TB-DNA、T-SPOT.TB和TB-Ab平行检测在肺结核诊断中的应用价值

何家花，余成强△，李步荣，刘晓良

1.陕西省商洛市中心医院医学检验科，陕西商洛 726000；2.西安交通大学第二附属医院检验科，陕西西安 710004

结核病是由结核分枝杆菌复合群引起的一类慢性感染性疾病，在全球感染性疾病中病死率居首位[1]。肺结核是指发生在肺组织、气管、支气管和胸膜的结核，包含了肺实质上的结核、气管支气管结核和结核性胸膜炎[2]。2017年全球新发结核病患者约1 000万，估算中国的结核病新发患者数近88.9万，估算结核病发病率为63/10万[3]。而控制结核病的关键环节就是传染源的控制，因此结核病患者的早发现、早诊断显得尤为重要。目前我国结核病患者的发现率较低[4]，寻求更准确的方法以更快的速度早期诊断结核病患者对结核病的防治具有重要意义。本文采用结核分枝杆菌脱氧核糖核酸(TB-DNA)检测、结核感染T细胞酶联免疫斑点试验(T-SPOT.TB)和结核抗体(TB-Ab)检测这3种方法对疑似肺结核患者进行检测，以此来评价这3种方法在肺结核诊断中的应用价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2019年1—12月在商洛某三甲医院门诊和住院就诊的245例疑似结核病患者的一般资料，根据《WS 196-2017结核病分类》及《WS 288-2017肺结核诊断》分为试验组和对照组。试验组(结核病患者)175例，其中男128例，女47例；年龄15～90岁，平均(48.95±19.10)岁；病原学确证病例53例，临床确证病例122例。对照组(非结核病患者)70例，其中男52例，女18例；年龄15～87岁，平均(53.28±17.80)岁。两组间性别、年龄差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1TB-DNA检测 运用达安核酸提取仪提取痰液、肺泡灌洗液、胸腔积液中的结核分枝杆菌DNA，然后用厦门至善荧光定量PCR仪检测，所用扩增试剂均是仪器配套试剂，所有操作按照试剂盒操作说明书进行。

1.2.2T-SPOT.TB 患者空腹采集静脉全血4 mL于肝素抗凝管中颠倒混匀，采用英国Oxford Immunote公司生产的结核感染T细胞检测试剂检测，按说明书进行操作。

1.2.3TB-Ab检测 使用艾康医药(杭州)有限公司提供的结核分枝杆菌IgG抗体检测试剂盒(胶体金法)检测，所有操作依据说明书进行。

2 结 果

2.1两组患者3种方法检测的阳性率比较 试验组中T-SPOT.TB的阳性率(89.14%)最高，对照组中TB-Ab阳性率(25.71%)最高，试验组的TB-DNA、T-SPOT.TB、TB-Ab阳性率均高于对照组，且差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组患者3种方法检测的阳性率比较[n(%)]

2.23种方法诊断肺结核的效能 运用ROC曲线分析这3种方法诊断肺结核的诊断效能，见图1。T-SPOT.TB 抗原A、T-SPOT.TB 抗原B、TB-DNA、TB-Ab的ROC曲线下面积分别是0.908、0.881、0.677、0.649，可见T-SPOT.TB的诊断效能最高。3种方法诊断肺结核的效能比较见表2。TB-DNA的特异度(97.14%)高于其他两种方法；T-SPOT.TB的灵敏度(89.14%)高于其他两种方法。T-SPOT.TB诊断结果的一致性高于TB-DNA和TB-Ab，差异均有统计学意义(P<0.05)，TB-DNA和TB-Ab诊断结果的一致性差异无统计学意义(P>0.05)。这3种方法联合检测的灵敏度最高，T-SPOT.TB联合TB-DNA在肺结核诊断中特异度和一致性最高。

图1 T-SPOT.TB、TB-Ab、TB-DNA诊断肺结核的ROC曲线

表2 3种方法诊断肺结核的效能评价(%)

3 讨 论

目前，我国诊断结核病常用的技术主要有细菌学诊断、分子生物学诊断、病理学诊断、影像学诊断以及血清学诊断[5]。以结核菌培养为主的细菌学诊断技术是诊断的金标准，但由于耗时长、灵敏度低的特点而易造成误诊、误治，因此T-SPOT.TB、分子生物学PCR方法等新方法应运而生。

抗原A、抗原B是结核分枝杆菌的两种特异性抗原，在体内外反应的发生率和程度上存在显著差异[6]。在本研究中，T-SPOT.TB两种抗原诊断肺结核的特异度和灵敏度各不相同，这与这两种抗原在体内外的发生率和程度是否有关尚需进一步研究。但是显然这两种特异抗原的相互补充作用明显增强了T-SPOT.TB在肺结核诊断中的特异度。

2018年实施的结核病诊断“新标准”增加了TB-DNA检测作为结核病诊断新指标[7]。本研究显示TB-DNA诊断肺结核的特异度为97.14%，具有较低的误诊率，是补充病原学诊断的较好方法，但是它的灵敏度只有38.2%，与刘喆等[8]、王宗义等[9]研究结果相比明显偏低，意味着有更高的漏诊率，这可能与标本留取质量有关，合格的痰标本可提高肺结核检出阳性率[10]，故需严格执行痰标本留取规范；也可能与试验组病例构成有关，本研究试验组临床确诊病例较多。周前选等[11]研究显示，菌阴肺结核组TB-DNA阳性检出率(25.41%)明显低于菌阳肺结核组(54.84%)，也证实了这一点。故菌阴疑似结核病患者除了采用TB-DNA检查外，还需进行其他辅助检查以免漏诊。

本研究显示，T-SPOT.TB、TB-DNA、TB-Ab在肺结核患者的阳性率明显高于非结核病患者，并且根据ROC曲线下面积可见这3种方法在肺结核诊断中均有一定价值，T-SPOT.TB的诊断效能高于TB-DNA和TB-Ab，这和国内外研究基本一致[12-14]。T-SPOT.TB在肺结核诊断中的一致性可达86.53%，明显比TB-DNA、TB-Ab高，与邵吉宝等[15]研究报道大致相同。TB-DNA、TB-Ab在诊断肺结核中虽然灵敏度和特异度不同，但是诊断一致性差异无统计学意义(P>0.05)。

本研究显示，在肺结核诊断中方法的联合检测可以明显提高灵敏度，但是相应降低了特异度。T-SPOT.TB联合TB-DNA、TB-Ab中的任何一个或两个虽然都提高了灵敏度，但是在诊断结果一致性上的差异并无统计学意义(P>0.05)。故在肺结核诊断中检验项目的联合检测不仅要考虑特异度和灵敏度的差异，还需考虑组合项目对诊断结果准确度的价值。

综上所述，在T-SPOT.TB、TB-DNA、TB-Ab 3种方法中，T-SPOT.TB具有高灵敏度、高特异度和高诊断符合率，在肺结核辅助诊断中具有较高价值，在结核病早诊断、早治疗中发挥重要作用，同时在需联合检测时要科学选择组合项目。