应用RP-HPLC法测定双黄连注射液中黄芩苷的含量

李石化，杨建龙

（长春市食品药品检验中心，吉林 长春 130000）

双黄连注射液是由金银花、黄芩、连翘等经现代制药技术制成的中药制剂[1-2]。其功效在于清热解毒、清宣风热，在肺炎、咽炎等呼吸道病原菌感染中取得了良好的应用效果[3-4]。作为双黄连注射液的有效成分之一，黄芩苷含量是双黄连注射液质量控制的重要指标之一[5]。黄芩苷含量多采用紫外分光光度法进行测定，但是双黄连注射液中其他有效成分会对其测定造成干扰。本次研究应用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）进行测定其在双黄连注射液中的含量，取得较好的效果。

1 仪器与试药

1.1 仪器

选择德国KNAUER的高效液相色谱仪，G1314A检测器，Ee-rchrom2000BasiEdition（v2.05）色谱工作软件以及梅特勒-托利多公司的AB135s电子天平。

1.2 试药

双黄连注射液(黑龙江乌苏里江制药有限公司,批号:19031609、19040813、19032215)。黄芩苷对照品由中国药品生物制品鉴定所提供（批号:110715-200514）。甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

选择Kromasil C18(150×4.6mm,5μm)的色谱，以甲醇：1%冰醋酸(50:50)作为流动相,流速设定1ml/min,,检测波长设定为280nm，柱温设定30℃。进样量2l

2.2 溶液制备

2.2.1 供试品溶液制备

精密量取0.1 mL双黄连注射液样品加入适量甲醇溶液，经超声振荡20 min后再稀释至50ml定容并摇匀。再经0.45 m过滤膜过滤，即得供试品溶液。

2.2.2 阴性对照品溶液的制备

根据处方配制不含黄芩苷的阴性制剂，根据2.2.1的方法制成阴性对照溶液。

2.2.3 对照品储备液的制备

精密称取3.21 mg干燥的黄芩苷标准品，加入50 mL量瓶,加入50%甲醇溶后进行水浴加热30 min，再加以适量50%甲醇进行定容。振荡摇匀即得对照品储备液。

3 方法学考察

3.1 系统适应性考察

分别取10 μL的阴性对照品溶液、供试品溶液，按照2.1的色谱条件进行进样，结果显示，黄芩苷的保留时间在5.36min，对于供试品溶液和阴性对照品溶液的色谱图进行比对分析，可见后者中在黄芩苷相应位置无干扰，可见黄芩苷与双黄连注射液的其它组分能很好的分离。

3.2 线性关系考察

精密量取0.2、0.4、0.8、1.6、2.0、3.0、4.0、5.0 mL的黄芩苷对照品储备液，分别加入10ml的量瓶以50%甲醇进行稀释定容。然后量取10 μL，按2.1条件注入色谱仪依次进行进样测定。以峰面积(Y)为纵坐标,浓度(Z)为横坐标,绘制黄芩苷标准溶液的线性回归方程为:Y=-1.72906+490.8078Z，可见其在3.71～91.26μg/ml浓度内呈良好的线性关系（r=0.9994）

3.3 精密度实验

精密量取1.6 mL的对照品溶液，加入10 ml的量瓶稀释后，按2.1条件,连续进样测定5次。结果可见5次测定的黄芩苷峰面积无明显波动，RSD为1.27%。

3.4 重复性试验

重复量取19031609批号的双黄连注射液供试品溶液6份，10 mL/份，按照2.2.方法制成6份供试品溶液，依次进行进样测定黄芩苷的峰面积，计算得到RSD为1.12%，重复性佳。

3.5 稳定性试验

将19031609批号的供试品制备成供试品溶液，将其在室温下放置0、2、4、6、8、12 h后，分别加样测定，计算黄芩苷的峰面积。可见黄芩苷峰面积变化范围小，计算得到RSD为1.39%，12 h内较为稳定。

3.6 加样回收实验

量取19031609批号的双黄连注射液供试品溶液3份，10mL//份，分别加入供试品已知含量的0.80、1.0、1.2的黄芩苷对照品，制备成加样回收供试品溶液。依次加样测定计算其加样回收率为96.77%，RSD为0.93%。见表1。

3.7 样品含量测定

对于三个不同批号的双黄连注射液分别按2.2.1法制备供试品溶液，依次取样进样测定，结果可见三批的黄芩苷含量分别为11.23、11.18、11.32mg/mL。见表2。

表1 加样回收实验

表2 双黄连注射液样品的黄芩苷含量测定

3 讨 论

黄芩苷含量对于双黄连注射液的质量控制有重要意义。本次研究建立了RP-HPLC法测定双黄连注射液中黄芩苷的含量，经考察不同种类的酸及酸度的流动相对于黄芩苷分离的效果，最终选定了甲醇：1%冰醋酸(50:50)作为流动相，在这种配比下，黄芩苷与其他组分分离良好。结果中黄芩苷加样回收率平均为96.77%，结果提示以RP-HPLC法测定双黄连注射液中黄芩苷的含量，方法简便、准确、灵敏度高，可作为黄芩苷的质量控制。