十味止痒洗剂的质量标准研究

肖丽丽，潘磊

江西省皮肤病专科医院，南昌 330001

十味止痒洗剂来源于医院协定方开发的制剂，主要用于风湿热毒虫所致湿疹、神经性皮炎、丘疹性荨麻疹、夏季皮炎、瘙痒症、体股癣、手足癣、疥疮等瘙痒性皮肤病。该方临床使用多年，疗效确切，无明显不良反应，但协定方不便携带，无质量标准控制，故将该方开发为院内制剂。十味止痒洗剂主要由苦参、地肤子、蛇床子、黄柏、乌梢蛇、千里光等十味中药组成，方中君药苦参性寒味苦，长于清热燥湿、祛风杀虫［1］；方中地肤子性味苦寒，清热利湿、祛风止痒，蛇床子性温味辛苦，祛风燥湿、杀虫止痒，黄柏性味苦寒，清热燥湿，解毒疗疮，三药合用，助君药清热燥湿，祛风杀虫之功，俱为臣药。笔者通过查阅文献［2-6］和试验研究［7-9］，建立了十味止痒洗剂的质量标准。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

1260高效液相色谱仪［Agilent公司，Agilent Chemststion B.04.01（中文）工作站，1260 Quat Pump VL泵，1260 VWD VL检测器］；Sartorius BT125D型电子天平（d=0.01/0.1 mg，赛多利斯科学仪器北京有限公司）；HHS-21-4数显恒温水浴锅（室温+5 ℃～100 ℃，上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；UV-1800紫外分光光度计［江苏岛津（中国）有限公司］。

1.2 试剂

苦参碱对照品（批号：110805-201503）、蛇床子对照药材（批号：121148-201507）、蛇床子素对照品（批号：110822-201609）、盐酸小檗碱对照品（批号：110713-201613）、地肤子对照药材（批号：111522-201602）均购自中国食品药品检定研究院；十味止痒洗剂（批号：20170526、20170527、20170528，自制）；甲醇、乙腈为色谱纯；水为纯化水；其余试剂为分析纯。

2 方法

2.1 薄层鉴别

2.1.1 苦参鉴别 样品溶液：取十味止痒洗剂10 mL，加20 mL三氯甲烷萃取，重复三次，蒸干萃取后的三氯甲烷液，溶解于1 mL甲醇中；对照溶液：取苦参碱对照品3 mg，溶解于3 mL甲醇中；阴性溶液：取9味药材（苦参除外）按工艺制成样品，其余制法同样品溶液。照薄层色谱法点样在硅胶 G板上，展开剂为乙酸乙酯系统，适量加入甲醇和浓氨试液，溶液比例为20∶1∶0.5，喷稀碘化铋钾试液。结果与苦参碱色谱对应的位置上样品色谱显同样橙色点，阴性溶液未见，结果见图1。

图1 苦参薄层色谱图

2.1.2 蛇床子鉴别 样品溶液：取十味止痒洗剂20 mL，加20 mL乙醚萃取，重复3次，挥干萃取后的乙醚液，溶解于1 mL甲醇中；对照药材溶液：取对照药材（蛇床子）0.5 g，加纯化水30 mL，加热煮沸30 min，滤过，取滤液加20 mL乙醚萃取，重复3次，挥干萃取后的乙醚液，溶解于1 mL甲醇中；对照溶液：取蛇床子素对照品3 mg，溶解于3 mL甲醇中；阴性溶液：取9味药材（蛇床子除外）按工艺制成样品，其余制法同样品溶液。展开剂以甲苯和乙酸乙酯为溶液，溶液加入比例为9∶1，在紫外光灯254 nm下检视。结果对应位置对照药材、对照品与样品色谱斑点一致，阴性溶液未见，结果见图2,。

图2 蛇床子薄层色谱图

2.1.3 黄柏鉴别 样品溶液：同苦参鉴别样品溶液；对照溶液：取盐酸小檗碱对照品3 mg，溶解于3 mL甲醇中；阴性溶液：取9味药材（黄柏除外）按工艺制成样品，其余制法同样品溶液。展开剂以饱和正丁醇和水为溶液，再适量加入冰醋酸调节，溶液比例为7∶2∶1，在紫外光灯365 nm下检视。结果样品色谱对应位置上光点与盐酸小檗碱色谱一致，阴性溶液未见，结果见图3。

图3 黄柏薄层色谱图

2.1.4 地肤子鉴别 样品溶液：取十味止痒洗剂20 mL，加30 mL饱和正丁醇萃取，重复三次，蒸干萃取后的饱和正丁醇液，溶解于1 mL甲醇中；对照药材溶液：取对照药材（地肤子）0.5 g，加纯化水30 mL，煮沸20 min，滤过，滤液同样品溶液制法；阴性溶液：取9味药材（地肤子除外）按工艺制成样品，其余制法同样品溶液。照薄层色谱法点样在硅胶G板上，展开剂以三氯甲烷和甲醇为溶液，再适量加入水调节，溶液比例为16∶9∶2，显色剂喷10%硫酸乙醇试液碳化，日光下检视。结果显色剂未干时，样品色谱对应位置上显乳白色斑点与对照药材色谱一致，斑点吹风热干后，显色，阴性溶液未见。结果见图4。

图4 地肤子薄层色谱图

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件 Agilent C18反相色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为乙腈-甲醇-磷酸盐缓冲液（pH6.8）（16∶16∶68）；检测波长为220 nm；进样10 μL。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取苦参碱对照品12.51 mg，放置到50 mL容量瓶中，用甲醇溶解稀释，再从中吸取5 mL放置25 mL容量瓶中，用甲醇稀释至终浓度。

2.2.3 供试品溶液的制备 精密量取十味止痒洗剂3 mL至分液漏斗中，加纯化水20 mL，再加氨试液约4～5滴（pH=9～10），摇匀，再加三氯甲烷25 mL提取，重复提取5次，收集下层三氯甲烷液约70 ℃水浴上蒸干，用甲醇溶解蒸干后的残渣，放置25 mL容量瓶中至刻度。

2.2.4 阴性实验 先制成处方投料量（苦参除外）的阴性样品，其余制法同2.2.3项下制备。按2.2.1项下色谱条件，单独吸取上述三种液体用高效液相仪器测定。结果显示，阴性溶液中在苦参碱紫外吸收峰位置上未出现吸收峰，供试品溶液中苦参碱紫外吸收峰与对照品溶液相一致。色谱图见图5。

图5 溶液色谱图

2.2.5 精密度试验 取对照品溶液（50.04 µg/mL），按2.2.1项下色谱条件，重复测定7次，其峰面积的相对偏差RSD=1.53%，说明仪器精密度良好。

2.2.6 线性范围 取配制的对照品溶液（250.2 µg/mL）；从中精密量取1、3、5、10、25 mL，分别制成10.008、30.024、50.04、100.08、250.2 µg/mL浓度的对照品溶液，注入仪器测定，分别以苦参碱对照品的浓度（µg/mL）、峰面积为横坐标及纵坐标进行线性回归，回归方程为：Y=6.211 05X＋1.210 30（R2=1.000 00），表明苦参碱在10.008 µg/mL～250.2µg/mL浓度范围内与峰面积呈线性关系。

2.2.7 稳定性试验 取供试品溶液，按2.2.1项下色谱条件每隔2 h左右进样一次，记录峰面积并计算苦参碱含量，RSD=1.60%（n=7）结果表明十味止痒洗剂中苦参碱在12 h内无明显变化、稳定性好。

2.2.8 重复性试验 分别精密量取十味止痒洗剂（批号：20170526）样品制成6份供试品溶液测定，结果RSD为0.79%。

2.2.9 回收率试验 取十味止痒洗剂（批号：20170526）样品0.608 55 mg，精密加入苦参碱对照品0.636 0 mg，按2.2.3项下制成6组溶液测定。数据详见表1。

表1 回收率试验结果

2.2.10 样品测定 取十味止痒洗剂（批号：20170526、20170527、20170528），按照供试品的制备方法制成6组溶液，每个批号平行做2组，按2.2.1项下色谱条件进行测定，计算结果。见表2。

表2 样品的含量测定结果

3 讨论

薄层色谱法进行定性鉴别时，处方中连翘由于色谱上斑点不清晰，故放弃。在含量测定方法确定时，进行了不同色谱条件的比较、含量主成份的确定、检测波长的选择、不同萃取次数的比较、萃取液蒸干温度的考察等研究，最终确定了测定方法。为了能使临床使用多年、疗效确切的中药协定方可以更安全、有效、便捷的为广大患者使用，制定可行的质量标准势在必行。