血清miR-126在妊娠期糖尿病孕妇中的表达及意义

王红日 缪雪钦 高美云 卢坤斌 吴小梅

（福建中医药大学附属第二人民医院，福建 福州 350003）

妊娠期糖尿病为女性在妊娠期间，受糖代谢异常因素的影响而出现的一种疾病，胰岛素抵抗以及胰岛β细胞功能异常同疾病的发生之间有密切关联。临床相关研究指出，部分微小核糖核酸（miR-126）与胰岛素生成和分泌之间有密切关联，且对疾病发生和发展存在重要作用[1]。目前临床针对妊娠期糖尿病孕妇血清miR-126表达水平的相关研究较少。我们观察了妊娠期糖尿病孕妇的miR-126、血糖和血脂水平变化，并与糖耐量正常的孕妇进行比较，分析妊娠期糖尿病孕妇发生胰岛抵抗的相关危险因素，旨在明确血清miR-126表达水平同妊娠期糖尿病孕妇胰岛素抵抗之间的关系。

1 资料与方法

1.1 病例纳入和排除标准 ①纳入标准：妊娠前无糖尿病，与妊娠期糖尿病诊断标准[2]相符；单活胎孕妇；存在巨大儿、胎盘功能不良等指征；对研究知情同意并且自愿纳入研究的孕妇。②排除标准：孕前有心脏病以及高血压；合并宫内感染或其他感染性疾病；肝肾功能异常；合并恶性肿瘤；未在本院分娩或者中途失访。

1.2 病例 于2018年5月—2019年5月在福建中医药大学附属第二人民医院就诊、符合病例入选和排除标准的妊娠期糖尿病孕妇中随机抽选35例作为观察组，另随机选取同期在本院接受孕检、显示糖耐量正常的孕妇35例作为对照组。本次研究中的相关资料均上交至医院伦理委员会审核，且经过批准。观察组孕妇年龄23～36岁，平均（29.50±4.72）岁；体质量指数21～30 kg/m2，平均（26.81±1.29）kg/m2。对照组年龄24～35岁，平均（29.42±4.69）岁；体质量指数22～31 kg/m2，平均（26.96±1.35）kg/m2。两组一般资料比较，差异无显著性（P＞0.05），有可比性。所有孕妇在检查之前均未接受降糖药物治疗，仅通过严格饮食管控的方式控制血糖水平。两组孕妇均于本院接受剖宫产手术，术前24 h之内采集晨空腹静脉血用于检测相关指标。

1.3 检测指标与方法

1.3.1 血清miR-126水平测定 采集的空腹静脉血离心后取血清，于-80 ℃保存待检。血清miR-126水平测定采用实时定量逆转录-聚合酶链式反应(qRT-PCR)方法：依据Trizol试剂盒说明书进行RNA提取，依据逆转录试剂盒说明书将RNA反转录为cDNA，最后依据相关试剂说明配制反应体系并加样；程序设定为56 ℃、72 ℃及95 ℃各30 s，92 ℃ 1 min;miR-126的内参基因为U6，使用北京豪迈生物工程股份有限公司设计合成的引物，结束反应后收集相关数据，以循环阈值（Ct）分析所获得的数据，miR-126相对表达量以2-△△Ct相对定量法进行计算。

1.3.2 血脂检测 包括总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）以及低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）。取空腹静脉血4 ml，离心,上层血清转移至新环氧树脂管中，4℃下保存，以全自动生化分析仪检测各指标水平。

1.3.3 血糖检测 包括空腹血糖、糖化血红蛋白。采集所有孕妇禁食10 h以后的空腹静脉血，取血清，采用葡萄糖氧化酶法检测空腹血糖水平，全自动生化分析仪检测糖化血红蛋白水平。

1.3.4 胰岛素抵抗指数 利用稳态模型胰岛抵抗指数评估胰岛素抵抗程度，稳态模型胰岛抵抗指数=（空腹胰岛素×空腹血浆葡萄糖）/22.5。

1.4 统计学处理 数据以SPSS 22.0统计学软件进行处理和分析。计数资料采用例数和百分比表示，计量资料以表示，t检验。采用单因素分析和Logistic回归分析，P＜0.05为差异具有显著性。

2 结 果

2.1 两组孕妇空腹血糖、空腹胰岛素、糖化血红蛋白、血脂以及胰岛素抵抗指数的比较 观察组孕妇的空腹血糖、空腹胰岛素、糖化血红蛋白和胰岛素抵抗指数均明显高于对照组（P＜0.05），LDL-C、TC、TG均明显高于对照组，HDL-C和miR-126水平均明显低于对照组（P＜0.05）。见表1。

2.2 妊娠期糖尿病孕妇胰岛素抵抗影响因素的多因素分析 以空腹血糖（≥5.1 mmol/L=1，＜5.1mmol/L=0）、空腹胰岛素（＜10 mU/L=0、≥10 mU/L=1）、糖化血红蛋白（≥6.0%=1，＜6.0%=0）、miR-126水平（＞1.0=1，≤1.0=0）为自变量，以胰岛素抵抗为应变量（Y）进行Logistic回归分析。结果显示，空腹胰岛素水平与空腹血糖水平提升、miR-126水平下降为导致妊娠期糖尿病孕妇胰岛素抵抗的重要危险因素。见表2。

表1 两组孕妇血糖相关指标、血脂和血清miR-126水平的比较

表1 两组孕妇血糖相关指标、血脂和血清miR-126水平的比较

组别 空腹血糖（mmol/L） 空腹胰岛素（mU/L） 糖化血红蛋白（%） 胰岛素抵抗指数对照组 3.69±0.31 6.98±0.49 5.46±0.33 1.79±0.28观察组 4.39±0.40 11.98±1.16 7.75±0.62 3.31±0.64 t值 8.183 23.491 19.289 12.873 P值 0.001 0.001 0.001 0.001组别 miR-126水平 TC（mmol/L） TG（mmol/L） LDL-C（mmol/L） HDL-C（mmol/L）对照组 1.14±0.33 4.19±0.42 1.01±0.25 2.41±0.59 1.51±0.09观察组 0.49±0.04 5.53±0.71 2.43±0.36 3.18±0.71 1.18±0.04 t值 11.568 9.610 19.167 4.935 19.823 P值 0.001 0.001 0.001 0.001 0.001

表2 妊娠期糖尿病孕妇胰岛素抵抗影响因素的多因素分析

3 讨 论

妊娠期糖尿病孕妇的主要特征为糖代谢异常，血糖水平提高可提高游离脂肪酸和三酰甘油的浓度，对胰岛素的分泌具有抑制作用[3]。该疾病具有较为复杂的发病机制，临床主要依据妊娠期糖尿病孕妇的胰岛素抵抗与胰岛素分泌下降情况掌握病情，且认为疾病的发生是由于妊娠过程中性激素分泌量提高对胰岛素敏感性存在不良影响，提高了发生胰岛素抵抗的风险。

miR-126为参与细胞基因调控的非编码小分子RNA，它参与了多种疾病的发生和发展过程。miR-126成熟体为发挥特有生物学功能的重要片段，其为高度保守miRNA，位于表皮生长因子样结构域7基因的7号内含子，其前提为可以折叠为四个稳定“发夹”状的二级结构，最低自由能为-165.7 kJ/mol，具有稳定的二级结构。糖尿病的发生与发展均有miR-126参与，且miR-126对于血管并发症的发生也具有重要作用。miR-126还是导致代谢性疾病发生以及进一步发展的重要危险因素，它可以通过对胰岛素信号分子通路进行调节，诱发胰岛素抵抗现象；通过负向调控血管内皮生长因子水平的表达，在糖尿病视网膜病变的发生中起重要作用；还可以特异性地参与呼吸系统和生殖系统的病理生理过程[4]。研究显示，妊娠糖尿病患者血浆中miR-126表达水平越低，LDL-C水平越高，提示miR-126与脂代谢异常有密切关系[5]。本研究结果显示，观察组孕妇的miR-126、HDL-C均显著低于对照组，其空腹血糖、空腹胰岛素、糖化血红蛋白、胰岛素抵抗指数、TG、TC以及LDL-C均显著高于对照组（P＜0.01）。提示妊娠期糖尿病孕妇常有不同程度的糖代谢紊乱和脂质代谢异常。本研究中还发现，妊娠期糖尿病孕妇的miR-126表达水平较低，且存在胰岛素抵抗。多因素分析结果显示，空腹胰岛素水平、空腹血糖水平、miR-126水平同妊娠期糖尿病孕妇发生胰岛素抵抗之间有密切关系，显示糖尿病孕妇机体的糖代谢紊乱与胰岛素抵抗有关，糖代谢紊乱可诱发及进一步加重胰岛素分泌缺陷，这可能是由于高血糖、低miR-126水平均可诱发糖、脂类代谢异常以及炎症反应，加快了发生胰岛素抵抗的过程[6]。

总之，血清miR-126表达水平与妊娠期糖尿病的发生和发展有密切关系，可能为妊娠期糖尿病孕妇出现胰岛素抵抗的重要机制。密切监测孕妇血清miR-126表达水平的变化可以判断病情的发展情况以及胰岛素抵抗的发生情况。本研究存在样本量较小的缺陷，且未深入分析血清miR-126表达水平参与妊娠期糖尿病孕妇胰岛素抵抗发生的具体作用机制，仍有待在今后临床中展开更为深入的研究，以进一步明确该指标水平同胰岛素抵抗发生之间的关联。