集菌涂片染色法在检测痰液中抗酸杆菌中的应用分析

李关华

（广东省罗定市人民医院 检验科，广东 罗定 527200）

0 引言

结核病主要是由结核杆菌引起的一种传染性病症，该病具有较高的患病率、致死率，该病在单一传染病中致死率排在首位，依据世界卫生组织（WHO）2020年最新发布数据得出，2019年，全球约有1000万人患上结核病，140万人因此死亡[1]。结核病常会累及多个器官，包括肾、骨、肺等，其中以肺结核最为常见，且最具传染性，已成为危害人们身体健康的一个重要病症。因此针对结核病患者，对其进行早期诊断至关重要，以尽早防控与治疗，改善预后[2]。目前针对结核病，临床多以直接涂片、罗氏培养最为常见，其中直接涂片操作简便、经济，但其阳性率较低；罗氏培养阳性率高，已成为诊断结核病“金标准”，但其培养周期较长，影响疾病诊治结果[3]。因此选择一种高效、检出率高的检测方式一直是临床关注的重点。集菌涂片染色法是一种新的检测方式，具有操作简便、易分辨、检测时间短等优点[4]。但目前关于集菌涂片染色法用于痰液抗酸杆菌检测中的相关文献较少，故本文就本院选取的100例疑似肺结核患者进行研究，分析使用集菌涂片染色法检测痰液中抗酸杆菌的临床价值，阐述如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

将本院2020年1月-2021年1月收治的100例疑似肺结核患者纳入研究，所有患者均知情同意，并经院内伦理委员会审核、批准〔批号：2019年审（22）号〕。100例疑似肺结核患者中男、女各68、32例，年龄在19～65岁，平均（38.52±5.37）岁。

纳入标准：①入选病例均为疑似肺结核患者（患者均持续咳嗽、咳痰≥3周，伴咯血或伴血痰；发热或胸痛≥2周）；②经胸部X线片检查结果显示异常；③均为合格痰液标本[5]：血性、脓性、干酪性与黏液性痰，痰液量≥2mL；④均为首次患病。

排除标准：①患者既往存在精神病史；②既往伴肺结核病史；③伴肝、肾等其他器官功能衰竭。

1.2 方法

集菌涂片染色法：选择竹签挑取0.05～0.1mL痰标本，将其置于玻片正面靠右2/3左右位置，随后均匀涂抹成适合厚薄的卵圆形痰膜（10mm＊20mm），随后将其置于生物安全柜内，利用紫外线等进行照射，时间为15min，实施痰涂片火焰固定。将剩余痰标本加等体积的5%浓度的次氯酸钠溶液，混匀，静置30min，随后液化、灭菌，倒入离心管内，实施振荡摇匀，用离心机4000r/min，离心15min，去上清，保留1mL沉渣，摇匀后制成集菌痰涂片，将剩余沉渣保存备用，随后进行染色。染色应严格依据试剂盒操作说明实施。将已固定的痰涂片滴加石炭酸复红溶液初染10min；水洗、沥水后滴加酸性酒精脱色1～2min或无色；水洗、沥水后滴加亚甲基蓝溶液复染30s，水洗、晾干待检，将染色好的痰涂片置于OLYMPUS CX21普通光学显微镜下进行观察。

直接涂片法按照《中国结核病防治规划痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册》[6]进行操作。罗氏培养法按照《结核病诊断细菌学检验规程》进行操作[7]。

集菌涂片染色法安全性测试：取直接涂片法与集菌涂片染色法均位3+或4+痰液标本共12份，各标本均为2mL，分6份，将1倍标本保存液加入其中，进行处理，时间选为5～15min，其中3份进行加热，另3份不做处理，实施罗氏培养；另外6份将2倍的样本保存液加入其中，处理方式同上，对抗酸杆菌生长状况进行检查。

1.3 观察指标

①此次100例患者诊断结果由专业医师出具，并以“罗氏培养法”作为金标准，确定最终肺结核确诊例数，观察直接涂片法、集菌涂片染色法特异度、灵敏度、诊断符合率、误诊率。特异度=真阴性/（假阳性+真阴性）×100.00%[8]；灵敏度=真阳性/（真阳性+假阴性）×100.00%；诊断符合率=（真阳性+真阴性）/100×100.00%。误诊率=假阳性/（真阴性+假阳性）×100.00%[9]；②对集菌涂片法安全性进行检测，对痰液标本分别进行加热、进行罗氏培养，观察抗酸杆菌生长情况。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 100例患者确诊结果

100例疑似肺结核患者，经罗氏培养法最终确诊为71例。

2.2 两种检测方式与金标准对比

集菌涂片染色法、直接涂片法与罗氏培养法检测结果对比。见表1。

表1 两种检测方式与金标准

2.3 3种检测方法检出情况

罗氏培养法特异度、灵敏度、诊断符合率、误诊率100.00%、100.00%、100.00%、0.00%，集菌涂片染色法分别为93.10%、95.77%、95.00%、6.90%，直接涂片法分别为51.72%、81.68%、73.00%、48.28%，罗氏培养法、集菌涂片染色法特异度、灵敏度、诊断符合率均高于直接涂片法，误诊率均低于直接涂片法（P＜0.05），罗氏培养法与集菌涂片法对比无明显差异（P＞0.05）。见表2。

表2 3 种检测方法检出情况对比[n（%）]

2.4 集菌涂片染色法安全性试验结果

在标本中加入1倍或2倍痰液保存液，将2份标本分别放置5～15min，对标本进行加热，在罗氏培养基上进行接种，培养2周后，均未见抗酸杆菌生长。

3 讨论

肺结核是临床常见病症，其主要是由结核杆菌感染所致，以发热、咯血、咳嗽、盗汗、消瘦等为主要临床表现，若不尽早采取有效的治疗措施，随着病情进展，可引发结核菌耐药性，增加治疗难度，对患者生理、心理带来严重影响，故针对肺结核患者，应尽早采取有效的治疗措施，以改善患者临床症状，提升其生活质量[10-11]。而采取有效的诊断措施，是提升疗效、改善预后的关键。

目前，部分主流的结核病诊断方式存在一定的局限性，其中结核素皮肤实验的应用，因结核杆菌存在高感染率与卡介苗的应用，造成其在临床应用率较低，而CT、X线等影像学检测方式，极易受医师主观意识影响，降低诊断结果准确性[12]。内镜与病理学检查虽有较高的准确性，但其具有一定的侵入性，且操作较为困难，因此针对结核病，临床多采取实验室检测，其具有操作简便、经济等优点，对临床早期诊断疾病具有重要意义[13]。近年来，随着实验室检测技术不断发展，痰涂片抗酸杆菌检测技术成为防控结核病的主要方式，具有操作简便、易行、可靠、迅速等优点[14]。本文使用的集菌涂片染色法中，使用次氯酸钠法，具有较高的敏感性，且价格低廉，所需离心力极易达到，同时因次氯酸钠是一种有效的消毒剂，故可显著减少实验室感染发生风险，具有一定的安全性。本文研究显示，100例疑似肺结核患者，经罗氏培养法确诊共71例，表明肺结核仍具有较高的发病率。同时本文研究显示，相较于直接涂片染色法，集菌涂片染色法检测特异度、灵敏度、诊断符合率较高，误诊率较低；集菌涂片染色法检测痰抗酸杆菌特异度、灵敏度、诊断符合率略低于罗氏培养法，误诊率略高于罗氏培养法，但两种检测方式对比无明显差异，表明集菌涂片染色法具有较高的临床应用价值，有利于提升痰抗酸杆菌诊断准确性[15]。同时，本文还对集菌涂片染色法安全性进行实验，对12份痰液标本经不同比例的标本保存液处理5～10min，经加热或不加热，采取罗氏培养法进行检测，其结果得出，均未见抗酸杆菌生长、繁殖，由此得出，集菌涂片染色法具有较高的生物安全性，对比直接涂片法检测，其对实验室工作人员的安全更具保障。

综上所示，集菌涂片染色法检测痰液中抗酸杆菌临床应用价值较高，该检测方式具有较高的诊断特异度、灵敏度、诊断符合率，可有效弥补直接涂片法检测的不足，且集菌涂片染色法操作方式简便、经济、人为因素影响较少，具有较高的生物安全性，值得借鉴。但本文尚存在一定的不足之处，例如样本数量少、未引用客观性指标以及研究时间少等，故在今后研究中可进一步增加样本数、引用客观性指标以及延长研究时间等，以深入研究集菌涂片染色法在检测痰液中抗酸杆菌的临床价值。