MCV对不同方法血小板计数结果的影响

张 泽,赵强元

解放军总医院第六医学中心检验科，北京 100048

血细胞分析仪是临床检验应用最为普遍的仪器，具有快速、重复性好等特点，为临床提供准确、有效的血细胞参数[1]。血小板计数检测是临床血细胞计数检验中的一项重要的分析指标，对多种临床疾病的诊断及治疗具有重要意义，并且与疾病的发展和预后密切相关[2-6]。而临床血小板检测中易受溶血、脂血、红细胞碎片等因素影响导致血小板计数假性减低和假性增高[7]。Sysmex公司XN-2000血细胞分析仪可采用电阻抗法(PLT-I)和荧光染色法(PLT-F)对血小板进行计数分析，其中PLT-I具有快速、重复性好等特点，但易受小红细胞和红细胞碎片的影响；PLT-F应用血小板特异性染料结合流式细胞术进行血小板计数，对非血小板颗粒具有较强的抗干扰能力。本次研究分析不同范围MCV这两种方法计数血小板结果的差异，并结合直方图及散点图，对其准确性及干扰因素进行分析，为实验室准确检测血小板计数提供依据。

1 资料与方法

1.1标本来源 随机收集本院门诊、住院患者及体检者286份标本，根据MCV结果分为3组：A组124例，MCV<72 fL；B组62例，72 fL≤MCV≤82 fL；C组106例，MCV>82 fL。

1.2仪器与试剂 Sysmex XN-2000全自动血细胞分析仪及其配套试剂、质控品，XN-2000血细胞分析仪定期校准，在相关监测指标在控的前提下完成标本检测。

1.3方法 患者晨起空腹状态时，采集肘正中静脉血2 mL，以乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)实施抗凝，以Sysmex XN-2000全自动血液分析仪分别采用PLT-I和PLT-F在2 h内完成检测。记录A组标本PLT-I通道血小板直方图和PLT-F通道荧光散点图结果。

2 结 果

2.1两种检测方法血小板计数比较 见表1，A组PLT-I与PLT-F两种检测方法比较，血小板计数差异有统计学意义(P<0.05)；B组与C组这两种检测方法比较，血小板计数差异均无统计学意义(P>0.05)。

表1 两种检测方法血小板计数结果比较

2.2PLT-I血小板直方图和PLT-F散点图分析 观察PLT-I血小板直方图，MCV<72 fL时PLT-I血小板直方图曲线尾部抬高，同时红细胞直方图左侧出现曲线抬高，提示碎片或小红细胞增多(图1A)。PLT-F通道使用半导体激光的流式细胞计数法，描画出二维散点图，X轴表示侧向荧光强度(SFL)，Y轴表示前向散射光强度(FSC)，可较好区分血小板、红细胞、白细胞和碎片各组分(图1B)。

注：A为PLT-I血小板直方图；B为PLT-F散点图。

3 讨 论

血小板是由骨髓造血组织中的巨核细胞产生，具有维持血管内皮完整性以及黏附、聚集、释放、促凝和血块收缩等功能，在止血、伤口愈合、炎性反应及器官移植排斥等生理和病理过程中发挥重要作用[8]。有研究报道，血小板计数结果可为血液性疾病、肿瘤、炎性肠病、烧伤、肝病等疾病的治疗及预后提供重要诊疗信息，同时也是诊断血栓及出血性疾病的重要指标之一[2-6]。临床血小板计数检测主要有血液分析仪、显微镜及流式细胞仪等方法，显微镜法及流式细胞仪法由于操作复杂，耗费大，不适于临床常规检测；血液分析仪方法重复性好，自动化程度高，精密度和准确性高，是目前临床检测血小板最常用的方法[1]。临床血液分析仪检测血小板大多数采用PLT-I原理，即根据血细胞相对非导电的性质，悬浮于电解质溶液中的血小板颗粒在通过计数小孔时引起电阻的变化，以此为基础对血小板进行计数，该方法具有快速、重复性好的特点，但易受细胞碎片及小红细胞的干扰，导致血小板计数假性增高。PLT-F是对血小板核酸成分进行荧光染色，采用流式细胞术检测前向散射光和侧向荧光强度，分别检测细胞大小和细胞内容物及颗粒，根据检测数据绘制出二维散点图进行计数，对非血小板颗粒具有较强的抗干扰能力，可较好区分血小板、红细胞、白细胞和碎片各组分，准确对血小板进行计数[7,9]。

临床多种疾病可导致血小板计数假性升高，如小细胞贫血、溶血性贫血患者血液中出现小红细胞、红细胞碎片，血小板直方图易与红细胞直方图重叠，干扰血小板计数；影响临床疾病的判断，需要对血小板计数结果进行校正[10-12]。实验室目前将MCV正常范围定为82～100 fL，MCV<72 fL定为推片复检规则，其判断的依据参考我国血液学专家小组提出的12条血细胞自动计数显微镜复检阳性标准，但手工操作繁琐不适于大批量标本检测。研究证明PLT-F具有较强的抗红细胞碎片干扰能力，准确性高，可正确计数血小板。本研究结合实验室复检规则，根据MCV结果将血常规标本分为3组，记录PLT-I及PLT-F两种方法计数血小板结果，统计结果显示，A组PLT-I和PLT-F血小板计数结果之间差异有统计学意义(P<0.05)，B组和C组PLT-I和PLT-F血小板计数结果之间差异无统计学意义(P>0.05)；观察A组血小板直方图中可发现尾部抬高，荧光染色图示可见碎片及红细胞各组分，说明红细胞对PLT-I和PLT-F计数检测方法具有一定影响，小红细胞及红细胞碎片增多时PLT-I血小板计数假性增高，通过PLT-F血小板计数可以得到校正，与报道相符。因此，可用PLT-I进行常规检测，当MCV<72 fL时应用PLT-F进行复检可有效避免小红细胞和红细胞碎片增多导致的血小板计数假性增高。