全自动氨基酸分析仪测定药物中16种氨基酸

2021-01-21刘文竹李滢倩郜金金

临床医药文献杂志(电子版) 2020年79期

张鑫，刘文竹，张艳，李滢倩，郜金金

（1.吉林省食品检验所，吉林长春 130103；2.吉林省正恒检测有限公司，吉林长春 130033）

氨基酸在医药上主要用来制备复方氨基酸输液，也用作治疗药物和用于合成多肽药物。此外氨基酸衍生物在癌症治疗上出现了希望。[1]目前氨基酸的分析方法[2]主要有化学方法、荧光光谱法、电化学方法和分光光度法等.全自动氨基酸分析仪[3-7]与其他方法相比，具有灵敏度高、检出限低、操作简单、数据容易分析等优势。本研究运用全自动氨基酸分析仪测定药品中16种氨基酸的方法，节省前处理时间，降低检测成本。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

L-8900高速氨基酸分析仪（日本日立公司）；BGZ-246电热鼓风干燥箱（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）；AB204-N电子分析天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；聚四氟乙烯内衬的不锈钢反应釜

混合氨基酸标准品（1 mL，2.5mmol/mL，SIGMA）；蛋白水解液用缓冲液PH套装MCI BufferL-8500-PH Kit（WAKO）；茚三酮显色液 NINHYDRIN COLORING SOLUTION KIT FOR HITACHI（WAKO）；盐酸（优级纯）；实验室用水为Milli-Q超纯水。

1.2 试验方法

1.2.1 溶液配制：16种混合氨基酸标准溶液配制；50%盐酸溶液配制：将优级纯盐酸与水等体积混合。

1.2.2 样品的前处理：称取适量样品（氨基酸含量约在10 mg～20 mg）置聚四氟乙烯内衬的不锈钢反应釜中，加入50%盐酸溶液15 mL，混匀后，在140℃干燥箱中水解4 h，转移全部水解液置50 mL容量瓶中，加入超纯水定容至刻度线，混匀后，从中取出10 mL溶液置50 mL容量瓶中，加入超纯水定容至刻度线，混匀，过滤，上机。

1.2.3 氨基酸分析仪仪器运行条件：荧光检测器；检测波长440、570 nm；离子交换色谱柱；柱温57℃；柠檬酸缓冲液；进样体积20 μL；流速0.4 mL/min。

2 结果与分析

2.1 色谱分析

样品水解后，运用氨基酸全自动分析仪测定，脯氨酸在波长440 nm测定，其余15种氨基酸在570 nm波长下测定，16种氨基酸在该分离条件下达到很好的分离效果，16种氨基酸标样色谱见图1和图2，横坐标为保留时间（min），纵坐标为振幅（mv）

2.2 样品在干燥箱中水解的时间优化

称取适量样品（氨基酸含量约在10 mg～20 mg）置聚四氟乙烯内衬的不锈钢反应釜中，加入50%盐酸溶液15 mL，混匀后，干燥箱温度保持在140℃，水解时间分别为60 min、120 min、180 min、240 min、300 min，按照1.2.2样品的前处理方法进行，随着水解时间的增加，16种氨基酸的回收率逐渐增大，但在干燥箱中水解时间在240 min以上，回收率达到100%左右，继续增加水解时间，回收率变化不大，因此确定样品在干燥箱中最佳水解时间为240 min。

2.3 样品在干燥箱中温度的时间优化

称取适量样品（氨基酸含量约在10 mg～20 mg）置聚四氟乙烯内衬的不锈钢反应釜中，加入50%盐酸溶液15 mL，混匀后，干燥箱中水解240 min，干燥箱温度分别为50℃、80℃、110℃、140℃、170℃，按照1.2.2样品的前处理方法进行，随着干燥箱中温度逐渐增加，16种氨基酸的回收率也在逐渐增大，在干燥温度为140℃时，回收率达到100%左右，继续增加干燥温度，回收率变化不大，因此确定样品在干燥箱中最佳干燥温度为140℃。

2.4 精密度

按照2.2和2.3中确定的样品前处理最佳水解时间240min和干燥温度140℃，重新处理6份样品，考察仪器的精密度，同样是以回收率的RSD值为判定依据，结果显示出16种氨基酸精密度很好均小于2.0%。

2.5 线性关系和检出限

为考察该方法的线性关系，准确配制了16种氨基酸浓度分别为的混合标准溶液，按1.2.2前处理条件进行分析，以f(x)值为峰面积，x值为检测浓度，得到标准曲线。该测定方法具有较宽的线性范围，16种氨基酸的线性范围为，线性回归系数均达到0.999以上；16种氨基酸的方法检出限范围在0.17～0.51 μmol/L。说明用该方法检测中的16种氨基酸是可行的。