筛选重要生物标志物用于卵巢癌早期诊断和预后评估

刘 真，及霄杨，王 秀，吴晶晶，王秀丽

(1.沧州市中心医院检验科，河北 沧州 061001；2.宁晋县中西医结合医院妇产科，河北 宁晋 055550；3.唐山市妇幼保健院妇科，河北 唐山 063000)

卵巢癌是妇科常见恶性肿瘤，由于卵巢位于腹腔深部，早期临床常缺乏特异性症状与体征，诊断相当困难[1]。据统计[2]，70%的卵巢癌患者一经诊断即为晚期，其治疗后复发率高。糖类抗原125(CA125)是目前公认的卵巢癌最有价值的标志物，可用于围绝经期和绝经后卵巢癌高危患者筛查[3]。卵巢癌的个体化治疗是改善卵巢癌预后的重要途径，而准确的预后预测是个体化治疗的前提[4]。除了血清标志物如CA125、人附睾蛋白4(HE4)等对卵巢癌预后有重要意义外，肿瘤标志物在卵巢癌组织中的预后价值也受到了广泛关注[5]。为此，本研究通过比较卵巢癌与卵巢良性病变患者以及卵巢癌不同临床分期、预后的生物学标志物与外周血细胞水平，筛选出用于卵巢癌早期诊断与预后评估的重要生物标志物。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2018年1月至2019年4月沧州市中心医院收治的卵巢癌患者140例为观察组，年龄34～65岁，均经临床、组织病理、免疫组织化学、影像学等检查确诊；其中国际妇产科协会(FIGO)临床分期Ⅰ期15例、Ⅱ期21例、Ⅲ期45例、Ⅳ期59例，预后病情完全缓解21例、部分缓解37例、病情稳定48例、疾病进展34例。纳入标准：1)基本情况可，预期生存期超过6个月；2)原发肿瘤尚未发生转移；3)泌尿生殖系统无严重疾病史或手术史者。排除标准：1)严重内科基础疾患如冠心病、心力衰竭等；2)肝肾功能不全者；3)合并其他器官恶性肿瘤者。

选择同期在本院因卵巢良性病变行手术切除患者140例为对照组，年龄34～63岁。

2组患者的年龄、空腹血糖、体重指数(BMI)、受教育年限等资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，观察组Karnofsky功能状态评分(KPS评分)显著高于对照组(P<0.01)，见表1。

表1 2组一般资料比较

1.2 检测方法

采用含有促凝剂的真空采血管，抽取受检者空腹血3～4 mL，离心分离血清，采用化学发光微粒子免疫分析技术，ArchitectI2000全自动发光免疫分析与专用配套试剂(美国雅培公司)检测癌胚抗原(CEA)；应用上海科威生物科技有限公司提供的HD-2001A生物芯片检测仪检测CA125、糖类抗原724(CA724)；采用酶联免疫吸附法检测HE4、白介素-6(IL-6)、白介素-17(IL-17)。入组患者均禁食12 h后采静脉血，血常规检测外周血WBC计数、CD8+计数、CD4+计数，并计算CD4+/CD8+比值。

1.3 观察指标

比较2组各生物标志物(包括HE4、IL-6、IL-17、CA125、CA724、CEA等)含量与外周血细胞计数情况(包括WBC、CD8+、CD4+计数和CD4+/CD8+比值)；比较观察组不同FIGO临床分期患者各生物标志物含量与外周血细胞计数；比较观察组不同预后患者各生物标志物含量与外周血细胞计数。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 2组生物标志物含量比较

观察组HE4、IL-6、IL-17、CA125、CA724、CEA指标含量均显著高于对照组(P<0.01)，见表2。

表2 2组生物标志物含量比较

2.2 2组外周血细胞计数比较

观察组WBC、CD8+计数显著高于对照组(P<0.01)，CD4+计数和CD4+/CD8+比值显著低于对照组(P<0.01)，见表3。

表3 2组外周血细胞计数的比较

2.3 卵巢癌患者不同FIGO临床分期生物标志物含量比较

卵巢癌不同FIGO临床分期患者各生物标志物含量比较差异均有统计学意义(P<0.01)，且随着临床分期级别的升高，HE4、IL-6、IL-17、CA125、CA724、CEA含量均呈增加趋势，见表4。

表4 卵巢癌不同FIGO临床分期生物标志物含量的比较

2.4 卵巢癌患者不同FIGO临床分期外周血细胞计数比较

卵巢癌不同FIGO临床分期患者外周血细胞计数各指标比较差异均有统计学意义(P<0.01)，且随着临床分期级别的升高，WBC、CD8+计数呈增加趋势，CD4+计数、CD4+/CD8+比值呈降低趋势，见表5。

表5 卵巢癌不同FIGO临床分期外周血细胞计数比较

2.5 卵巢癌患者不同预后生物标志物含量比较

卵巢癌不同预后患者各生物标志物含量比较差异均有统计学意义(P<0.01)，且预后越差，HE4、IL-6、IL-17、CA125、CA724、CEA含量越高。见表6。

表6 卵巢癌不同预后生物标志物含量的比较

2.6 卵巢癌患者不同预后外周血细胞计数比较

卵巢癌不同预后患者外周血细胞计数各指标比较差异均有统计学意义(P<0.01)，且预后越差，WBC、CD8+计数越高，CD4+计数、CD4+/CD8+比值越低。见表7。

表7 卵巢癌不同预后外周血细胞计数比较

3 讨论

卵巢癌是导致女性死亡的常见恶性肿瘤之一。其特点包括发病率高、死亡率高、早期诊断困难、5年生存率低、易转移和复发。据统计[6]，卵巢癌患者FIGO临床分期Ⅰ期5年生存率约为90%，Ⅳ期生存率约为13%。目前，对于卵巢癌的临床治疗还没有特别有效的方法。卵巢癌的早期诊断是决定患者生存的最重要因素。

有研究[7]显示，CA125水平与卵巢癌的大小和分期、预后密切相关，预后越差，血清CA125水平越高，表明CA125可用于术后疾病监测，以确定患者是否有复发和转移的迹象。CA724对浆液性囊腺癌的敏感性低于CA125，但对黏液性囊腺癌有较高的诊断价值。术后CA724水平是否有助于判断预后尚不清楚[8]。HE4是人类附睾上皮细胞中的一种因子，被认为是一种与精子成熟相关的特异性附睾蛋白。有研究[9-11]表明HE4在不同组织中有不同的表达。在正常女性中，HE4在唾液腺、近端气管上皮和生殖道中低表达，但在正常卵巢组织中不表达。IL-6与多种病理状态有关。作为细胞因子之一，它能直接影响体内血管生成过程和内皮细胞的迁移与增殖，能有效提高卵巢癌细胞的存活率及肿瘤组织和腹水中的免疫细胞的浸润过程从而提高患者对化疗的抵抗力。IL-6水平的升高在肿瘤的发生发展中起着重要作用[12-16]。IL-17可以通过多种细胞因子的协同作用来增强炎症反应。IL-17可通过血管内皮生长因子诱导血管生成，上调成纤维细胞的分泌，从而促进肿瘤细胞的转移和生长[17-20]。CEA作为一种广谱肿瘤标志物，常被用于肺癌、肝癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌等恶性肿瘤的临床诊断。在许多肿瘤患者的血清中高表达[21]。本研究结果显示，观察组HE4、IL-6、IL-17、CA125、CA724、CEA指标含量显著高于对照组，Ⅳ期患者HE4、IL-6、IL-17、CA125、CA724、CEA指标含量显著高于Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期患者，疾病进展患者HE4、IL-6、IL-17、CA125、CA724、CEA指标含量显著高于完全缓解、部分缓解、病情稳定患者，表明HE4、IL-6、IL-17、CA125、CA724、CEA指标含量对卵巢癌的临床治疗具有重要指导意义。

免疫功能是指机体对疾病的抵抗力，机体的免疫功能是在淋巴细胞、单核细胞和其他有关细胞及其产物的相互作用下完成的，也是肿瘤微环境的重要组成部分[22]。健康人体的免疫功能包括对外界传染源的免疫保护功能，机体清除受损细胞的能力和维持内部环境的稳态，能够及时发现和清除细胞[23]。人体免疫主要包括细胞免疫和体液免疫，以细胞免疫为主。有研究[24-27]表明，T淋巴细胞在免疫耐受和肿瘤免疫逃逸中均起重要作用，主要表现为CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平下降，CD8+水平升高。因此，通过测定T淋巴细胞水平可反映肿瘤微环境的免疫情况。本研究结果显示，观察组患者WBC、CD8+计数显著高于对照组，CD4+计数和CD4+/CD8+比值显著低于对照组；Ⅳ期患者WBC、CD8+计数显著高于Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期患者，CD4+计数和CD4+/CD8+比值显著低于Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期患者；疾病进展患者WBC、CD8+计数显著高于完全缓解、部分缓解、病情稳定患者，CD4+计数和CD4+/CD8+比值显著低于完全缓解、部分缓解、病情稳定患者。结果表明，关注卵巢癌患者外周血中CD4+/CD8+比值对其治疗重要意义。

综上所述，生物标志物HE4、IL-6、IL-17、CA125、CA724、CEA以及外周血中CD4+/CD8+比值可用于卵巢癌早期诊断和预后评估。本研究创新之处在于，基于对象患病情况、临床分期、预后，深入比较各组对象的外周血细胞计数、生化指标含量。但是该研究亦有一定局限性，首先，单中心研究纳入病例数相对较少，缺乏大规模流行调查数据支持；其次，本研究仅对各项指标进行了单因素比较分析，尚未结合回归模型对多个因素联合应用结果进行评估，后续研究将在该结果基础上进行进一步的研究。