HPLC法同时测定丝棉木中2种成分含量

庞 策 赵鹏慧 张冠腾 左亚奇 丁 孟 郭晶晶 甄 攀

1.河北北方学院药学系，张家口，075000，中国

2.河北北方学院应用化学研究所，张家口，075000，中国

丝棉木（Euonymus maackii）又名白杜、华北卫矛，为卫矛科卫矛属植物，主要分布在吉林、辽宁、内蒙古、河北、山西、陕西等地。性辛、温，可用于祛风湿、消炎解毒、活血止痛［1］。卫矛属中化学成分及药理活性研究已有报道，但丝棉木相关报道较少。方振峰等［2-3］对卫矛属植物的化学成分和药理作用进行总结；丁业等［4］从丝棉木的果实中提取出多糖并探讨其体外抗小鼠骨髓瘤细胞活性；周军良等［5-6］对丝棉木的三萜成分进行研究；张启东等［7］对冬青卫矛的化学成分进行研究；黄丽刚等［8-9］对隐脉假卫矛枝叶的三萜和黄酮类成分进行研究；赵荀等［10］对卫矛干燥嫩叶的化学成分进行研究。课题组前期研究中，从丝棉木种子中分离出2种化合物，分别为卫矛羰碱（compound 1）和6α，12-二乙酸基-1β，9α-二乙酸（β-呋喃甲酸酯基）-4α-羰基-2β-2-甲基丁酯-β-二氢沉香呋喃（compound 2）。建立可以同时测定丝棉木中2种化学成分含量的高效液相色谱法（HPLC）法，并测定丝棉木叶、种子和茎中compound 1和compound 2含量。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

丝绵木叶、种子和茎（采集于张家口市长城西大街景观树种，由河北北方学院医学院魏会平教授鉴定为Euonymus mmackii）、对照品（compound 1和compound 2的纯品，由课题组从丝棉木种子中分离制备，纯度大于98%）。高效液相色谱仪，美国Waters e2695；电子恒温水浴锅，北京中兴伟业仪器有限公司DZKW-4；旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂RE52CS；甲醇、石油醚（分析纯，均购自天津津东天正有限公司）；娃哈哈纯净水。

1.2 制备溶液

1.2.1 供试品溶液的制备

5株丝棉木随机编号。分别取5株丝棉木的叶、种子和茎，干燥、粉碎，各称取约10 g，精密称定，置于圆底烧瓶，加入药材10倍量（100 mL）的石油醚，回流提取2次，每次1 h，收集上清液，过滤，挥干石油醚，甲醇溶解，定至5.00 mL，摇匀，即得供试品溶液。

1.2.2 对照品溶液的制备

称取compound 1和compound 2对照品适量，精密称定，甲醇溶解，得到compound 1浓度为5.44 mg·mL-1、compound 2浓度为3.20 mg·mL-1的对照品溶液。

1.2.3 色谱条件

高效液相色谱（美国Waters e2695）条件：色谱柱：Syncronis C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-水（72∶28），流速：1 mL·min-1；紫外检测器，检测波长为254 nm；柱温：25℃；进样量：15 μL。丝棉木色谱图和对照品色谱图见Fig.1。

Fig.1 Sample drawing of Euonymus maackii （A） and Reference drawing of Euonymus maackii（B）

2 结果

2.1 线性范围考察

取对照品储备液，甲醇稀释，配制compound 1浓度为0.17、0.34、0.68、1.36、2.72 mg·mL-1，compound 2浓度为0.10、0.20、0.40、0.80、1.60 mg·mL-1的系列对照品溶液。将compound 1和compound 2由小到大依次混合，配制系列混合对照品溶液。在“1.2.3”色谱条件下，依次进样，以对照品质量浓度（mg·mL-1）为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得出回归曲线方程（Tab.1）。

2.2 检测限考察

取空白溶液适量，按照“1.2.3”色谱条件依次进样7次，测定峰面积，根据标准曲线计算含量的相对标准偏差（relative standard deviation，RSD），根据LOD（检测限）=3.3δ/S （δ为甲醇溶液的标准偏差，S为标准曲线的斜率），计算检测限。compound 1、compound 2的检测限分别为1.03、1.38 μg·mL-1。

2.3 精密度考察

精密吸取混合对照品溶液15 μL，按照“1.2.3”色谱条件，依次进样6次，计算2种化合物峰面积的RSD，分别为0.52%、1.40%，表明仪器精密度良好。

2.4 加样回收率考察

精密吸取第1株丝棉木种子提取液0.50 mL，共9份，每份中compound 1和compound 2含量分别为3.06和1.14 mg。按低、中、高（分别为原供试品溶液浓度的80%、100%、120%）顺序依次加入compound 1和compound 2对照品。按照“1.2.3”色谱条件进行测定，结果表明测定方法可靠（Tab.2）。

2.5 丝棉木样品中2种化合物含量测定

随机采集5株丝棉木的叶、种子和茎，干燥，粉碎，按“1.2.1”制备供试品溶液。按照“1.2.3”色谱条件进行测定，根据标准曲线分别计算compound 1、compound 2的含量，结果见Tab.3。

Tab.1 Linear range of two compounds in Euonymus maackii

Tab.2 Investigation results of recovery of two compounds in Euonymus maackii

Tab.3 Contents of two compounds in Euonymus maackii（mg·g-1）

3 讨论

本文建立了同时测定丝棉木中2种化合物含量的HPLC法，该方法具有较好的精密度、稳定性及较高的准确度，方便快捷，易于操作，为丝棉木质量控制提供了可靠的检测方法。

从测定结果来看，随机采集的5株丝棉木的种子中均含有compound 1和compound 2，叶中只检出compound 1，且含量较低，茎中compound 1和compound 2均未检出。同一株丝棉木的叶、种子、茎中2种化合物含量不同，种子含量最高；不同株丝棉木的相同部位2种化合物的含量差异显著，5株丝棉木种子中compound 1含量范围1.64～3.06 mg·g-1，compound 2含量范围0.53～1.41 mg·g-1。5株丝棉木生长环境相同，个体差异却较大。