冬凌草黄酮分散片含量测定方法研究

李 港 张 季 王新利 王亚男 石宗杨

1 河北大学药学院，保定，071000，中国

2 河北北方学院药学系，张家口，075000，中国

冬凌草（Herba Rabdosiae），也称冰凌草，药性偏寒，味道偏苦，有效药物成分种类非常多，达数十种，具有解表通里，清热解毒及预防细胞癌变的功能。冬凌草可与多种药用植物经科学的配方制成冬凌茶，由于此保健茶具有很好的保护嗓子的功效和一定的阻止消化道细菌繁殖的作用，所以它可以起到清咽润肺、保护消化道的作用。

冬凌草中含有大量的黄酮，而黄酮显示明显的抗肿瘤、抗癌细胞、抗类风湿关节炎、抗肺动脉高压以及防治糖尿病的作用。前期通过文献的阅读发现冬凌草制剂比较少，以冬凌草的黄酮提取液制备冬凌草黄酮分散片，为测定冬凌草黄酮分散片中黄酮含量建立紫外分光光度法对冬凌草黄酮分散片的质量进行控制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器

移液枪（1～10 μL、10～100 μL、100～1 000 μL）；电子天平，北京赛多利斯科学仪器有限公司；紫外分光光度仪UV-5500PC，上海元析仪器有限公司。

1.1.2 试剂

冬凌草黄酮分散片，自制；芦丁对照品，批号：100080-200718，购自中国药品生物制品检定所；纯水；乙醇（ethanol），购自成都科龙化工试剂厂；三氯化铝（chloride），购自成都科龙化工试剂厂。

1.2 方法

1.2.1 配置储备液

精密称取20.00 mg芦丁对照品，用75%乙醇，搅拌溶解，移至100 mL容量瓶中，超声15 min，静置10 min，然后定容至刻度，即可获得0.2 mg·mL-1的芦丁储备液。

1.2.2 配置AlCl3溶液

精密称取AlCl3粉末2.5 g，溶解后倒入250 mL容量瓶中，定容至刻度，得到1%AlCl3溶液。

1.2.3 建立标准曲线

分别精密吸取0.20 mg·mL-1的芦丁储备液0.05、0.10、0.30、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00 mL置 于8个10 mL容量瓶中，依次精密加入0.4 mL 1%的AlCl3溶液。混匀静置6 min，每个容量瓶中都加入75%乙醇至刻度，充分震荡，反复上下颠倒混匀，静置20 min，将每个容量瓶取样依次于410 nm处测吸光度，用计算机软件做回归直线，计算回归方程及R2［1-2］。

1.2.4 精密度实验

取同一样品溶液用紫外分光光度计在410 nm处测吸光度，测5次，得到吸光度后，把吸光度带入回归方程，得到样品浓度然后计算相对标准偏差（relative standard deviation，RSD）［3-5］。

1.2.5 重复性实验

取同一批次的冬凌草黄酮分散片，制备5份相同的样品，用410 nm波长的光测定这5份样品的吸光度，取均值，得到吸光度后，把吸光度带入回归方程，得到样品浓度然后计算RSD。

1.2.6 稳定性实验

取待测样品溶液依次于0、1、2、4、8、24 h用410 nm波长的光测其吸光度，得到吸光度后，把吸光度带入回归方程，得到样品浓度然后计算RSD。

1.2.7 加样回收率实验

取芦丁对照品，作为对照液，精密称取样品片剂粉末三份（含量分别为0.20、0.30、0.40 mg），分别加入盛有0.20 mg的芦丁对照品溶液和0.4 mL 1%AlCl3溶液的10 mL容量瓶中，用75%乙醇定容，混匀，静置20 min，吸取溶液用410 nm的光测其测吸光度，通过回归方程计算样品中黄酮浓度，计算平均回收率与RSD。

1.2.8 样品测定

取三批样品各10片，分别精密称重，计算平均片重，用研钵研细，精密称取相当于平均片重的药物细粉，加少量75%乙醇溶解后置于100 mL容量瓶中，加入1%的AlCl30.4 mL，混匀静置6 min，加75%乙醇至刻度定容，充分震荡，反复上下颠倒混匀，静置20 min，在410 nm处测吸光度，通过回归方程得到冬凌草黄酮分散片中芦丁的量，从而计算冬凌草黄酮分散片中芦丁的标示量百分含量。

1.2.9 溶出度实验

小杯法适用于小规格固体制剂，故采用此法测定此冬凌草黄酮分散片。在各溶出杯内加入150 mL蒸馏水作为溶出介质，待溶出杯内蒸馏水温度稳定在37℃后，各个溶出杯内分别放入供试品，迅速启动仪器，然后在第5、10、20、30、45 min，吸取溶出液5 mL，同时迅速补充5 mL 37℃的蒸馏水，此过程不能超过30 s。取澄清滤液，待所有取完，在410 nm处测其吸光度，通过回归方程计算样品中黄酮浓度及药物累计溶出百分比［6-7］。

2 结果

2.1 线性关系

吸光度作为Y轴，芦丁对照品浓度作为X轴，得到回归方程，回归方程为Y=28.388X+0.017 6，计算其R2，R2=0.999 4。得到的这些实验数据说明此芦丁标准品浓度与吸光度在0.001～0.080 mg·mL-1浓度范围内具有良好的线性关系（Fig.1）。

Fig.1 Standard Curve of Rutin

2.2 精密度实验

以精密度的实验方法得其RSD，RSD=0.45%（Tab.1）。

Tab.1 Table of precision experimental data

2.3 重复性实验

以重复性的实验方法得其RSD，RSD=1.90%（Tab.2）。

2.4 稳定性实验

以稳定性的实验方法得其RSD，RSD=2.30%（Tab.3）。

2.5 加样回收率实验

取芦丁对照品，作为对照液，精密称取样品片剂粉末三份（含量分别为0.20、0.30、0.40 mg），分别加入10 mL容量瓶中，分别加入0.20 mg的芦丁对照品溶液，分别加入1%AlCl3溶液0.4 mL，混匀静置6 min，加入75%乙醇定容至刻度，混匀，静置20 min，于410 nm处测吸光度，得到吸光度后，把吸光度带入回归方程，得到样品浓度，平均回收率为101.78%，100.27%，99.60%；RSD分别为1.83%，1.41%，2.84%；实验数据说明加样回收率良好（Tab.4）。

Tab.2 Table of repeatable experimental data

Tab.3 Table of stability test data

2.6 样品测定

利用紫外分光光度法测定冬凌草黄酮分散片中的黄酮含量，每片含量为2 mg，计算得到三批样品中黄酮的标示量百分含量分别为101.35%、99.10%、99.33%，平均含量为99.93%，三批间平均含量的RSD值为1.24%，表明三批间含量差异较小，本实验所建立的冬凌草黄酮分散片中黄酮的含量测定方法稳定、可靠、重复性强（Tab.5）。

2.7 溶出度实验

冬凌草黄酮分散片的溶出速度很快，在5 min时溶出药量的百分比达到76.7%，最终累计溶出86.20%。冬凌草黄酮分散片属于速释制剂（Fig.2）。

3 讨论

冬凌草具有很多的药理作用，但是由于冬凌草的味道不好，限制了它的临床应用，因为冬凌草的主要成分是黄酮，所以我们制备了冬凌草黄酮分散片，根据黄酮的结构特点，可以得出黄酮在紫外下的最大吸收波长为410 nm，而辅料在410 nm处几乎无吸收，所以选择410 nm作为黄酮的测定紫外吸收波长，通过回归方程计算样品中黄酮浓度，从而对冬凌草黄酮分散片进行含量测定。

Tab.4 Recovery data sheet of added samples

Tab.5 Table of sample determination test data

Fig.2 Dissolution of dispersible tablets of Herba Rabdosiae

黄酮的显色方法有亚硝酸钠法、三氯化铝法等，实验过程中亚硝酸钠法与三氯化铝法分别应用，但是亚硝酸钠法显色效果不好，标准曲线难以绘制，测量药品含量时，吸光度不稳定，最终决定用三氯化铝显色法，三氯化铝显色法显色效果好，稳定性和精密度符合要求，标准曲线线性关系良好。

运用朗伯-比尔定律测定芦丁标准品的标准曲线，继而测定冬凌草黄酮分散片中黄酮的总含量，此方法简便易行、灵敏度与准确度都较高，但专属性稍差，适合基层实验室普及使用。

分散片是一种速释制剂，速释制剂与普通的固体制剂相比其他的崩解速度、溶出速度、起效速度都要快；而且生物利用度比普通片剂更高，吸收比普通片剂更充分；肠道残留相对来说也更少，不良反应出现的也更少，近些年也越来越受到患者与医务人员的青睐。