实时PCR 检测在妊娠晚期B 族链球菌筛查诊断中的应用价值观察

张 敏 季姗姗 李文然

（河南省三门峡市中心医院产科，河南三门峡472000）

B 族链球菌（GBS）为革兰阳性球菌，一般寄生于人体下消化道和泌尿生殖道，20 世纪30年代，Fry 等报道了GBS 能够引发产后心内膜炎而导致患者死亡，故而证明该细菌为人类致病菌[1]。随着人们对GBS 的认识加深，众多研究显示，GBS 可以导致新生儿感染，如肺炎、脑膜炎等，对新生儿生命安全危害较大[2-3]。而对于GBS 阳性孕妇而言，其容易发生胎膜早破、子宫内膜炎等，危害其健康[4]。准确筛查GBS 阳性孕妇，对指导GBS 防治具有重要意义。实时聚合酶链反应（PCR）是GBS 诊断的方法之一，检测所需时间短，本研究探讨实时PCR 在妊娠晚期GBS 筛查诊断中的应用价值，并分析GBS 阳性孕妇不良妊娠结局。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选择2017年5月至2019年4月于本院进行GBS 筛查的917例妊娠晚期孕妇为研究对象，孕妇年龄21～40 岁，平均年龄（28.60±3.94）岁；初产妇683例，经产妇234例；孕周28～38 周，平均孕周（34.19±2.67）周。本研究取材均通过孕妇同意，其无自身免疫性疾病、无严重生殖道畸形、无严重内外科疾病、近期内无性生活和使用抗生素情况。

1.2 方法：根据2002年美国疾病控制中心（CDC）推荐的取材方法，对妊娠晚期孕妇进行阴道取材，擦拭外阴分泌物，向阴道内置入2 根无菌阴道棉签，顺时针旋转采集分泌物，之后向肛门内置入2 根棉拭子，于肛门括约肌2 指位置顺时针旋转，采集直肠分泌物。2 根无菌阴道棉签和2 根棉拭子均分为2 份，各用于细菌培养和实时PCR 检测。细菌培养：将标本接种于COBA 平板及改良TH 肉汤中，在35℃环境下，置于5%CO2培养箱中培养24h，观察是否有GBS 生长菌落（粉红色或白灰色），发现疑似GBS 菌落后采用B 群链球菌鉴定方法予以鉴定。若经标准48h 培养后未发现GBS 菌群生长，则判断为无GBS 生长；若经标准48h 培养后发现有GBS 菌群生长，则判断为GBS 阳性。实时PCR 检测：取样后的阴道棉签和直肠棉拭子均置于2mL 标本运输液中，24h 内予以检测。振荡标本运输液，吸取50μL 进行离心，除去离心后的上清液，以50μLTE缓冲液重悬，加入10μL 内参照，振荡5min，95℃环境中加热2min，冰浴备用。向PCR 反应管中加入处理后的待测标本4μl，并设置阴性对照和阳性对照，离心，将待测PCR 反应管予以PCR 扩增检测。

1.3 统计学分析：运用SPSS19.0 统计软件包分析数据，计数资料以n（%）表示，采用卡方检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 细菌培养及实时PCR 诊断结果：细菌培养显示GBS 阳性者38例，所占比例为4.14%；实时PCR检测显示GBS 阳性者96例，所占比例为10.47%。

2.2 实时PCR 鉴别诊断GBS 阳性的价值：细菌培养显示GBS 阳性的38例孕妇实时PCR 检测均为阳性；其他实时PCR 检测显示为GBS 阳性而细菌培养显示阴性的58例孕妇，扩增测序证实有54例为GBS 阳性，4例为GBS 阴性。实时PCR 诊断妊娠晚期GBS 阳性的敏感度、特异度和准确度分别为100%、99.52%和99.56%，详见表1。

表1 实时PCR 鉴别诊断GBS 阳性的结果

2.3 GBS 阳性和GBS 阴性孕妇不良妊娠结局比较：GBS 阳性组胎膜早破、宫内感染、胎儿窘迫和新生儿感染发生率均高于GBS 阴性组（P＜0.05），详见表2。

表2 GBS 阳性和GBS 阴性孕妇不良妊娠结局比较 [n（%）]

3 讨论

GBS 为条件致病菌，正常情况下不会引起感染，当女性怀孕时，体内性激素和糖原水平升高，阴道pH 值也发生改变，加之机体免疫功能降低，促进了GBS 增殖，可造成孕妇、新生儿感染，是新生儿死亡重要原因之一[5]。研究表示，10%～30%GBS 菌落集中在孕妇阴道、直肠中，1%～2%婴儿可发展为早发型GBS 感染（即出生后首周内发生感染），另有部分婴儿为晚发型GBS 感染（多在出生后1 周至3个月内发生感染），而GBS 引起的新生儿死亡率较高。早期人们对GBS 致病的认知并不深，忽视了孕妇GBS 筛查。美国CDC 于1996年提出围产期GBS疾病预防指南后，预防GBS 感染开始引起人们注意。2002年，美国CDC 指出，对妊娠晚期孕妇进行GBS 培养筛查，是预防GBS 感染的有效方法。

细菌培养是诊断孕妇生殖道GBS 阳性的金标准，准确直观，但由于该方法耗时较长，加之孕妇生殖道细菌种类较多，容易影响GBS 培养，漏诊可能性较大[6]。本研究结果显示，细菌培养诊断GBS 阳性者仅38例，所占比例为4.14%。实时PCR 检测对比细菌培养所需时间短，诊断敏感度高，能较好反映孕妇临产前GBS 带菌情况，减少抗生素滥用或漏用。但该方法也存在假阳性情况。本结果中，实时PCR 检测显示GBS 阳性者96例，对比细菌培养阳性率明显较高。分析实时PCR 诊断效能，显示其诊断妊娠晚期GBS 阳性的敏感度、特异度和准确度分别为100%、99.52%和99.56%，可见实时PCR 检测在妊娠晚期GBS 诊断中的应用价值较高。少数实时PCR 诊断为GBS 阳性的孕妇，通过扩增测序证实为阴性，提示可凭借再次扩增后测序来降低假阳性发生。本研究还分析了妊娠晚期孕妇GBS 阳性对妊娠结局的影响，显示GBS 阳性组胎膜早破、宫内感染、胎儿窘迫和新生儿感染发生率均高于GBS 阴性组。

综上所述，对妊娠晚期孕妇采用实时PCR 技术进行GBS 筛查，用时短且诊断价值高，妊娠晚期GBS 感染会增加不良妊娠结局发生率，需及时诊断并采取相关措施干预，以改善预后。