MUC1-1、TLR4在不同程度宫颈病变组织中的表达及临床意义＊

罗蕙雨 张翠娟 林金凤

宫颈癌属于一种恶性肿瘤，在妇科极为常见。2012年，在全球范围内，新发宫颈癌病例达到了52.8万，其中26.6万左右死亡，而发展中国家占70%左右，其中年轻女性是主体[1]。现阶段，临床普遍认为，宫颈细胞学检查、人乳头瘤病毒（HPV）检测是早期诊断宫颈癌的有效方法，但是仍然有不明确性存在，特别是在诊断腺癌的过程中，由于形态学上重叠，因此很难区分早期宫颈病变良恶性[2]。本研究探讨了乳腺型黏蛋白（MUC1-1）、Toll样受体-4（TLR4）在不同程度宫颈病变组织中的表达及临床意义，具体如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性选取2019年1月-2020年1月笔者所在医院不同程度宫颈病变患者石蜡标本100例。纳入标准：均具有完整的临床资料；均经阴道镜宫颈活检病理确诊为宫颈病变。排除标准：接受过放化疗等治疗。年龄30～72岁，平均（49.3±7.5）岁。在疾病类型方面，轻微子宫颈病变9例（9.0%）；慢性宫颈炎9例（9.0%）；宫颈上皮内瘤变（CIN）38例（38.0%），其 中 CINⅠ13例（13.0%），CINⅡ13例（13.0%），CINⅢ12例（13.0%）；宫颈腺癌10例（10.0%）；宫颈鳞癌34例（34.0%），其中低分化8例（8.0%），中分化例17例（17.0%），高分化9例（9.0%）。

1.2 方法

1.2.1 MUC-1表达检测 应用北京中杉金桥生物工程公司生产的MUC-1抗体，用10%甲醛固定标本，石蜡包埋，组织切片，厚度为4 μm，HE染色。运用免疫组织化学染色，切片脱蜡，脱水过程中将梯度乙醇充分利用起来，修复抗原，然后运用链霉菌抗生物素蛋白/过氧化物酶连接法（SP法）进行染色，用PBS将一抗取代。

1.2.2 TLR4表达检测 运用常规方法进行30 min烤片，乙醇、二甲苯脱蜡，PBS洗片，室温下孵育于3% H2O2中，PBS洗片，室温下用5%羊血清封闭，将Abnova公司生产的TLR4抗体加入孵育，PBS洗片，将鼠抗人单克隆抗体加入，将通用型二抗滴加其上，室温下反应20 min，PBS洗片，显色、复染、透明、封片过程中分别应用DAB显色试剂盒、苏木精、组织、树胶。用PBS将一抗取代。

1.3 观察指标及评定标准

（1）MUC-1表达评定。将5个表达集中的阳性细胞从每张切片中随机选取出来，200倍视野下观察，定性时依据阳性细胞/视野×100%，0～4%、5%～100%分别评定为阴性表达、阳性表达[3]。（2）TLR4表达评定。运用综合评分法，包括免疫组化切片评分、阳性细胞率评分，其中前者依据染色强度，无色、淡黄色、棕黄色、棕褐色分别评定为0、1、2、3分，后者依据阳性细胞率，无阳性染色存在于肿瘤细胞中（0）、1%～10%、11%～50%、51%～75%、76%～100%分别评定为0、1、2、3、4分。二者相乘，0、1～4、5～8、9～12分分别评定为阴性、弱阳性、中等阳性、强阳性，分别用-、+、++、+++表示，-为阴性表达，+、++、+++之和为阳性表达[4]。

1.4 统计学处理

采用SPSS 21.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料以（±s）表示，采用t检验；计数资料以率（%）表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同程度宫颈病变组织MUC1-1阳性表达率比较

宫颈鳞癌患者MUC1-1阳性表达率高于慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ患者，差异均有统计学意义（P＜0.05），均低于轻微子宫颈病变患者，差异均有统计学意义（P＜0.05）；宫颈腺癌患者MUC-1阳性表达率低于CINⅡ、CINⅢ、宫颈鳞癌患者、轻微子宫颈病变患者，差异均有统计学意义（P＜0.05），但与慢性宫颈炎、CINⅠ患者比较差异均无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 不同程度宫颈病变组织MUC1-1阳性表达率比较 例（%）

2.2 不同程度宫颈病变组织TLR4阳性表达率比较

宫颈鳞癌患者TLR4阳性表达率均高于轻微子宫颈病变患者、慢性宫颈炎患者、CINⅠ患者、CINⅡ患者、CINⅢ患者，差异均有统计学意义（P＜0.05），宫颈腺癌和宫颈鳞癌患者TLR4阳性表达率比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈鳞癌患者MUC1-1阳性表达率逐渐升高，均低于轻微子宫颈病变患者；宫颈腺癌MUC1-1阳性表达率低于CINⅡ、CINⅢ、宫颈鳞癌患者、轻微子宫颈病变患者。轻微子宫颈病变患者、慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈鳞癌患者的TLR4阳性表达率逐渐升高，和上述研究结果一致。

表2 不同程度宫颈病变组织TLR4阳性表达率比较 例（%）

3 讨论

MUC1-1属于一种膜结合型黏蛋白，在胃黏蛋白成分中占有重要地位，结直肠肿瘤、胰腺肿瘤等其他胃肠道器官也较常见，乳腺癌患者具有较高的MUC1表达，宫颈黏液腺癌患者的淋巴结转移、低生存率与MUC1过度表达相关，在根治性子宫切除术、淋巴结清扫术、术后辅助性治疗的确定过程中，术前在宫颈活检标本中将MUC-1抗原表达水平确定下来能够给临床提供有效依据。因此，在宫颈黏液腺癌中，MUC-1可以作为独立预后因子[5-6]。MUC1-1阳性表达率在慢性宫颈炎、CIN、宫颈鳞癌中逐渐提升，MUC1-1不表达于正常宫颈鳞状上皮上，但是会在一定程度上表达于有炎症的宫颈鳞状上皮及细胞癌组织上[7-8]。

Toll样受体-4（TLR4）表达于很多皮肤黏膜表面，在皮肤及黏膜免疫反应中将重要作用发挥出来的途径为将病原微生物识别出来，将天然免疫防疫反应激活，对致炎因子释放进行调控[9-10]。同时，对于很多重要疾病来说，TLR4介导的炎症反应是公共通路[11]。在人肺癌细胞中，TLR4能够为肿瘤细胞将白细胞介素-8（IL-8）、血管内皮生长因子（VEGF）等免疫抑制因子分泌出来提供有利条件，途径为通过p38MAPK依赖的方式，而IL-8对肿瘤转移造成了直接而深刻的影响，VEGF能够为血管新生提供有利条件[12-13]。在宫颈癌的发生发展过程中，TLR4参与其中，但是，HPV16型高危病毒感染和宫颈癌中TLR4表达无关，即TLR4可能对其他病原体感染进行了介导，从而为HPV病毒对宫颈上皮细胞致病作用提供有利条件[14]。

相关医学研究表明，在宫颈癌的发生发展过程中，MUC1-1、TLR4可能参与其中，宫颈癌、宫颈良性病变具有不同的MUC1-1、TLR4表达，能够为临床鉴别诊断宫颈不同组织类型、判断预后提供有效依据[15-16]。本研究结果表明，慢性宫颈

综上所述，MUC1-1、TLR4在不同程度宫颈病变组织中的表达不同，能够将有效依据提供给临床的鉴别诊断及预后评定。