两种胶体金试纸条检测血清人绒毛膜促性腺激素的性能评价

（南方医科大学南海医院医学检验科，广东 佛山 528244）

人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin，HCG）属于一类糖蛋白激素，主要通过胎盘合体滋养层细胞进行分泌，其主要作用为促进性腺发育。在正常人体内HCG含量极少，但在受孕后第4天便开始分泌，并逐渐升高。在妊娠1周后，血液的HCG为5～50 mIU/mL，尿液HCG＞25 mIU/mL，在妊娠第8～10周时达峰值，持续1～2周后迅速降低，之后逐渐下降并以1/10～1/5的峰值水平维持至分娩[1]。目前，临床上对正常早孕、异位妊娠、肝癌等疾病通常都会通过采集人体血清或尿液进行评估，并检测其中HCG水平，从而对疾病进行有效的鉴别和诊断[2]。通常利用HCG检测的方式辅助早期妊娠检测的方式种类较多，其中胶体金免疫层析法（colloidal gold immunochromatographic assay，GICA）较为常用，主要原因在于该方法操作简便快速，在使用过程中不需要使用其他特殊设备或仪器，同时便于储存。但由于生产厂家的不同，其个别性能指标或操作使用方面都略有不同。本研究旨在评价两个不同厂家“早早孕”试纸条（胶体金免疫层析法）检测血清中人绒毛膜促性腺激素（HCG）的检测性能。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品 本次研究样品均为2019年11月16～20日本院门诊或住院患者中采取的血清样本，共计65例，所有研究样品经化学发光法检测后均已测定HCG含量，且无明显溶血、黄疸等情况的发生。

1.1.2 试剂 选择由润和生物医药科技（汕头）有限公司生产的大卫“早早孕”检测试纸（胶体金法），其生产批号以及生产许可证编号分别为20190314、粤食药监械生产许20030850号，产品有效期至2021年9月，注册证书编号为粤械注准20162400111。万孚“早早孕”检测试纸（胶体金法）由广州万孚生物技术有限公司提供，产品批号W00190833，产品有效期至2022年8月，生产许可证编号为粤食药监械生产许20030645号，注册证书编号为粤械注准20162400006。

1.1.3 仪器 本次研究选择的化学发光免疫分析仪，其品牌为西门子，型号为Centaur XP，可检测出2～1000 mIU/mL范围的HCG含量，同时试剂以及校准品均为原装配套。质控品是一种化学发光质控物，由美国伯乐公司生产，其低值批号为40361、中值批号为40362、高值批号为40363。

1.2 方法

1.2.1 最低检出限试验 利用生理盐水将样品进行稀释，样品原浓度为392.6 mIU/mL，且已经通过化学发光法检测，将样品稀释成9个样本，其浓度分别为392.6 mIU/mL、196.3 mIU/mL、98.2 mIU/mL、49.1 mIU/mL、24.5 mIU/mL、12.3 mIU/mL、6.1 mIU/mL、3.1 mIU/mL以及1.5 mIU/mL，并将阴性对照设置为生理盐水，将所有样品均经过2种试纸条进行检测，且均重复测定3次。

1.2.2 重复性试验 利用2种试纸条对临界值附近样品进行重复检测，样品浓度分别为25.6、33.4 mIU/mL，每个样品均重复检测10次。

1.2.3 诊断性能对比 选择经过化学发光检测后，浓度在2.0～200000 mIU/mL之间的样品共计65例，利用2种试纸条将所有样品分别进行检测。将经过化学发光法所测定出来的数值定为真值。若检测结果在10 mIU/mL以下（且包含10 mIU/mL），则判定为阴性，若检测结果在10 mIU/mL以上则判定为阳性。将所有测定结果与化学发光法测定结果进行比较，并对灵敏度、特异性、诊断准确度等进行对比评价。

1.2.4 试纸条的显色情况对比 所有样品均遵照浓度由低至高的顺序进行排列，对2种试纸条显色情况以及其梯度变化进行对比。注意所有操作都应保持在常温状态下进行，并遵照说明书加以操作，将试纸条下端在样品血清中进行插入并保持5 s，注意其深度应当在MAX线以下，取出后平放，等待10 min后对检测结果进行观察。

1.2.5 判定标准 有效为质控区有红色条带产生；阴性（－）：质控区有红色条带产生，但是检测区没有出现条带；弱阳性（±）：质控区有红色条带产生，且检测区出现较为微弱的条带；阳性（＋）：质控区有红色条带产生，且检测区出现比较明显的条带，但颜色与质控区相比略浅；强阳性（＋＋）：质控区有红色条带产生，且检测区出现清晰条带，同时颜色与质控区相近或更深。

2 结果

2.1 对最低检出限进行检测对比 当HCG浓度在12.3 mIU/mL时，大卫试纸条检测结果为阴性，而万孚试纸条检测结果为弱阳性。在HCG浓度为24.5～392.6 mIU/mL时，2种试纸条的检测结果均为弱阳性，具体结果见表1。

表1 2种试纸条最低检出限试验检测结果

2.2 对重复性进行检测对比 大卫试纸条检测HCG浓度为25.6 mIU/mL，万孚试纸条为34.4 mIU/mL，同时利用2种试纸条对两个样品的10次结果进行对比发现，其显色均一，且结果均为弱阳性。

2.3 对诊断性能进行对比 本次研究的全部样品检测结果见表2。在2种试纸条的诊断性能比较中，因灵敏度差值置信限包括了“0”，所以不能在统计学上做出灵敏度差异有显著性的结论，而特异性的置信限不包括“0”，因此这就有证据说明2种试纸条特异性有差别[3]。具体结果见表3。

表2 2种试纸条诊断性能的检测结果

表3 2种试纸条的诊断性能结果

2.4 试纸条的显色情况对比 选取部分浓度值的检测结果2种试纸条的显色情况见表4。经对比，大卫试纸条的显色结果更为突出，同时其条带边缘更加清晰、均匀。而万孚试纸的显色比较粗糙，条带的显色不够均匀，部分条带的边缘相对模糊，层次感不够明显。

3 讨论

在临床众多标记技术中，胶体金属于较为常用的一种。在20世纪70年代，由Faulk和Taytor将其引入免疫化学，至此该技术便成为一种新的免疫学方法，同时被广泛应用在生物医学各领域[4]。现阶段，在检验医学中不断将其应用在免疫层析法中，同时也在快速免疫金渗滤法中广泛运用，在临床上主要通过此方式进行HBsAg检测、HCG检测以及抗双链DNA抗体检测等，由于其具备简单、便捷、迅速、精准和无污染等优点，得到越来越多学者的青睐[5]。“早早孕”试纸条的基本检测原理为利用胶体金颗粒为指示标记，示踪物标记McAb、羊抗人HCG和羊抗鼠IgG多克隆抗体，运用大分子物质对抗体进行保护，并将标志物在硝酸纤维素膜上进行固化。当检测区域的待检HCG呈现紫红色时，说明McAb-HCG-羊抗人HCG双抗体夹心抗原抗体复合物已经形成。对照区域形成多克隆抗体复合物，也会呈现紫红色[1]。随着时代的发展，HCG胶体金试纸条已得到了广泛运用，我国食品药品监督管理局在2009年颁布了相关行业标准，并对产品的分析性能做出相关要求，特别是明确要求试纸条的最低检测限、重复性等内容。在本次试验中，万孚试纸条与大卫试纸条的最低检测限分别为12.3 mIU/mL、24.5 mIU/mL，均符合标准要求（即不得超过25 mIU/mL）。通过进行重复性试验发现，万孚试纸条与大卫试纸条的反应一致，且显色度均一，重复性较好。

表4 2种试纸条的显色对比

通过本研究发现，将大卫试纸条以及万孚试纸条同化学发光法进行对比，前者灵敏度为96.43%，特异性为100%。通过对56例阳性标本进行检测发现，有2例大卫试纸条检测为阴性。万孚试纸条灵敏度为100%，特异性为88.89%，在9例的阴性标本中，有1例万孚检测结果为弱阳性。因万孚试纸条的最低检测限达12.3 mIU/mL，易出现假阳性结果。在2种试纸条的诊断性能比较中，因灵敏度差值置信限包括了“0”所以不能在统计学上做出灵敏度差异有显著性，而特异性的置信限不包括“0”，因此这就有证据说明两方法特异性有差别。在显色方面，与万孚试纸条相比，大卫显色更为浓厚、均匀，且具有清晰、层次感突出的条带的边缘。而万孚试纸的显色比较粗糙，条带的显色不够均匀，部分条带的边缘相对来说比较模糊，层次感不够明显。

通过对比2种厂家试纸条发现，二者最低检测限、重复性等均有较好的检测效果，同时大卫试纸条在显色方面更为均匀，更具层次感，这在估算血清HCG含量方面有较大的意义。