体金法与TPPA法在街头献血者梅毒筛查中的应用①

李俊设

(洛阳市涧西区疾病预防控制中心检验科，河南 洛阳 471003)

梅毒是常见的经血传播传染病，严重危害人类健康，近年发病率逐年增高[1,2]。由于梅毒螺旋体无法在人体外进行培养，且核酸扩增技术还未大范围应用于临床，故而目前临床诊断梅毒除根据临床症状外，更有赖于血清学筛查。梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)是目前国内采血机构进行梅毒螺旋体检测的常用方法之一[3,4]。胶体金法是指采用高特异性抗原抗体反应和免疫层析分析技术来进行梅毒螺旋体定性检测的方法，其原理在于目标抗原能够寻找抗体并与之结合，在基层医院中应用广泛[5]。本研究应用胶体金法与TPPA对街头献血者进行梅毒抗体检测，旨在探讨以上两种方法的应用价值，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 标本

所有血液标本均来源于2019-01～2020-06的6250例街头无偿献血者。所有献血者均体检合格，符合《献血者健康检查要求》(GB18467-2001)[6]。

1.2 方法

(1)甲组：先用TPPA法行血清梅毒抗体检测，对于阳性标本进一步行胶体金法复查。乙组：先用胶体金法进行筛查，对阳性标本再行TPPA复查。(2)选取两种检测方法均阳性的标本，采用阴性血清进行1:2-1:1024倍稀释，再采用胶体金法、TPPA法进行分别检测，对两种检测方法的灵敏度和可检测的宽度进行对比。(3)TPPA诊断试剂盒为日本富士株式会社产品，胶体金法试剂盒为英科新创(厦门)科技有限公司产品，检测严格按试剂盒说明书进行。

2 结果

2.1 试验结果

甲组：5018例血液标本经TPPA检测显示阳性104例，胶体金法复查显示阳性100例，阳性符合率为96.15%(100/104)；以TPPA法为“金标准”，胶体金法阳性漏诊率为0.08%(4/5018)。

乙组：1232例血液标本胶体金法检测显示阳性23例，1209例阴性。采用TPPA法对胶体金法检测阳性的23例标本进行复查，阳性符合率为86.96%(20/23)。以TPPA法为“金标准”，胶体金法检测的假阳性率为13.04%(3/23)。

2.2 灵敏度试验结果

选取8例两种检测均阳性的标本，按1:2-1:1024的比例对阴性血清进行稀，采用胶体金法及TTPA法对各稀释后的样本作定性检测，TTPA法自然沉降2h，下限为可疑时的稀释倍数；胶体金法20min内观察结果，下限是弱阳性，即阳性线出现时间长，色浅。和TPPA法比较，胶体金法可检测至TPPA法下限的1/4～1/2，灵敏度为TPPA法的2～4倍。由8号标本可见，胶体金法有着较宽的检测范围，胶体金法能够检测到下限的1024倍甚至以上。见表1。

表1 胶体金法和TPPA法灵敏度试验

3 讨论

随着我国改革开放进程的推进，经济发展日益活跃，流动人口逐渐增多，我国梅毒感染病例呈增长趋势[7]。自我国1998年实施《献血法》以来，各大医院用血基本源于无偿献血者。鉴于无偿献血者覆盖面积广泛、人员就业呈多样化，加之不少献血者缺乏血液相关疾病知识，给血液安全造成了隐患。因此，献血机构应切实做好无偿献血者梅毒血清的筛查工作，以确保输血安全。

TPPA是采用梅毒螺旋特异性抗原进行血清梅毒螺旋抗体的检测，特异性较高，常作为梅毒感染的确诊手段。以TPPA作为“金标准”，进行胶体金法应用价值的评价，具有较高可靠性。既往研究显示，胶体金法对血清梅毒螺旋抗体检测的敏感性要差于TPPA，存在一定的假阴性[8]，这和本研究存在差别，可能由于试剂厂家及包被的重组基因、制作材料等不同有关[9]。因为TTPA检测对象在于螺旋体族抗体，而胶体金法则是特异性螺旋体的基因片段，前者可能检测出其他螺旋体抗体而呈现出假阳性，而此种情况下胶体金法呈阴性。

因TTPA属于直接的凝集反应，而胶体金法属于标记反应，胶体金法可使检测敏感度得到提高，本研究灵敏度试验也显示胶体金法检测下限更低，这和梁卫霞等[10]研究结果一致。因此当胶体金法阳性而TPPA阴性时，不可轻易认为胶体金法是假阳性，也可能是由感染初期产生的抗体量较少造成的。对于感染早期抗体量较少时，胶体金法相比于TPPA法可更早检出，使得梅毒抗体检出窗口期提前。因此，对于早期梅毒，应采取胶体金法联合TPPA检测，以早期发现，减少漏诊，及早治疗，故针对胶体金法阳性而TPPA阴性者应行定期随访，观察症状变化。

本研究乙组中胶体金法筛查时和TPPA检测的阳性符合率为86.96%。除了胶体金法有着更高敏感度外，因胶体金法步骤简单，无法分离出与其结合的杂抗体，因而假阳性率较高，本研究中，以TPPA法为“金标准”，胶体金法检测的假阳性率为13.04%。因此当胶体金法为阳性时，应同时结合临床症状及既往不洁接触史进行判断，必要时进一步采用其他方法如TPPA法进行复检。与TPPA法相同，在治愈一定时间后仍可能有着较高阳性率，故阳性仅提示正在感染或有既往感染史，无法进行梅毒疾病活性状况判断，应同时结合临床症状、既往病史等，可联用RPP进行疗效的监测。综上所述，胶体金法由于敏感度高、操作简便、试剂便于保存、可独立包装、易对结果作出判断等优势，可作为基层医院的梅毒筛查手段。