高效液相色谱法测定化妆品中普鲁卡因胺等7种组分

郭春梅 矫筱蔓 王超

【摘要】 膏霜乳液类化妆品经甲醇直接提取，无需经净化小柱萃取，由高效液相色谱分离，二极管阵列检测器检测，对普鲁卡因胺等7种组分进行测定，回收率均在89.6%～119.1%之间，能够满足一般实验要求，方法简捷高效。

【关键词】 膏霜乳液类化妆品;甲醇直接提取;高效液相色谱法

【DOI编码】 10.3969/j.issn.1674-4977.2021.01.039

Abstract： Direct extraction of Cream and emulsion cosmetics by methanol，There is no need for over purification column，It was separated by HPLC，Determination of diode array detector，Determination of 7 components of procaine amine，The recoveries warebetween 89.6% and 119.1%，Can meet the general experimental requirements，The method is simple and efficient.

Key words： cream and emulsion class cosmetics;direct methanol extraction;high performance liquid chromatography

普鲁卡因胺等七种物质是局部麻醉剂，人的皮肤局部使用能使皮肤紧致光泽，祛皱。因此有被用在化妆品中的案例。长期或过量使用对人体有很大的伤害、能使面部表情僵硬。辛可卡因毒性很大，使用后颜面或皮肤会出现潮红，还会有过敏反应。丁卡因有扩张毛细血管的药理作，用药部位常见轻微的红斑，偶见轻微水肿或瘙痒，罕见更严重的红斑、水肿或瘙痒。普鲁卡因、普鲁卡因胺、氯普鲁卡因等用量过大或用浓溶液快速注入血管时，可能引起恶心、出汗、脉速、呼吸困难、颜面潮红、谵妄、兴奋、惊厥。长期使用部分患者出现红斑性狼疮样综合征。利多卡因能引起中枢神经系统的相关症状，比如引起嗜睡、感觉异常、肌肉震颤、惊厥、昏迷及呼吸抑制等不良反应，苯佐卡因作为一种表面麻醉剂，如使用不当或长期使用可引起一定的危害。主要表现为对呼吸道有刺激性，吸入后可引起咳嗽，气短。对眼有刺激性，对部分人员有致敏作用，可表现为皮肤瘙痒，红斑以及出现皮疹，丘疹，红肿等。

鉴于普鲁卡因胺等7种物质對人体的种种危害性，为保障广大人民群众的身体健康，安全使用化妆品，在《化妆品安全技术规范》2015年版中被明确规定为禁用成分。《化妆品安全技术规范》中膏霜乳液类化妆品中普鲁卡因胺等7种组分的检验方法为1%的三氯乙酸和乙腈提取，再经固相萃取小柱净化，氮气吹干后甲醇定容再进行液相色谱法测定，方法繁琐实验成本高。本方法采用甲醇直接提取后由高效液相色谱仪进行分离测定，通过回收率实验，高中低三点的回收率均在89%-119%之间，完全能够满足实验要求。

1 试验部分

1.1 主要仪器

安捷伦高效液相色谱仪1200，带二极管阵列检测器;色谱柱：C18柱（250 mm×4.6 mm×5 μm）;超声波清洗仪;斡旋混合仪;pH计：精度0.01。

1.2 主要试剂

甲醇（色谱纯），磷酸氢二钠，磷酸（优级纯），普鲁卡因胺来自LGC，辛可卡因来自USP，普鲁卡因、氯普鲁卡因、苯佐卡因、利多卡因、丁卡因均来自中国食品药品检定研究院。

1.3 试验方法

1.3.1 测定条件

流动相A：0.01 mol/L磷酸氢二钠水溶液，磷酸调pH值至7.0，流动相B：甲醇

1.3.2 样品处理

准确称取样品0.5 g（精确到0.001 g）于10 mL具塞比色管中，用甲醇定容至刻度涡旋30 s，混匀，超声提取20 min，以5000 r/min离心5 min，取上清液经0.45 μm滤膜过滤，滤液即为待测溶液，无需过固相萃取净化小柱净化。

准确称取样品0.5 g（精确到0.001 g）于15 mL具塞比色管中，加入8 mL1%三氯乙酸，2 mL乙腈，涡旋1 min，以5000 r/min离心5 min，上清液待固相萃取小柱净化。

PCX固相萃取小柱依次用3 mL甲醇、5 mL1%三氯乙酸进行净化。将待净化的样品清液流经小柱后，用3 mL1%甲酸甲醇溶液淋洗小柱，弃去淋洗液，再用10 mL的5%氨水甲醇洗脱，收集洗脱液，氮气吹干，用甲醇定容至10 mL，经0.45 μm滤膜过滤，滤液作为待测溶液。

1.3.3 标准溶液的配制

称取普鲁卡因胺、氯普鲁卡因、丁卡因、利多卡因标准品各0.05 g，普鲁卡因、苯佐卡因、辛可卡因标准品各0.04 g置于同一50 mL容量瓶中，加甲醇使溶解并定容至刻度，摇匀。得混合标准储备液。

称取空白基质0.5 g6份，分别置于10 mL具塞比色管中，分别加标准储备液0.02、0.05、0.10、0.25、0.50、1.00 mL，同样品处理，得检出限、混标1、混标2、混标3、混标4、混标5。

2 结论与讨论

2.1 不同方法处理的膏霜基质加对照的色谱图

膏霜空白样品甲醇直接提取的色谱图见图1。

膏霜加标样品（混标5）甲醇直接提取进行测定的色谱图见图2。

膏霜加标样品（混标5）固相萃取小柱净化进行测定的色谱图见图3。

2.2 标准曲线

空白基质加标制备的标准系列采用甲醇直接提取和经固相萃取小柱净化两种不同方法处理后绘制的标准曲线，其线性方程和线性系数见表1。

2.3 回收率

不同方法处理的加标回收率，甲醇直接提取与经固相萃取小柱净化后提取的高中低三个浓度的回收率测定的结果见表2―表7。

2.4 檢出限

称取空白基质0.5 g，置于10 mL具塞比色管中，加标准储备液0.02 mL，制备成检出限，通过不同提取方法提取后进行测定，甲醇定容至10 mL直接提取的检出限谱图见图4，经固相萃取小柱净化后甲醇定容至10 mL的检出限谱图见图5。

3 结论

经过对比实验，未经固相萃取小柱净化甲醇直接提取的标准曲线、回收率和检出限都完全能够满足实验要求。可以确定膏霜类化妆品在测定普鲁卡因胺等7种组分时，样品用甲醇直接提取就能满足实验要求。因此能大大地降低了实验成本，简化了实验过程，缩短了检验时间。

【参考文献】

[1] 国家食品药品监督管理总局化妆品标准专家委员会，化妆品卫生规范[S].2015年版.北京：人民卫生出版社，2017.

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【参考文献】

郭春梅（1966-），女，高级工程师，大专，研究方向为食品化妆品检测。

矫筱蔓（1978-），女，主任药师，硕士，研究方向为化妆品禁限用物质检测方法研究。

王超（1985-），女，主管药师，硕士，研究方向为药品非法添加及化妆品理化检验。