子宫内膜癌组织中L1CAM Mel-18 c-myc的表达及临床意义

张 晋， 姜 英， 李文娟， 白 枫

(1.辽宁省人民医院妇科， 辽宁 沈阳 110000 2.辽宁省肿瘤医院妇科， 辽宁 沈阳 110000)

子宫内膜癌是妇科肿瘤当中死亡率和发生率较高的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率呈逐年增长趋势，并且子宫内膜癌患者的预后较差，对子宫内膜癌分子病理的了解有助于降低子宫内膜癌死亡率[1]。L1-细胞黏附分子(L1 cell adhesion molecule,L1CAM)属于Ⅰ型跨膜糖蛋白，主要分布于细胞膜上，参与细胞黏附调节，在子宫内膜癌中表达上调，与子宫内膜癌细胞的侵袭和转移联系密切[2]。黑色素瘤核蛋白-18(Melanoma nuclear protein 18,Mel-18)属于多梳族蛋白家族成员，在胚胎细胞发育成熟、细胞凋亡及细胞分化等过程中起到重要作用，参与肿瘤增殖和转移等过程[3]。原癌基因(c-myc)属于转录因子家族，在子宫内膜癌中表达阳性率增高，在肿瘤转移和肿瘤上皮-间质转化等过程中起到一定促进作用[4]。有研究发现[5]，c-myc蛋白可以与L1CAM和Mel-18结合共同参与癌症进展。本研究检测子宫内膜癌中L1CAM、Mel-18、c-myc的表达，旨在分析3指标与临床病理特征的关系。

1 资料与方法

1.1一般资料:选择2015年2月至2019年12月收治的80例子宫内膜癌患者，患者在入院后均行手术治疗，收集手术过程中患者的肿瘤组织及相应的癌旁组织(距离癌组织边缘2cm以上)。纳入标准：①在入院之前未接受过放化疗治疗；②经病理学诊断确诊为子宫内膜癌；③临床病理资料完整。排除标准：①存在严重肝肾功能障碍；②不适宜进行手术治疗；③合并有其它类型肿瘤；④合并自身免疫性疾病或感染性疾病。患者年龄38～76岁，平均(59.98±5.02)岁。参照国际妇产科联合会(FIGO)分期标准[6]分为Ⅰ～Ⅱ期49例，Ⅲ期31例。肿瘤直径：≤3cm者23例，>3cm者57例；未绝经22例，已绝经58例；糖尿病史25例，无糖尿病史55例；子宫内膜样腺癌52例，黏液/浆液性腺癌28例；高中分化56例，低分化24例；有淋巴结转移30例，无淋巴结转移50例；肌层浸润<1/2者46例，肌层浸润>1/2者34例。

1.2L1CAM、Mel-18、c-myc蛋白表达检测:手术过程中切除样本后立即进行常规10%中性甲醛固定24h，酒精梯度脱水(依次在70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇和无水乙醇中浸泡1h)，二甲苯浸泡2h，酒精梯度脱水后通过生物组织包埋机进行常规石蜡包埋，制备成组织芯片。组织芯片脱蜡水化，使用3%过氧化氢在37℃湿盒中孵育20min，随后在高压锅中进行抗原修复，高压锅中加入柠檬酸缓冲液(pH为6.0)，沸腾后将切片置于高压锅中，沸腾后及时5min，取出切片。封闭液37℃孵育30min。孵育结束后滴加Anti-L1CAM抗体或Anti-MEL-18抗体或Anti-c-myc抗体过夜，抗体均购自Acam生物科技有限公司。次日先PBS缓冲液冲洗3遍，每次5min。滴加二抗37℃孵育30min，最后滴加二氨基联苯胺显色剂显色5min，苏木精复染3min、脱水、透明和固定，倒置生物显微镜下观察染色结果。细胞阳性数分为五个等级，分别为0、1、2、3和4分，阳性细胞比例≤5%为0分，5%<阳性比例<25%为1分，25%≤阳性比例<50%为2分，50%≤阳性比例<75%为3分，阳性比例≥75%为4分。染色强度分为无色(0分)，淡黄色(1分)，棕黄色(2分)和棕褐色(3分)，最终评分为阳性细胞数评分和染色强度评分乘积，最终评分按等级分为阴性(0～4分)和阳性(5～12分)[7]。

1.3统计学分析:采用SPSS20.0统计学软件对临床数据进行分析。计数资料以%来表示，通过χ2检验进行统计学分析，采用Pearson法进行表达相关性分析，P<0.05则表示差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1子宫内膜癌组织中L1CAM、Mel-18、c-myc蛋白表达情况:免疫组化结果显示L1CAM和MEL-18主要分布在细胞质中，而c-myc主要分布于细胞核中，染色结果呈棕色。80例子宫内膜癌组织中L1CAM阳性58例(72.50%)，癌旁组织中L1CAM阳性20例(25.00%)，差异具有统计学意义(χ2=36.123，P=0.000)(图1A和B)。癌组织中MEL-18阳性61例(76.25%)，癌旁组织中MEL-18阳性21例(26.25%)，差异具有统计学意义(χ2=40.025，P=0.000)(图1C和D)。癌组织中c-myc阳性55例(68.75%)，癌旁组织中c-myc阳性22例(27.50%)，差异具有统计学意义(χ2=27.263，P=0.000)(图1E和F)。

图1 子宫内膜癌及其癌旁组织中L1CAM、Mel-18、c-myc蛋白表达情况(免疫组化400×)

2.2子宫内膜癌组织中L1CAM、Mel-18、c-myc蛋白表达与患者临床病理参数的关系:子宫内膜癌组织中L1CAM、Mel-18、c-myc蛋白表达均与淋巴结转移和FIGO分期相关(P<0.05)，而与年龄、月经、糖尿病史、病理类型、肿瘤大小、组织学分化和肌层浸润无关(P>0.05)，具体数据见表1。

表1 子宫内膜癌组织中L1CAM Mel-18 c-myc蛋白表达与患者临床病理参数的关系n(%)

2.3子宫内膜癌组织中L1CAM、Mel-18、c-myc表达相关性分析:子宫内膜癌组织中L1CAM与Mel-18、c-myc表达均呈正相关性(r=0.796、0.653，P<0.05)，Mel-18与c-myc表达呈正相关性(r=0.637，P<0.05)。

3 讨 论

子宫内膜癌的发生发展是一个多因素作用的结果，其中肿瘤细胞侵袭和转移在子宫内膜癌发生发展中起到关键作用[8]，寻找与子宫内膜癌细胞侵袭和转移密切相关的标志物对于降低子宫内膜癌患者的死亡率具有重要意义。L1CAM是细胞内微管和微丝组装的重要调节蛋白，参与细胞有丝分裂和丝状伪足形成等过程[9]。本研究发现在子宫内膜癌中L1CAM表达阳性率升高，并且L1CAM表达与FIGO分期和淋巴结转移密切相关，表明在子宫内膜癌中L1CAM可能起到促癌基因的作用，并且与子宫内膜癌的恶性程度密切相关。已有研究发现L1CAM能够促进肿瘤细胞发生上皮-间质转化，导致肿瘤发生转移及恶性程度增高[10]。MEL-18是多梳基因家族的核心成员，在细胞增殖、胚胎形成以及干细胞自我更新等过程中均起到重要作用[11]。本研究发现在子宫内膜癌中MEL-18表达阳性率升高，并且MEL-18表达也与FIGO分期和淋巴结转移密切相关，实验结果表明在子宫内膜癌中MEL-18也起到促癌作用，并且与子宫内膜癌的恶性进展相关。分析其原因可能是由于MEL-18参与肿瘤炎症反应的形成。已有研究发现在肿瘤当中MEL-18蛋白与B细胞特异的莫洛尼白血病毒插入位点1蛋白存在正协同作用，二者形成蛋白复合体参与肿瘤侵袭和转移[12]。c-myc是一种转录因子蛋白，参与细胞恶性增殖、凋亡以及免疫逃逸等病理生理过程[13]。本研究实验结果表明c-myc也能够促进子宫内膜癌的进展，并且与子宫内膜癌的恶性程度相关。已有研究发现c-myc能够上调血管内皮生长因子的表达，促进肿瘤血管新生，导致肿瘤发生转移[14]。

本研究进一步发现子宫内膜癌组织中L1CAM、Mel-18、c-myc表达彼此间呈正相关性。分析其原因可能是由于c-myc属于转录因子家族成员，参与基因转录调节[15]。在子宫内膜癌当中，L1CAM和Mel-18可能是c-myc的靶基因，L1CAM和Mel-18的表达受到c-myc调节。目前对于子宫内膜癌组织中L1CAM、Mel-18、c-myc之间的调控分子机制仍然缺乏了解，需要后续研究进一步深入探究。

综上所述，在子宫内膜癌组织中L1CAM、Mel-18、c-myc阳性比例升高，并且均与淋巴结转移和FIGO分期密切相关，在子宫内膜癌的治疗和诊断中具有一定的辅助价值。