测方案(2017年版)》[7]的要求，延安大学附属医院和延安市人民医院作为延安市流感监测哨点医院，每日统计医院内急诊与门诊患者中有发热(体温≥38 ℃)伴咳嗽或咽痛之一并缺乏其他实验室确定诊断依据的流感样病例(Influenza Like Illness，ILI)就诊比例，并将数据汇总后于每周一上报“中国流感监测信息系统”，本文的监测时间为2009年9月至2020年12月，共报告急诊与门诊病例1 068 088例。

1.2 病原学监测

1.2.1 标本来源 哨点医院的发热门诊根据患者就诊情况采集发病3 d内流感样病例的咽拭子、鼻拭子或鼻咽拭子，采样后立即放入含有3～4 mL的采样液中，并在2～8 ℃的条件下，2个工作日内送至延安市疾病预防控制中心流感实验室。如未能48 h内送至流感实验室，应置-70 ℃或以下保存，并避免反复冻融。每家哨点医院4～9月份每月至少采集20份，10月至次年3月每周平均采集20份流感样病例样本。2009年9月至2020年12月流感实验室共接收流感样病例样本8 983份，其中男性样本4 991例，女性样本3 992例。

1.2.2 病原检测方法 流感实验室在接收到流感样病例样本后，3个工作日内利用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应分析法(RT-qPCR)进行流感病毒亚型或系的检测。对于送检样本采用全自动磁珠法核酸提取仪(NP 968-S型或GeneRoter 96型西安天隆)及其配套的试剂盒，按照说明书设置仪器参数并提取病毒核酸。使用流感病毒核酸检测试剂盒(荧光PCR法，上海之江或江苏硕世)进行核酸扩增体系配置，之后在实时荧光定量分析仪(TL988-Ⅳ型或Gentier 96E型，西安天隆)上进行核酸扩增，以样本检测Ct值≤43(上海之江)或Ct值≤35(江苏硕世)且扩增曲线呈S型判定为阳性。检测的亚型或系分别为甲型的新甲H1型、季H1型、季H3型和乙型的Victoria系、Yamagata系，实验结果24 h内上报“中国流感监测信息系统”。对于检测出来的核酸阳性样本，流感实验室在1周内利用生长良好的MDCK细胞(犬肾细胞)和SPF鸡胚进行病毒分离，并用血凝(HA)和血凝抑制试验(HI)对毒株进行病毒滴度检测和亚型或系的鉴定，所用参考抗原和抗体均来自于国家流感中心。根据监测方案，流感实验室每年分离鉴定流感毒株不少于30株，10月至次年3月每月不少于5株。

1.3 统计学方法

数据统计和绘图采用Excel 2007软件，相关分析采用SPSS 17.0软件，率的比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 流感样病例监测

2.1.1 不同年份ILI的构成情况 2009年9月至2020年12月哨点医院共报告急诊与门诊病例1 068 088例，其中流感样病例15 416例，占1.44%。流感样病例百分比(ILI%)最高值为2009年的10.62%，最低值为2010年的0.28%，不同年份的ILI%差异有统计学意义(χ2=12 669.31，P<0.01，表1)。

表1 2009—2020年延安市不同年份ILI的构成情况

2.1.2 不同月份ILI的构成情况 本研究显示ILI%在每年的10月至次年3月处于较高水平，大多呈现冬春季的单峰分布，2011年和2017年在春夏季有一个高峰期，呈现双峰分布的特点(图1)。

图1 2009—2020年延安市不同月份ILI的构成情况

2.1.3 不同年龄ILI的构成情况 本研究显示在5个年龄组中，5～14岁组ILI%最高，占27.15%，其次为0～4岁组和15～24岁组，分别占25.21%和22.05%，≥60岁组最低，占7.94%，不同年龄的ILI%差异有统计学意义(χ2=2249.37，P<0.01，表2)。

表2 2009—2020年延安市不同年龄ILI的构成情况(n)

2.2 病原学检测

2.2.1 核酸检测概况 2009年9月至2020年12月流感实验室共接收流感样病例样本8 983份，检出流感核酸阳性样本876份，阳性率为9.75%。阳性样本中季H3型有333例，占38.01%，其次为新甲H1型有326例，占37.21%。乙型的Victoria系和Yamagata系分别有116例和59例，占13.24%和6.74%。甲型未分型、乙型未分型、混合型和季H1型分别有9例、22例、6例和5例，占1.03%、2.51%、0.68%和0.57%。

2.2.2 不同年份流感亚型分布 在12个监测年度中，2009年的阳性率最高，为61.31%，2015年最低，为1.18%。2009年和2013年以新甲H1型流行为主，2014、2015、2016和2020年以季H3型流行为主，2010、2017和2019年新甲H1型和季H3型混合流行，2011年季H3型和乙型混合流行，2012年和2018年以乙型流行为主，其中2018年以Yamagata系为主，优势毒株呈现交替流行的特点。不同年份的阳性率差异有统计学意义(χ2=1194.67，P<0.01，表3)。

表3 2009—2020年延安市流感亚型年份分布(n)

2.2.3 不同月份流感亚型分布 本研究显示不同月份的阳性率以1月最高为18.73%，6月最低为0.00%，10月～次年4月阳性率明显较高。12月～次年4月的阳性率均在10%以上，表明冬春季是流感的活跃期，不同月份的阳性率差异有统计学意义(χ2=364.62，P<0.01，表4)。

表4 2009—2020年延安市流感亚型月份分布(n)

2.2.4 不同性别流感亚型分布 在8 983例流感样病例样本中，男性有4 991例，阳性率为10.08%，女性有3 992例，阳性率为9.34%，不同性别的阳性率差异无统计学意义(χ2=1.359，P>0.05，表5)。

表5 2009—2020年延安市流感亚型性别分布(n)

2.2.5 不同年龄流感亚型分布 本研究显示在5个年龄组中，15～24岁组阳性率最高，占16.28%，其次为5～14岁组，占13.29%，≥60岁组阳性率最低，占5.92%，不同年龄的阳性率差异有统计学意义(χ2=113.38，P<0.01，表6)。

表6 2009—2020年延安市流感亚型年龄分布(n)

2.2.6 毒株分离鉴定 2013年5月至2020年12月流感实验室共分离鉴定毒株242株，分离率为27.63%，使用MDCK细胞分离217株(季H3型126株，新甲H1型60株，Victoria系14株，Yamagata系17株)，使用SPF鸡胚分离25株(新甲H1型18株，Victoria系6株，Yamagata系1株)，由于SPF鸡胚对于季H3型不敏感，因此未分离到季H3型毒株。

3 讨论

2009—2020年延安市流感监测结果显示，历年ILI%和病原学检测结果的变化趋势基本一致，冬春季是流感的活跃期，不同年份优势毒株交替流行，符合我国北方地区[8]的流行特点。2009年新甲型H1N1流感疫情大流行过后，未检测出季H1型，提示新甲H1型已取代季H1型成为新的流行毒株。12个监测年度中，季H3型流行的年份有8年，推测与其持续不断变异、适应和逃避人群的免疫机制有关[9]。2013年之前流感实验室未开展乙型样本的分型检测，而甲型未分型的样本可能与样本采集、实验操作、试剂储备和仪器设备等因素有关，在以后的流感监测工作中应重点关注。甲型流感病毒容易发生变异并可能造成潜在的流感大流行风险，因此未分型的甲型流感阳性样本要及时向陕西省疾病预防控制中心上报并送检。

不同年龄分组中，5～14组和15～24岁组的核酸阳性率较高，提示在校学生群体由于抵抗力差、聚集度高，且在冬春季流感活跃期大多在室内活动，因此更容易交叉感染引起暴发疫情，是流感防控的重点人群[10]。有研究[11]显示，在流感活跃期前1～2月接种疫苗，可以对在校学生等重点人群起到明显的保护效果。0～4岁组核酸阳性率较低，推测与学龄前儿童除感染流感病毒外，还容易感染其他呼吸道病毒有关[12]。≥60岁组的核酸阳性率最低，可能与老年群体不经常出门活动，患病后就诊率不高有关。老年群体免疫力低，感染后体温反应不明显[13]，但易诱发严重的并发症，因此在今后的流感监测中应多给予关注。病原学检测结果表明，不同年份、月份和年龄的阳性率差异有统计学意义，而不同性别的阳性率差异无统计学意义，这与全省[9]以及汉中、渭南、铜川[16-19]的报道一致，但与西安、安康、商洛、咸阳[20-23]的报道不同，提示流感发病率是否存在性别差异有待于进一步研究。

2009—2020年延安市流感病毒核酸阳性率为9.75%，明显低于关中和陕南地区[4，9，16-23]，推测与延安市的气象条件、地理位置和人口数量等因素有关。核糖核酸酶P(RNaseP)在各种生物体内普遍存在，快速检测RNaseP基因，能够作为人标本中核酸提取是否有效的验证。流感实验室曾经对送检样本的RNaseP基因进行随机抽样检测，结果显示部分样本的核酸提取失败，提示哨点医院应加强相关科室人员的业务培训，严格样本采集、保存和运输等环节的管理，确保流感监测工作的质量。流感实验室应进一步加强质量控制和管理，实验人员要不断学习以提高技术水平，确保检测数据真实准确。