农药残留检测检出限的测定方法探讨

刘 霜，钟 英，陈光亮，张 皓，郑海芳，田 翠，罗小娇，张 强

(四川省泸州市农业农村局，四川 泸州 646000)

农产品农药残留分析检测是保证农产品安全的重要手段，也是分析领域的一个重要研究课题。我国从20世纪50年代后期开始进行农药残留检测[1]，从最初的比色法、容量法发展到现在的色谱分析法和质谱分析法[2]，从最初的单一型农药分析方法发展到多种农药类型分析方法[3]，目前常用农药残留检测方法NY/T 761-2008、GB 23200.8-2016、GB/T 20769-2008和GB 23200.113-2018等，都是多种农药类型分析方法。单一型农药分析方法检出限的确认相对简单，多参数分析方法检出限确认依旧是难点。

检出限是一种评估分析方法和分析仪器性能的广泛使用的参数。检出限分为仪器检出限和方法检出限两类。仪器检出限为仪器检测样品中分析物的最低量，一般以3倍信噪比定义。方法检出限针对特定方法，不仅包含仪器背景噪声干扰，还考虑基质干扰，因此方法检出限总是比仪器检出限高。在建立分析方法时，方法检出限是最重要的参数[4]。

GB/T 20769-2008是目前各级农产品检测机构常用农药残留检测方法之一，因质谱仪的广泛使用，大部分检测机构对原方法进行优化，省略净化、浓缩步骤，直接以提取液上机，或者以甲醇水稀释上机。由于分取倍数改变，原GB/T 20769-2008方法中给出的检出限不能直接作为方法检出限。本文选取莴苣和花椰菜2种蔬菜，梯度添加18种常检农药(其中12种农药在GB/T 20769-2008方法检测范围中)，以2种蔬菜回收率均到达70%～130%为判断依据，确认各项参数检测检出限。

1 实验部分

1.1 仪器、试剂与材料

质谱仪为安捷伦三重四级杆液质联用仪(6460)；花椰菜和莴苣为市场购买，匀浆后保存于0～4℃，经过测定未含添加农药；18种农药残留标准样品均来源于农业部环境保护科研监测所，多菌灵、氯虫苯甲酰胺浓度为100mg/mL，其余16种农药浓度为1000mg/mL，用甲醇配制成浓度为1mg/mL的混合标准储备液，储存于4℃冰箱中；甲醇、乙腈、甲酸均为色谱纯，实验用水为屈臣氏蒸馏水。

1.2 实验方法

实验方法：GB/T 20769-2008(原方法检出限见表1)，前处理过程不净化。Ⅰ梯度(添加浓度0.001mg/kg)：称取花椰菜和莴苣20.00g试样于150mL烧杯中，加入20uL混合标准储备液，涡旋混匀，静置1h后，加入40.00mL乙腈，15000r/min匀浆1min，加入5g氯化钠，3800r/min离心5min，取上清液经0.2um滤膜过滤后进行测定。Ⅱ梯度(添加浓度0.0005mg/kg)：添加混合标准储备液10uL，其余前处理同Ⅰ梯度。Ⅲ梯度(添加浓度0.0001mg/kg)：添加混合标准储备液2uL，其余前处理同Ⅰ梯度。Ⅳ梯度(添加浓度0.00005mg/kg)：添加混合标准储备液1uL，其余前处理同Ⅰ梯度。

表1 GB/T 20769-2008中12种农药参数方法检出限

1.3 混合标准工作液配制

分别按照添加浓度配制基质标准液体，对应同一浓度梯度样品上机测试，外标法定量。

1.4 仪器条件

色谱测定条件：色谱柱：C18 50×2.1nm；流动相：A:0.1%甲酸水溶液,B:0.1%甲酸甲醇溶液(梯度淋洗见下表)；柱温：35℃；流速：0.2mL/min；进样量：2uL。质谱测定条件：离子源(AJS ESI)；正离子扫描；选择反应监测模式(MRM)；雾化器器压力45psi;干燥器温度250℃；毛细管电压4000V。相关质谱参数见表2。

表2 梯度淋洗条件

表3 18种农药质谱参数

2 结果与分析

2.1 Ⅰ梯度添加条件下检出限确认情况

由表4可知，Ⅰ梯度添加条件下，18种农药添加回收率均能达到70%～130%。通过对比表1可知，原方法检出限高于0.001mg/kg的参数有氧乐果、涕灭威砜、灭多威、噻虫嗪、吡虫啉、克百威、甲萘威7种农药，这表明优化后的方法能达到原方法检出限。因此，该7种农药检出限可直接以原方法检出限表示。多菌灵、啶虫脒、咪鲜胺、烯酰吗啉和甲维酸盐原方法检出限低于本次添加量，需进一步降低添加水平进行验证。

表4 Ⅰ梯度条件下农药回收率情况(%)

涕灭威亚砜、3-羟基克百威、涕灭威、氯虫苯甲酰胺、嘧菌酯和苯醚甲环唑未在原GB/T 20769-2008方法检测范围中，但通过表4可知，此6项参数在Ⅰ梯度条件下，2种蔬菜回收率均能达到70%～130%，表明此方法能够准确检测出此6项参数，但因其未在原方法检测范围中，无原方法检出限作指导，若要确定其检出限，需进一步降低添加浓度直到其回收率不能达到70%～130%为止。

2.2 Ⅱ梯度添加条件下检出限确认情况

表5可知，Ⅱ梯度条件下，咪鲜胺回收率能达到70%～130%范围内，其原方法检出限为0.00052mg/kg，高于本次添加浓度，因此，咪鲜胺实际检出限以原方法检出限0.00052mg/kg表示；本梯度条件下，啶虫脒、多菌灵、烯酰吗啉和甲维盐回收率符合要求，但其原方法检出限均小于添加浓度0.0005mg/kg，故仍需降低添加浓度验证其检出限。

表5 Ⅱ梯度条件下农药回收率情况(%)

本梯度条件下，3-羟基克百威在莴苣基质和花椰菜基质中回收率过高，不符合要求，而其在Ⅰ梯度条件下回收率符合要求。因此3-羟基克百威检出限为0.001mg/kg；本梯度条件下，涕灭威亚砜、涕灭威、氯虫苯甲酰胺、嘧菌酯和苯醚甲环唑在2种基质中，回收率均达到70%～130%，仍需进一步降低添加浓度以确认其检出限。

2.3 Ⅲ梯度添加条件下检出限确认情况

由表6可知，Ⅲ梯度条件下，多菌灵、啶虫脒回收率符合要求，本梯度添加浓度低于原方法检出限，因此，多菌灵、啶虫脒实际检出限以原方法检出限表示；本梯度烯酰吗啉回收率亦符合要求，但其原方法检出限小于添加浓度，仍需降低浓度以确认实际检出限；甲维盐原方法检出限为0.00008mg/kg，但是本梯度条件下莴苣回收率偏高，已不符合要求，不能继续降低浓度，结合Ⅱ梯度回收率结果，确定甲维盐检出限为0.0005mg/kg。

表6 Ⅲ梯度条件下农药回收率情况(%)

本梯度条件下，涕灭威亚砜回收率未达到要求，结合Ⅱ梯度回收率结果，确认检出限为0.0005mg/kg。涕灭威、氯虫苯甲酰胺、嘧菌酯和苯醚甲环唑在两种基质中回收率均达到70%～130%，可进一步降低添加浓度以确认检出限。

2.4 Ⅳ梯度添加条件下检出限确认情况

由表7可知，Ⅳ梯度条件下，烯酰吗啉、氯虫苯甲酰胺回收率超出70%～130%范围，其中烯酰吗啉原方法检出限为0.00009mg/kg，但是用本方法，Ⅳ梯度条件下，回收率不能达到要求，结合Ⅲ梯度结果，确认烯酰吗啉、氯虫苯甲酰胺检出限为0.0001mg/kg。本梯度下涕灭威、嘧菌酯和苯醚甲环唑回收率均符合要求，表明此3项参数虽未在GB/T20769-2008检测范围中，但用此方法不仅能准确检测此3项农药残留含量，且检出限较低，最终确定检出限为0.00005mg/kg。

表7 Ⅳ梯度条件下农药回收率情况(%)

3 讨论

本文通过萝卜和花椰菜农药残留添加回收试验，以2种蔬菜的回收率均达到70%～130%为依据，确认了18种参数的实际检出限。其中，GB/T 20769-2008检测范围内的12种农药参数，氧乐果、涕灭威砜、多菌灵、灭多威、噻虫嗪、吡虫啉、啶虫脒、克百威、甲萘威和咪鲜胺方法检出限可以作为实际检出限，烯酰吗啉和甲维盐实际检出限低于原方法检出限，这是由于GB/T 20769-2008方法中，前处理在净化后进行了浓缩，本文所采用的方法省略净化和浓缩步骤，致使检出限升高。涕灭威亚砜、3-羟基克百威、涕灭威、氯虫苯甲酰胺、嘧菌酯、苯醚甲环唑6种参数不在GB/T 20769-2008方法检测范围中，但日常检测中可检测此6种参数，本文用梯度添加的方法确定此6种农药检出限，检测出的数据仅作参考，若检测出此6种参数残留量超标，仍需用国标方法进行复检。

4 展望

本文仅采用萝卜和花椰菜进行加标回收实验，具有一定局限性，可以拓宽蔬菜的品种范围，也可用食用菌或者水果进行添加实验。本文添加梯度按GB/T 20769-2008方法检出限确定，仅添加了4种梯度，如果可以增加添加梯度，则检出限的确认更为准确。目前检测方法中逐渐以定量限替代检出限，本文以原方法检出限为参考，仅做检测限的确认，可以再进一步研究定量限的确认。