血清血管生成抑制蛋白1在2型糖尿病肾病中的表达及临床意义

裴 双， 苏建荣

(首都医科大学附属北京友谊医院检验科， 北京 100050)

糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是一种与糖脂代谢紊乱、血流动力学异常、遗传易感性、炎症细胞浸润和免疫失调等多种综合因素相关的2型糖尿病(diabetes mellitus，DM)患者慢性微血管并发症，易发展为终末期肾病(end-stage renal disease，ESRD)，起病隐匿，发病率逐年升高，具有高致残率和致死率[1]，因此，DN相关生物学标志物和新的治疗靶点探寻成为了新的临床研究热点。血管生成抑制蛋白1(vasohibin-1，VASH-1)是一种具有抗血管生成、调节炎性反应和抗纤维化等作用的内皮源性分泌蛋白[2]，当前关于VASH-1在DN患者中表达变化的报道甚少，故本文旨在通过研究2型DN患者血清VASH-1水平的变化，探寻VASH-1与DN发病机制间的可能相关性，以期为DN的辅助诊断和治疗靶点探讨提供一些新的思路。

1 资料与方法

1.1一般资料:选取2019年4月至2020年4月我院收治的252例2型DN患者作为研究组进行前瞻性研究，其中男性145例，女性107例，年龄40～74岁，平均年龄(61.59±9.13)岁，体重指数(body mass index，BMI)(26.46±6.11)kg /m2。根据尿白蛋白排泄率(urinary albumin excretion rate，UAER)情况，将患者分为正常白蛋白尿组(NA组，n=83，UAER<30mg/24h)、微量白蛋白尿组(MA组，n=85，30mg/24h≤UAER<300mg/24h)和大量白蛋白尿组(LA组，n=84，UAER≥300mg/24h)。NA组男性45例，女性38例，年龄40～73岁，平均年龄(62.13±8.59)岁，BMI(25.98±6.89)kg/m2；MA组男性48例，女性37例，年龄41～72岁，平均年龄(60.87±9.53)岁，BMI(26.10±5.76)kg/m2；LA组男性46例，女性38例，年龄41～74岁，平均年龄(61.53±8.46)岁，BMI(26.59±6.72)kg/m2。另选取同期健康体检者85例作为对照组，其中男性45例，女性40例，年龄41～75岁，平均年龄(62.17±8.36)岁，BMI(26.12±6.33)kg/m2。四组受试者在年龄、性别、DM病程及BMI等资料方面具有可比性(P>0.05)。本研究经获得医院伦理委员会批准。

1.2纳入和排除标准:纳入标准：①研究组患者诊断和疾病分型依照美国糖尿病协会(American diabetes association，ADA)于2018年修订的相关标准[3]；②研究组患者DN诊断均经肾组织病理活检明确；③所有受试者知情本次研究并签署知情同意书。排除标准：①明确诊断为1型DM、特殊类型DM、妊娠期DM或继发性DM者；②近6月内出现过DM酮症酸中毒、DM高渗性昏迷等2型DM急性并发症者；③近期有发现泌尿系统相关疾病或手术以及感染等应激状态者；④伴有肿瘤或自身免疫性疾病者；⑤严重肝、肾、心、肺功能不全或慢性肝炎等感染性疾病者；⑥妊娠或哺乳期者；⑦不配合本次研究者。

1.3方法:嘱患者按要求正确留取24h尿标本，充分混匀后取10mL进行UAER检测；清晨空腹采集静脉全血用于糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin，HbA1c)、血沉(erythrocyte sedimentation rate，ESR)检测；另空腹采集静脉血5mL置于不含抗凝剂的真空采血管中，3000r/min离心10min，取上清用于C-反应蛋白(C-reactive protein，CRP)、VASH-1和转化生长因子β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)检测。HbA1c检测用日本TOSOH HLC-723 G8全自动糖化血红蛋白分析仪及配套试剂；ESR检测用北京普朗PUC-2068A全自动血沉分析仪；UAER、CRP检测仪器用美国贝克曼公司的全自动生化分析仪AU5800及试剂盒由北京利德曼生化股份有限公司提供；VASH-1和TGF-β1检测采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)，试剂盒采购于美国Cusabio公司。比较各组VASH-1、TGF-β1、UAER、CRP、HbA1c和ESR水平的变化，并分析VASH-1与其他指标间的相关性。

2 结 果

2.1各组对象血清VASH-1与其他指标水平比较:研究组患者VASH-1、TGF-β1、UAER、CRP、HbA1c、ESR水平明显高于对照组，两组间比较有统计学意义(P<0.05)。NA组、MA组和LA组VASH-1、TGF-β1、UAER、CRP、HbA1c、ESR水平为：LA组>MA组>NA组，三组间比较均具统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 各组对象血清VASH-1与其他临床指标水平比较

2.2DN患者血清VASH-1与其他指标的相关性分析:Pearson相关性分析显示，DN患者VASH-1与TGF-β1、UAER、CRP、HbA1c、ESR间呈正相关性(r=0.526、0.646、0.529、0.273、0.592，P<0.01)，见图1。

图1 DN患者血清VASH-1与其他指标的相关性分析

2.3DN患者血清VASH-1与其他指标的多元线性回归分析:以DN患者血清VASH-1水平变化作为因变量，以TGF-β1、UAER、HbA1c、ESR、CRP水平变化作为自变量进行Logistic多元线性回归分析，结果显示：TGF-β1、UAER、CRP、HbA1c、ESR水平变化是影响DN患者血清VASH-1水平变化的独立危险因素，见表2。

表2 DN患者血清VASH-1与其他指标的多元线性回归分析

3 讨 论

糖尿病肾病(DN)的典型微血管病变是微循环障碍，持续性高血糖状态使得肾脏发生肾小球基底膜肥厚、肾间质细胞外基质沉积而发生纤维化等肾脏结构病理性损伤，导致蛋白尿形成和肾功能减退[4]。研究发现DN病理变化中的肾间质纤维化发生发展进程中伴随着新生血管的形成和血管内皮功能障碍等变化[5]，故研究与其相关的生物学标志物及可能发生机制可为DN辅助诊断、治疗靶点探寻和新药研发提供一些新的动力。

既往研究[6]发现VASH-1可作为内皮源性抗血管生成因子能够增强内皮细胞的应激耐受性和存活率，抑制过量血管的生成，起到保护性作用而抑制肾脏病变，其极有可能成为慢性肾病变的潜在标志物。本文研究发现研究组患者血清VASH-1水平较对照组升高明显，且水平随着尿蛋白排泄率的增加而升高，与Ren H等[7]的研究结果相一致，表明血清VASH-1与DN的发生关系密切，原因可能与DN发生应激状态下机体负反馈性保护导致其水平升高有关。

本研究通过Pearson相关性分析发现DN患者VASH-1与UAER呈正相关(r=0.646，P<0.01)，多元回归分析示UAER是VASH-1升高的独立危险因素，表明VASH-1水平的升高与尿蛋白变化密切相关，这种变化涉及的可能分子机制会是什么呢？为此，我们研究了DN患者血清VASH-1表达与TGF-β1和CRP、ESR等炎症指标以及HbA1c的相关性，结果发现：DN患者VASH-1与TGF-β1、CRP、HbA1c、ESR间呈正相关性(r=0.526、0.529、0.273、0.592，P<0.01)，多元回归分析示TGF-β1、CRP、HbA1c、ESR是VASH-1升高的独立危险因素，而既往研究表明，在肾小球、肾小管和肾间质中均有广泛分布的TGF-β1可通过对肾小球系膜细胞、细胞外基质的促进生成及抑制降解作用而使肾小球发生纤维化，并诱导炎症反应的发生，导致肾小球内皮细胞发生损伤及功能障碍，使得CRP和ESR等炎症指标发生相应改变，参与并加速DN的发生发展[8]，表明血糖控制不佳及炎症反应能够加速DN患者机体分泌VASH-1，涉及的分子机制极有可能是TGF-β1介导的信号转导通路及其介导过程中伴随发生的炎症相关细胞因子变化及血管内皮功能损伤。

综上所述，血清VASH-1在DN患者中表达水平升高，与TGF-β1及炎症标志物关系密切，提示其有成为DN预测生物学标志物的可能，为糖尿病患者肾脏损伤中发生的炎症及纤维化机制研究、治疗靶点探讨和新的药物研发提供了新的思路。