肺炎支原体23Sr RNA耐药基因位点突变情况与儿童呼吸道感染患者临床症状分析

乔静，庞新丰

(焦作市妇幼保健院 儿科一区，河南 焦作 454000)

肺炎支原体是儿童呼吸道感染中的易感病原体，在呼吸道病原体中阳性检出率居于前列[1]。肺炎支原体感染症状不典型，不仅可以引起儿童呼吸道感染，还可以引起支气管炎、肺脓肿及肺外合并症，严重者甚至危及患者的生命[2]。原有的专家共识及治疗指南，推荐大环内酯类药物作为治疗此类疾病的首选药物[3]，但是近年来，儿童肺炎支原体感染治疗指南将抗菌药物的选择、用药时长、耐药监测作为研究重点。针对上述特点，本研究对儿童呼吸道感染患者进行肺炎支原体核酸及耐药基因突变位点检测，分析耐药性对临床治疗带来的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料

对于疑似肺炎支原体感染、临床诊断有呼吸道感染症状的患儿进行采样。896 例肺炎支原体核酸检测及耐药基因标本收集于焦作市妇幼保健院儿科呼吸病区，时间2019年1月1日至2019年8月1日，患儿年龄3 个月至14 岁，男515 例，女381 例。

纳入标准：①肺炎支原体感染的诊断标准采用《诸福棠实用儿科学》第八版诊疗标准[4]：患儿有呼吸道感染症状；肺部听诊湿啰音；胸部影像学显示病灶存在；肺炎支原体抗体检测阳性抗体滴度大于1∶160。②本研究阳性应符合核酸检测阳性。③纳入本研究的患儿样本采集均已取得家属同意，符合医学伦理学要求。

排除标准：①近1 个月因MP 感染入院治疗的患者；②既往重症肺炎未痊愈者；③免疫治疗者。

1.2 检测试剂

MP 核酸及基因位点A2603G 和A2604G 检测试剂盒选用默乐生物，检测仪器为ABI7500 荧光定量检测仪，检测试剂盒选用江苏默乐生物产品，遵循检测仪器和试剂说明书进行试验操作。

1.3 检测方法

聚合酶链式反应结合TaqMan 荧光探针技术检测。对患者标本进行肺炎支原体核酸检测；对肺炎支原体核酸阳性患者进行肺炎支原体基因点位A2603G、A2604G 检测。

1.4 观察指标

临床症状观察指标选择：肺炎阳性率，肺外多系统并发症及住院时长，发热时长。

1.5 统计学分析

采用SPSS 22.0 进行统计学分析。计量资料用x±s表示，采用t检验；计数资料用n(%)表示，采用χ2检验；P＜0.05 表示差异具有统计学意义。

表1 不同年龄段分组MP 阳性率比较

2 结 果

2.1 肺炎支原体核酸阳性率在不同年龄段中检测情况

896 例儿童呼吸道感染患者中，MP 阳性98 例，阳性率为10.9%(98/896)。肺炎支原体核酸检测阳性患儿按不同年龄段进行分组，分为0 ～6月，6 ～12月，1 ～3岁，＞3 岁四个年龄组，卡方值为48.65，P ＜0.01，对比差异明显，不同年龄段肺炎支原体核酸阳性率不同，6 ～12月组肺炎支原体核酸检测阳性率最低为5.4%，3 岁以上组肺炎支原体核酸检测阳性率最高为32.1%。 见表1。

2.2 不同年龄组MP 耐药基因A2603G 和A2604G 突变位点突变率检测

98 例MP阳性标本中，83例检测出A2603G 和A2604G 突变，耐药基因突变率为84.7%(83/98)。耐药基因突变位点突变率在儿童肺炎支原体阳性患者中随年龄段增加而增高。见表2。

表2 年龄段分组耐药基因突变情况

2.3 临床特点分析

以肺炎支原体耐药基因突变位点A2603G 和A2604G是否突变分组，突变组83 例，未突变组15 例。按照临床特点分析，以年龄、肺炎、肺外合并症、住院时长、发热时长等指标作为统计要素进行分析。表二中，肺炎支原体耐药基因突变位点以不同年龄段分组，低年龄段不易发生肺炎支原体耐药基因突变点位，不同年龄段四组肺炎支原体耐药基因突变率对比有统计学意义。

在临床症状特点分组中，突变组肺炎例数、肺外感染、住院时长、发热时长均显著高于非突变组(P＜0.05)，说明肺炎支原体耐药基因突变位点阳性患者临床症状中发热时长，住院周期均高于为突变组，且易发生肺部及肺外感染。见表3。

表3 MP 耐药基因位点突变分组情况与临床症状分析

3 讨 论

肺炎支原体是一种无细胞壁原核细胞型病原体，由于病原体结构缺乏细胞壁，易产生耐药。文献[4]报道北京地区儿童肺炎支原体的耐药基因突变率超过80%，与本研究儿童MP 耐药基因突变率84.7% 接近。核糖体50s 亚单位23Sr RNA 的V 区是大环内酯类抗菌药物的结合位点，如果V 区核苷酸突变即可引起核糖体结合抗菌药物亲和力下降，从而使肺炎支原体产生耐药性[5]，目前已发现突变位点主要有A2063G、A2064G[6]。

不同年龄段分组研究，实验数据表明：＞3 岁组为焦作地区儿童呼吸道感染肺炎支原体易感人群；但在耐药基因突变分组中，肺炎支原体耐药基因位点突变率随年龄增高而增高。

肺炎支原体感染常见于呼吸道感染，除了呼吸道感染症状外，还易累及其他脏器，引起肺外感染症状[7]。本研究中98 例肺炎支原体阳性感染患者中32 例有肺外感染症状，肺外感染率32.7%(32/98)，其中以肝酶异常、心肌受累最常见，其次是胃肠道、中枢神经系统等。研究发现肺炎支原体耐药基因突变组更易出现肺外感染症状。突变组肺外感染症状37.3%(31/83)肺外感染率远高于未突变组的6.7%(1/15)，这与其他学者研究数据相似[8]。耐药基因突变组临床症状中住院时间、发热时间均高于未突变组，肺炎及肺外感染等重症患者比例，肺炎支原体耐药基因突变组较高(92.8%，77/83)，与耐药特点密切相关。

综上所述，肺炎支原体感染率在不同年龄段阳性比例略有不同，三岁以上为易感人群，23Sr RNA 基因位点突变在年龄分组中呈现随年龄增长突变率增高的特点，23Sr RNA 基因位点突变对于发热时长，住院时长以及肺部、肺外感染均有影响。聚合酶链式反应结合TaqMan荧光探针技术检测肺炎支原体23Sr RNA 基因位点突变，在抗菌药物的选择和治疗方案使用上有指导意义。