不同厂家益心酮分散片中牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷含量测定

冯 超 史煜华 张文婷*

(1.杭州康仑中药饮片有限公司，杭州 311100；2.浙江省食品药品检验研究院，杭州 310052)

山楂叶提取物是蔷薇科植物山里红Crataegus pinnatifida Bge.var.major N.E.Br.或山楂 Crataegus pinnatifida Bge. 的干燥叶经加工制成的提取物[1]。其主要药效组分为黄酮类成分，现代药理研究表明该黄酮类成分具有抗心肌缺血性损伤[2]、 非酒精性脂肪性肝病肝细胞抗氧化、降压和心脏保护[3]、抗脑缺血和调节脂质代谢[4]、镇痛和抗炎[5]等作用，临床上用于治疗冠心病、冠状动脉供血不足，心绞痛等心脑血管疾病[6，7]。

益心酮分散片为是以山楂叶提取物为原料制成的单方制剂，是益心酮片的剂改品种，该药具有活血化瘀、宣通血脉的功效。目前该制剂全国已有4家企业获得批准文号并生产，均执行其注册标准，质量标准收载内容各不相同。本研究参照2015版《中国药典》一部中有关山楂叶提取物、益心酮片的相关质量标准，建立益心酮分散片中牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷含量测定方法，并对现有收集到的3家生产企业12批样品进行了测定了,以期为益心酮分散片的质量标准统一提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

Agilent 1260系列高效液相色谱仪(G1312B 1260四元泵，G1329B 1260自动进样仪，G1316A 1260柱温箱，G4212B 1260DAD检测器，Chemstation色谱工作站),色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18(5μm，4.6×250mm)；XA-105型万分之一微量电子天平(瑞士梅特勒)；超纯水器 ：Milli-QA10型超纯水处理系统(美国密理博)；DS-8510DTH型数控超声波清洗机(昆山超声仪器)。

牡荆素鼠李糖苷对照品由中国药品生物制品检定所提供 (批号111668-200602，供含测用)，牡荆素葡萄糖苷对照品由中国药品生物制品检定所提供 (批号111979-201501，含测用，纯度：92.8%)，甲醇、乙腈和四氢呋喃为色谱纯(美国 MERCK 公司)，其它试剂均为分析纯，购自杭州双林化工试剂有限公司。

1.2 方法

色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18(5μm，4.6×250mm)；流动相：四氢呋喃-甲醇-乙腈-乙酸-水(38∶3∶3∶4∶152)；检测波长为360nm，柱温30℃。

1.3 溶液配制

1.3.1对照品溶液的制备

取牡荆素葡萄糖苷对照品、牡荆素鼠李糖苷对照品适量，精密称定，加60%乙醇制成每1mL分别含41.57μg、118.74μg的混合溶液，即得。

1.3.2供试品溶液的制备

取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于山楂叶提取物25mg)置25mL量瓶中，加60%乙醇适量振摇使山楂叶提取物溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

1.3.3空白溶液的制备

分别取不同厂家的辅料，按1.3.2项供试品制备方法制备阴性对照溶液。

1.3.4线性关系考察

精密吸取对照品混合溶液(牡荆素葡萄糖苷41.57μg/mL，牡荆素鼠李糖苷118.74μg/mL )1、2、5、10、12、15μL注入液相色谱仪。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件确定

由于山楂叶提取物中主要含有牡荆素葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷、金丝桃苷等黄酮苷类成分，其中以牡荆素葡萄糖苷和牡荆素鼠李糖苷所占比例较高[8,9]。因此选取牡荆素葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷来作为指标性成分。在不同品牌色谱柱和柱温比较中发现柱温过高使牡荆素葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷的出峰时间提前，分离度降低，综合柱效和分析时间考虑，其柱温应控制在20～30℃。

取制备好的混合对照品溶液、供试品溶液和空白对照溶液，分别注入液相色谱仪，结果显示在此色谱条件下能达到很好分离结果，辅料无干扰，见图1。

2.2 标准曲线

取线性考察结果所记录峰面积，以色谱峰面积(Y)对进样量(X)进行回归，计算回归方程，牡荆素葡萄糖苷的线性方程为Y=1.9256X+12.261，r2=0.9997，牡荆素鼠李糖苷的线性方程为Y=1.8881X+10.907，r2=0.9999说明牡荆素葡萄糖苷在进样量41.57～623.55ng范围内有良好的线性关系，牡荆素鼠李糖苷在进样量118.74～1781.1ng范围内有良好的线性关系。

2.3 精密度

精密吸取对照品混合溶液连续进样6次，记录峰面积，结果牡荆素葡萄糖苷峰面积的RSD为1.0%，牡荆素鼠李糖苷峰面积的RSD为0.7%，表明仪器进样精密度良好。

图1 益心酮分散片HPLC色谱图A.混合对照品溶液;B.益心酮片;C.辅料，1.牡荆素葡萄糖苷;2.牡荆素鼠李糖苷横坐标为保留时间(min)，纵坐标为色谱峰响应(mAU)

2.4 重复性

取同一批供试品(厂家2，批号：160204)6份，按供试品溶液制备方法制备，测定并计算含量，结果牡荆素葡萄糖苷平均含量为5.52 mg/g，RSD为2.0%，牡荆素鼠李糖苷平均含量为21.52 mg/g，RSD为2.0%，

2.5 加标回收率

精密称取供试品(厂家2，批号：161204)6份，分别精密加入对照品溶液适量，按正文供试品制备法制备，并依法测定，结果见表1，牡荆素葡萄糖苷平均回收率为98.22%，RSD为0.83%，牡荆素鼠李糖苷平均回收率为100.81%，RSD为0.86%。

表1 加样回收试验结果

2.6 稳定性

精密吸取同一份供试品溶液和对照品溶液，在16小时内，每间隔一定时间进样一次，结果牡荆素葡萄糖苷峰面积对照品溶液RSD为1.50%，供试品溶液为1.7%；牡荆素鼠李糖苷峰面积对照品溶液RSD为1.28%，供试品溶液为1.65%。表明供试品溶液和对照品溶液在16小时内基本稳定。

2.7 样品测定

对收集到的4家生产企业共12批益心分散片按拟定的方法进行测定，结果见表2。

表2 益心酮片样品测定结果(mg/片，n=2)

续表2

3 结论

本研究建立了益心酮分散片中牡荆素葡萄糖苷和牡荆素鼠李糖苷含量测定方法，进行了方法学验证，并对收集到的在产的4家生产企业共12个批次的样品进行测定，结果显示该方法重现性好，且四家企业的辅料皆无干扰，可用于益心酮分散片的质量控制，根据2015版《中国药典》中益心酮片含量限量，所测12批样品皆符合规定，但不同厂家产品含量差异较大,可能是由于不同企业所使用不同批次原料药或制剂工艺差异所致，因此，加强中药的质量控制具有重要意义。