腐烂茎线虫（Ditylenchus destructor Thorne，1945）生物学研究进展

赵洪海 梁晨 张浴 段方猛 宋雯雯 史倩倩 黄文坤 彭德良

（1. 青岛农业大学植物医学学院 山东省植物病虫害综合防控重点实验室，青岛 266109；2. 中国农业科学院植物保护研究所 植物病虫害生物学国家重点实验室，北京 100193）

腐烂茎线虫（Ditylenchus destructorThorne，1945），英文通用名译为马铃薯腐烂线虫、块茎腐烂线虫或马铃薯块茎线虫［1-4］，在我国又被称作马铃薯腐烂茎线虫、甘薯腐烂线虫、马铃薯茎线虫等［5-8］，在动物界的分类地位是：线虫门（Nematoda）、色矛纲（Chromadorea）、色矛亚纲（Chromadoria）、小杆目（Rhabditida）、垫刃亚目（Tylenchina）、垫刃下目（Tylenchomorpha）、宫外翻总科（Sphaerularioidea）、粒科（Anguinidae）、茎线虫属（Ditylenchus）［9-10］。茎线虫属由Filipjev（1936）建立，是植物线虫中最复杂且种类鉴定最困难的属之一［2，11-13］，虽有近200个名义种已被描述，但约半数被后来的学者视为无效种，目前有效种约有90种，具体数量尚难确定［11-14］。该属多数种类是食真菌性的，部分为高等植物的寄生物，其中腐烂茎线虫、起绒草茎线虫［D. dipsaci（Kuhn，1857）Filipjev，1936］、水稻茎线虫［D. angustus（Butler，1913）Filipjev，1936］和非洲茎线虫（D. africanusWendt et al.，1995）等为农业上的重要有害生物［2-3］。

腐烂茎线虫与起绒草茎线虫和非洲茎线虫均存在派生关系［1，15］。起绒草茎线虫最早由Kuhn（1957）在德国起绒草（Dipsacus fullonum）上发现，是茎线虫属的模式种和一个极其复杂的复合种［2，4，16-17］；与腐烂茎线虫相关的最早记载，可以追溯到1888年Kuhn在德国对马铃薯块茎腐烂病（“Wurmfaule”）的描述，该病病原在1945年之前一直被认为是起绒草茎线虫［1，18-20］；但1945年Thorne［1］对发生在美国爱达荷州侵染马铃薯的茎线虫群体进行形态比较之后，将其鉴定为不同于起绒草茎线虫的一个新种，即腐烂茎线虫。1988年，Jones 和 De Waele［21］在南非发现“腐烂茎线虫”侵染花生果荚和种子，之后几年中，南非花生上“腐烂茎线虫”群体的侵染特点、寄主范围和发育温度等得到广泛研究［22-27］；但1995年Wendt等［15］基于形态学和rDNA的RFLPs特征，将侵染南非花生的茎线虫鉴定为不同于腐烂茎线虫的一个新种，即非洲茎线虫。因此，早期记载的侵染马铃薯的起绒草茎线虫可能是腐烂茎线虫，而南非花生上“腐烂茎线虫”的生物学不适用于腐烂茎线虫。

腐烂茎线虫在世界范围内主要为害马铃薯（Solanum tuberosum）、甘薯（Ipomoea batatas）、大蒜（Allium sativum）等作物［3-4］。二十世纪50到70年 代，腐烂茎线虫是欧洲和美国马铃薯上的重要有害生物，之后约30年中除对中国甘薯和日本大蒜的危害之外鲜有报道，但进入二十一世纪后在爱沙尼亚等地又重新成为大问题［3，28-30］，在我国也开始出现为害马铃薯的情况［7，31-33］。腐烂茎线虫是我国甘薯上最具毁灭性有害生物之一，造成毁种绝收时有发生，被列为全国农业植物检疫性有害生物［34-37］。腐烂茎线虫一直是日本大蒜上的重要病害［38-40］，在我国大蒜上也存在发生风险［33］。腐烂茎线虫在马铃薯田持续存活性问题不甚明确［19，29，41-44］，它对不同作物的侵染危害表现也存在差异。据此，本文对腐烂茎线虫的地理分布、寄主范围、生殖发育、侵染循环、环境适应和存活致病相关机制等进行综述，旨在为腐烂茎线虫的研究及其监测预警和有效防控提供见解思路和有用参考。

1 腐烂茎线虫的地理分布

腐烂茎线虫在世界上主要分布在温带地区，目前发生在5大洲的42个国家，包括欧洲的德国、爱沙尼亚、白俄罗斯等27个国家，北美洲的美国、加拿大和墨西哥，亚洲的中国、日本、韩国、巴基斯坦、伊朗、沙特阿拉伯、哈萨克斯坦、吉尔吉斯斯坦、塔吉克斯坦和乌兹别克斯坦，大洋洲的新西兰和非洲的南非［3，45-46］。在欧洲和北美洲主要为害马铃薯，在中国主要为害甘薯，在日本主要为害大蒜，在南非有侵染观赏植物蛇鞭菊（Liatris spicata）的记 载［3-4］。腐烂茎线虫被53个国家列为限定性有害生物［47］，在澳大利亚被评估为5种最高生物安全风险植物线虫之一［48］，目前被20多个国家和植物保护组织（如APPPC、EU、PPPO）列为检疫性有害生物［45］。腐烂茎线虫被我国列为进境植物检疫性有害生物和全国农业植物检疫性有害生物［8，49］。根据农业农村部的数据，腐烂茎线虫在我国的分布行政区为北京、河北、内蒙古、辽宁、吉林、黑龙江、安徽、山东、河南、陕西等10个省（自治区、直辖市）的73个县（市、区）［50］，在江苏、甘肃、山西等省也有发生的记载［36，51-53］。腐烂茎线虫在我国的河南、山东、河北、安徽等省发生危害面积较大，主要为害甘薯，其次是马铃薯和当归（Angelica sinensis）［37，52，54］。

2 腐烂茎线虫的寄主范围

腐烂茎线虫是高等植物的专性寄生物，除侵染植物外，还能取食真菌菌丝体，拥有植物和真菌两类寄主。

2.1 植物寄主

腐烂茎线虫可以侵染的作物和杂草种类远远超过100种，在农林生产上受侵害较重的主要是块茎、鳞茎/球茎、块根和肉质直根类作物［3，29］，包括马铃薯、甘薯、大蒜、当归、胡萝卜（Daucus carota）、甜 菜（Beta vulgaris）、啤酒花（Humulus lupulus）、西洋参（Panax quinquefolium）、鳞茎鸢尾（Irisspp.）、大丽花（Dahliaspp.）等［4，55-56］。比较重要或报道较多的杂草寄主有田野薄荷（Mentha arvensis）、苣荬菜（Sonchus arvensis）、沼生水苏（Stachys palustris）、大车前（Plantago major）、酸模（Rumexspp.）等，其中田野薄荷尤其重要［41，56］。遗憾的是，除马铃薯、甘薯、大蒜、鳞茎鸢尾、当归、甜菜、田野薄荷等10余种植物因支持腐烂茎线虫大量繁殖而被普遍认为是适合寄主外，其他“寄主植物”被记载为寄主，大多是基于腐烂茎线虫在其体内发生的定性观察，缺乏鉴定寄主适合性的线虫繁殖系数等数据信息［57-58］，也存在已记载寄主（如苣荬菜）不被侵染的报道［57］。因此，腐烂茎线虫的植物寄主范围是不完全的，而一些已记载寄主的适合性尚需进一步明确［19，29，44］。我国幅员辽阔，农田杂草种类繁多，但有关腐烂茎线虫杂草寄主的调查研究鲜有报道。

2.2 真菌寄主

腐烂茎线虫可以在70多种真菌上生长繁殖，主要的真菌寄主有尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）、灰葡萄孢（Botrytis cinerea）、青霉菌（Penicilliumspp.）、立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）、印度毛壳（Chaetomium indicum）、绿色木霉（Trichoderma viride）、毛霉（Mucorspp.）等［2，4，19，59］，它可以取食香菇的菌丝体而引起香菇病害［60］。腐烂茎线虫在有真菌共存时群体常常增殖迅速，而在贮藏期它对马铃薯、大蒜等危害的加重，与真菌的二次侵染密切相关［61-63］。某些真菌菌剂对腐烂茎线虫的生物防治出现失败，可能与该线虫的食真菌习性有关［64］。

3 腐烂茎线虫的生殖发育

腐烂茎线虫为雌雄异体，两性生殖，具有一套2n为44-48的染色体［16］，虫态分为卵、1-4龄幼虫和成虫（雌虫和雄虫）。雌虫繁殖力强，每头产卵多达250个［65］。最后一次蜕皮之后，雌虫的性接受期约为1周，而雄虫保持交配能力至少3周。每24 h年轻雌虫通常产6个未分裂卵，最多12个，而较老雌虫仅产1-2个，其体内偶尔存在已经发生卵裂和胚胎发育的卵。从第一次卵裂到1龄幼虫发育完成约需48 h，2龄幼虫从形成到破壳孵出约需3 d，在3龄幼虫期即可辨别其性别［66-67］。4龄幼虫蜕皮初期，新口针起源于位于原口针基杆处以3个角质化环为标志的原基区，而不是垫刃线虫中通常的起源部位—口腔壁［67］。

在已报道的杂交试验中，腐烂茎线虫不同寄主和地理来源的群体间杂交产生可育的后代，但与起绒草茎线虫或食真菌茎线虫（D. myceliophagus）存在生殖隔离［16，68-70］。

4 腐烂茎线虫的侵染循环

腐烂茎线虫是植物迁移性内寄生线虫，其侵染循环涉及线虫的存活、侵入扩展、传播扩散等环节。

4.1 存活和初侵染源

腐烂茎线虫需要存活（包括越冬、越夏）来渡过田间没有作物寄主的时期，为新的侵染保存和提供接种体。腐烂茎线虫可以通过成虫、幼虫或卵在土壤、粪肥中或多年生杂草地下组织内越冬，通过取食杂草寄主或可能的土壤真菌而以寄生方式存活［71-72］； 受侵染的马铃薯块茎、甘薯块根、大蒜和鸢尾鳞茎等，是极其重要的存活越冬场所［29，36，39，73］。 尽管不少学者认为土壤栖息真菌对腐烂茎线虫的存活和消长有影响，但是缺乏该线虫在土壤中取食利用真菌的直接证据［29，64］。

腐烂茎线虫主要依赖寄主植物在土壤中生长繁殖，因其不能像起绒草茎线虫那样形成“线虫绒”而进入自我保护的低湿隐生状态，在田间缺少寄主植物的情况下，它在土壤中能否长期持续存活是个倍受关注的问题，但已有研究的结果不太一致，原因不够明确［28-29，41-44］。田间没有寄主植物的情况下，有研究认为土壤中腐烂茎线虫可持续生存3年［29］，MacGuidwin等［44］报道线虫可存活至少6周。受植物寄主和可能存在的真菌寄主的可利用性、土壤条件、拮抗生物、气候条件等多因素影响，腐烂茎线虫的存活期限无法准确判定，但它可能在农田土壤中以低群体密度水平长期存在，而低密度群体通常造不成可察觉的作物损害［29］。马铃薯连续数年种植和正常收获模式下，存在腐烂茎线虫逐年消减而不能在田间持续存在的现象，究其原因，主要是块茎的每次收获导致作为块茎寄生物的线虫大部分被从田间移除，而田间的残留块茎和杂草寄主（如田野薄荷）有助于线虫持续存在期的延长［29，42-43，71］。从感染腐烂茎线虫的马铃薯田块土壤中很难分离收集到该线虫，可能归因于线虫在土壤中的非常规分布（位置深或高度密集）［44］，而另一个可能原因是线虫主要在块茎内寄生而很少进入土壤。本研究团队自2016年以来的田间调查发现，一些腐烂茎线虫严重发生的马铃薯田，接茬或重茬种植的马铃薯上该线虫只是轻微发生；而一些常年种植小麦、玉米的田块，第一年种植马铃薯健康种薯却出现腐烂茎线虫严重发生的情况，其初侵染源来自何方令人费解。甘薯和大蒜连续种植和正常收获模式下，未见腐烂茎线虫逐年明显消减的报道，病田土壤是重要的初侵染源，从中不难分离得到线虫［34，40］，究其原因，可能是甘薯和大蒜收获时线虫随病组织被留滞在土壤中的数量较多。

4.2 侵入与扩展

腐烂茎线虫主要为害寄主植物的地下部分，如块茎、鳞（球）茎、块根、根状茎和肉质直根等，在不同作物上，其具体侵染部位、侵入途径和损害表现有差异。在马铃薯上，该线虫主要侵害块茎，偶尔侵染匍匐茎和地下茎，极少侵入根系，通常从皮 孔和芽眼侵入发育中的块茎（直径约2-4 cm）［19，73］， 尽管与匍匐茎相连的块茎基部侵染点较多［2，73］，但经匍匐茎侵入块茎的说法应该不常见；侵入后，线虫在块茎皮下方的4-5个周皮细胞间穿行取食，导致细胞崩解，形成 “白垩状”或“蜂窝状”的空腔，腔内有细胞壁残余和少量淀粉颗粒；群体增加后线虫可扩散进入相邻组织，产生另外的空腔，直到形成隧道和空腔构成的网格系统；空腔外的块茎皮则出现青褐色病斑，稍微凹陷，常开裂；病部可被真菌、细菌、螨类等二次侵染，真菌定殖后线虫能够大量发生，而细菌和螨类入侵后，线虫很少存在［19，61］。微生物的二次侵染，是受线虫侵染的马铃薯块茎在贮藏期发生腐烂的主要原因。

在甘薯上，源自病块根或植株的秧苗可携带腐烂茎线虫，移栽后常直接引发严重发病［34-36］。土壤中的腐烂茎线虫，主要从秧苗的下部末端伤口侵入，侵入后线虫可向上扩展至地下茎、地上茎（最远可达地面以上9 cm）和不定根，中后期扩展进入块根，偶尔侵染叶柄，未见侵染须根的报道［74-77］。人工表皮接种后腐烂茎线虫可侵染块根，但仅在表皮层积累为害，引起糠皮症状［78-79］。受害后，主蔓茎基部内部变褐糠心、外部出现褐色龟裂斑块；块根整个内部组织崩溃离析，呈褐白相间的干腐糠心状；糠皮症状以块根表面的龟裂褐斑为特征，与马铃薯受害状类似［34-36］。线虫侵入前，可能受到甘薯地下不同部位所含或所分泌物质的吸引或排斥［74，80］。在大蒜上，腐烂茎线虫侵染蒜根、基盘和蒜皮，并从外皮经由内皮扩展到蒜瓣，大蒜鳞茎中的甲基蒜氨酸（methiin）对线虫有很强的吸引作用［40，81］。在鳞茎鸢尾上，线虫从基盘发根处侵入，扩展进入鳞茎和根系，并侵染子鳞茎，土壤中的线虫偶尔直接侵染根系［82］。在甜菜上，线虫主要从根颈及其邻近部位侵入［83］。由此可见，与马铃薯相比，甘薯和大蒜受侵染的部位较多，收获时线虫更易随病组织留滞在土壤中，有助于田间线虫群体的保持，而腐烂茎线虫随病残组织或种植材料在土壤中的遗留或投放，对于该线虫在田间的持续存在和严重危害将是至关重要的［43］。

4.3 传播与扩散

腐烂茎线虫主要通过受侵染的块茎、鳞（球）茎、块根、根状茎、肉质直根、秧苗等进行远距离传 播［3，8，29，46］，故而许多国家实施植物检疫措施对其进行管控。尽管首要的防控措施是生产和种植健康的马铃薯种薯、甘薯秧苗和大蒜种蒜等无性繁殖材料，但貌似健康的种植材料可能已被线虫侵染，而有的种植者有自留种习惯，这些均增加了检疫监管的难度［28-30］。

田间定殖后，腐烂茎线虫主要通过导致土壤移动的农事操作进行被动扩散。尽管线虫在土壤中能够借助蠕动而主动扩散，但距离有限，一般不超过1 m［29］。虽然尚无直接证据，但腐烂茎线虫随粪肥进行短距离扩散的可能性是存在的，特别是混有受侵染植物残体的土杂肥。

4.4 世代历期

腐烂茎线虫生活史短，记载的最短世代历期为15 d［65］。在适宜条件下完成一代通常需要18-26 d，在前苏联（现哈萨克斯坦）阿拉木图地区的一个马铃薯生长季可发生6-9代［2-3，84］。在我国马铃薯、甘薯和日本大蒜上，未见世代历期和发生代数的报道。

5 腐烂茎线虫的环境适应性

土壤温度和湿度对腐烂茎线虫的存活、发育、侵染和繁殖影响最大。Decker从大多来自前苏联（USSR）的数据概括出，腐烂茎线虫在5-34℃下均可发育和繁殖，最适温度为20-27℃［2，84］。Ladygina等报道，马铃薯上该线虫完成1代在27-28℃下需 要18 d，20-24℃下26 d，6-10℃下68 d［2，84］。 Mutua［84］采用气候室盆栽试验测定较低温度（夜间13℃和白天16℃）、中等温度（夜间17℃和白天20℃）和较高温度（夜间16℃和白天26℃）对马铃薯上腐烂茎线虫发生和危害的影响发现，中等温度处理下腐烂茎线虫繁殖最好、对马铃薯损害最大；较低和较高温度处理下线虫也能造成明显的块茎损害；较高温度下线虫群体密度较低，且幼虫为优势虫态。该线虫在15-20℃和相对湿度90%-100%条件下，对马铃薯的损害最重，脱离寄主组织的线虫在低于40%的相对湿度下不能存活［2，29］。在乌克兰，腐烂茎线虫对马铃薯的危害在早晨17-20℃和白天20-24℃状况下最重，并随土壤湿度由40%到80%的上升而逐渐加重［85］。Ryss试验发现40%、60%和80%土壤相对湿度下，马铃薯块茎的受害率分别为11%、63%和93%［2-3］。在农田土壤经常出现15-20℃和相对湿度超过90%的地区，腐烂茎线虫将成为马铃薯的重要有害生物［46］。

在腐烂茎线虫耐干燥（脱水）和低温能力方面存在不一致的观点［2］。Ladygina发现该茎线虫在-28℃下能够存活；Makarevskaya观察到植物组织内的腐烂茎线虫在-2℃下能存活，在-4.5℃下则被杀死［2］。Svilponis等［86］研究发现，处于水、沙砾、马铃薯块茎和M9缓冲液中的腐烂茎线虫，-5℃处理24 h后，死亡率分别为97%、94%、32%和31%；马铃薯块茎中的腐烂茎线虫处理24 h后，-15℃下成虫全部死亡，-30℃下仍有少数2龄幼虫存活，成虫、J4和低龄幼虫死亡率为90%的预测致死温度（LT90）分别是-7.4℃、-9.4℃和-14.5℃，成虫和4龄幼虫的耐冷性明显不如低龄幼虫。王宏宝等［87］发现，不同地理来源甘薯块根内的腐烂茎线虫，在-20℃和-70℃下处理180 d，存活率分别为11%-49%和5%-19%，而甘油和细沙介质中的线虫经低温处理后均未见存活。Ustinov等曾提到腐烂茎线虫的卵可进入低湿休眠状态［86］。来自山东的调查发现，当甘薯块根含水量降至12.8%时，大部分线虫仍可存活［34］。尽管如此，多数信息指向腐烂茎线虫不耐干燥［20，39，72，82］，这可能也是与干燥有协同效应的高温不利于该线虫发生和存活的原因。鸢尾病鳞茎在43.6℃温水中浸泡3 h，腐烂茎线虫可被有效控制［46］。直径9 cm的甘薯块根在42℃温箱放置24 h，内部线虫全部死亡［34］。大蒜鳞茎在34-36℃下干燥处理12-17 d，内部线虫数量明显下降［39］。由此看来，腐烂茎线虫喜凉怕热、喜湿怕干；与游离在土壤中的相比，薯块等植物组织中的腐烂茎线虫表现出较强的耐低温和抗干燥能力。

土壤理化性质对腐烂茎线虫影响的相关报道不多［29］。甘薯腐烂茎线虫病在质地疏松、透气性好的沙质土上发病重，在黏质土上发病轻［34，36］。

6 腐烂茎线虫的存活和寄生机制

作为植物寄生线虫世系最底层的种类，腐烂茎线虫尽管不能产生诸如“线虫绒”（起绒草茎线虫）、孢囊（孢囊线虫）、卵块（根结线虫）等自我保护性存活状态或结构，却能延续至今并屡屡给农业生产制造麻烦［4，37，56］。腐烂茎线虫的进化、存活和寄生适应性、侵染致病等应该有其独特的策略和分子机制，但这些方面的研究不多。

黄文坤等［88］利用简单重复序列区间（ISSR）分子标记对来自我国不同省的5个腐烂茎线虫群体进行研究发现，遗传距离与地理距离成正相关关系，该线虫对低温具有较强的适应性。Ma等［89］通过转录组分析，比较了腐烂茎线虫响应寒冷和干燥胁迫的基因表达谱，验证了抗寒相关基因的功能。Peng等［90］对源于腐烂茎线虫cDNA文库的ESTs（表达序列标签）测序发现，22个ESTs与已报道的线虫效应子有相似性，大多涉及寄主细胞壁降解或修饰。Peng等［91］还发现腐烂茎线虫的2个纤维素酶基因产物具有纤维素酶活性，对线虫寄生性起重要作用。Chen等［92］验证了腐烂茎线虫3个α-淀粉酶基因的功能，认为多拷贝的α-淀粉酶基因在线虫寄生甘薯中起关键作用。Zheng等［93］对腐烂茎线虫基因组研究发现，尽管大多数信号转导通路被保持，但核心发育控制过程出现大幅消减，推测茎线虫可能处于从取食真菌的自由生活线虫向专性植物寄生线虫进化的中间阶段。腐烂茎线虫的基因组、转录组和ESTs研究，对于解析其存活寄生机制和优化治理策略具有重要意义［94］。

不同寄主植物和地理来源的腐烂茎线虫群体在寄主和环境适应性上可能不同［19，29，87］，对马铃薯、甘薯等不同品种的寄生致病性也存在差异［95-98］。尽管不同群体存在寄主范围、致病性乃至某些形态特征的差异，但腐烂茎线虫种内迄今尚无生理小种被命 名 和 鉴 定［2，99］。Subbotin等［99］根 据rDNA-ITS1的二级结构差异，将腐烂茎线虫的78个群体划分成A-G型共7个基因型（单倍型）。我国迄今报道的腐烂茎线虫基因型以A型和B型为主，也有C型和F型以及A-G型以外类型（L型和S型）的报道［100-104］。遗憾的是，腐烂茎线虫不同基因型与其生存、寄生等生物学特性有无关联尚需明确；而在世界上如此多样的腐烂茎线虫群体中，发现生理小种乃至新种的可能性是存在的。

7 小结

基本明确的是，腐烂茎线虫喜凉怕热、喜湿怕干，在温带地区更具经济重要性；主要为害马铃薯、甘薯、大蒜等农作物，受侵染的种薯、种苗、种鳞茎等无性繁殖材料既是其主要的远距离传播途径，又是其定殖区主要的初侵染源，对群体持续和危害加重至关重要；主要从伤口或自然孔口侵入寄主植物，缺乏穿透寄主表皮直接侵入的能力。然而，腐烂茎线虫又具有明显的复杂性和不确定性，主要表现在：它兼具取食植物和真菌习性，寄主植物范围信息不完整，土壤栖息真菌和一些已记载寄主植物对其田间持续存活的作用不够明确；它在马铃薯田定殖后，在田间土壤中的存活持续性问题尚需解析；它对马铃薯、甘薯和大蒜的侵害特点明显不同，特别是在甘薯上引起的“糠心型”症状和地上部侵染在马铃薯和大蒜上罕见，在大蒜和甘薯上引起的根系侵染在马铃薯上未见发生；它群体多样性丰富，存在诸多不同的基因型。腐烂茎线虫处于真菌食性向植物专性寄生性进化的中间阶段，在系统发育关系上，它与专性寄生植物为主的起绒草茎线虫关系较远，而与寄生昆虫和取食真菌的隧蜂茎线虫（D. halictus）关系更近［93，105-106］，这也许能为理解其复杂性提供一些方向或线索。

腐烂茎线虫对多种作物为害严重或潜在威胁巨大，但人们对其生物学和生态学的认识不够全面，对其在一些作物上的发生发展难以预测，致使某些地区的马铃薯种植者饱受困扰。因此，有必要对腐烂茎线虫进行深入调查研究，重点应在以下两个方面：一是尽可能获得决定或影响线虫在土壤中持续存在的相关因子信息，诸如作物、杂草亦或真菌寄主的种类及其适合性、土壤温湿度临界条件等。二是比较不同寄主作物上线虫的侵染和为害特点，就明确而稳定的差异进行分子生物学解析。