免疫法隐血试验在检测胃出血中的应用

梁华英，黄胜

(湛江中心人民医院检验科，广东 湛江)

0 引言

检测消化道出血的隐血试验目前有化学法和免疫法两种，化学法因易出现假阳性而逐渐被免疫法代替。消化性出血疾病的致病因素较为复杂，易受到患者饮食、药物等方面的影响[1]，免疫法隐血试验一般又分为血红蛋白及转铁蛋白免疫法，这两种方法检现在医院得到广泛使用，免疫法与传统的化学法比较其特异性及敏感性都有很大的提高。上消化道出血包括胃出血，而检测胃出血的胃液隐血试验对早期发现上消化道出血及肿瘤具有重要参考价值，是临床诊断的一个参考指标，下面我们对胃液隐血试验免疫法的使用情况进行一些总结，现报道如下。

1 材料和方法

1.1 标本来源

50 例胃液标本来自本院2019 年9 月至2020 年8 月的胃镜证实有胃出血的患者，男32 例，女18 例，年龄16-81 岁；36 例正常对照胃液来自经胃镜检查证实没有胃出血的健康人员，男19 例，女11 例，年龄20-65 岁。

1.2 试剂

万华牌血红蛋白便隐血胶体金检测试纸和万华牌转铁蛋白便隐血胶体金检测试纸，均由万华普曼生物工程有限公司生产。血红蛋白法检测范围：0.2～2000ug/mL，转铁蛋白法检测范围：10～40ug/mL。

1.3 方法

检测原理：采用双抗体夹心法，分别在硝酸纤维素膜上的检测区包被转铁蛋白抗体(或血红蛋白抗体)和在控制区包被羊抗鼠IgG。检测时，样品中的转铁蛋白抗原(或血红蛋白抗原)可与包被在试剂前端的胶体金—抗体结合，形成免疫复合物，由于层析作用复合物沿膜带移动。如为阳性样品，则可分别在检测区及控制区各形成一条色带；如为阴性样品，则只在控制区形成一条色带。

操作：条型：撕开铝箔袋，取出检测试纸条(请勿触摸到试纸条中段白色部分)；将试纸标有MAX 箭头的一端插入待测胃液样本中(如胃液太粘稠，用蒸馏水稀释)，待测样本界面不得超过MAX 线；待试纸浸入液体后2-5 分钟判读结果，5 分钟后显示结果无效。

结果判读：阳性：反应线(T)与控制线(C)同时出现一条色带；

阴性：只在控制线(C)出现一条色带，而反应线(T)无色带出现。

无效：控制线(C)和反应线(T)均无色带出现或只在反应线(T)出现一条色带，表明试验无效，应重新测试。

2 结果

2.1 50 例胃液免疫法隐血试验结果见表1。

表1 50 例胃液免疫法隐血试验阳性例数

2.2 检测结果中8 例胃液样本血红蛋白和转铁蛋白隐血试验均阴性，29 例血红蛋白隐血试验阴性样本中转铁蛋白阳性21 例，4 例血红蛋白隐血试验阳性而转铁蛋白隐血试验阴性。

3 讨论

隐血试验临床上广泛应用在慢性胃肠道出血、消化道恶性肿瘤早期辅助诊断等方面，不同的检测方法它的影响因素也不同，测定结果也擦差异，以前的化学法隐血试验采用过氧化物酶法，该法受干扰因素较多，例如检测前吃过动物血、肉类等可造成假阳性[2]。随着医学技术的发展，免疫胶体金法出现并得到广泛的应用，该法的敏感性、特异性和准确性较化学法都有明显提高，试纸条上包被的抗体针对的是人类抗原，具有高度专一性，其利用下端的吸水材料吸收水和抗原(胃液的血红蛋白或转铁蛋白)后，利用毛细血管现象向上扩散，溶解了胶体金标志的抗人血红蛋白抗体或抗人转铁蛋白抗体，并两者结合，利用毛细血管现象向上与测试区的固相血红蛋白抗体或转铁蛋白抗体结合，此时胶体金聚集呈红色线条。

转铁蛋白主要存在于血浆中，在健康人的消化道中几乎不存在，当消化道出血时，转铁蛋白随着消化道出血进入消化道中而导致在粪便中被检测到，即转铁蛋白检测呈阳性。由于血红蛋白易被胃酸、细菌降解消化，而转铁蛋白在肠道内的自身稳定性及抗菌能力都强于血红蛋白[3,4]，转铁蛋白不易被胃酸、消化酶、消化道细菌等分解破坏，相对于血红蛋白而言，转铁蛋白在肠道中的稳定性强，尤其适宜检测上消化道出血。血红蛋白法出现假阴性的原因主要有几点，如血红蛋白或红细胞经过胃、胰、肠等不同pH 消化液和肠道细菌蛋白酶等的作用而消化殆尽，已经不具有原来的活性或抗原变性或消失而导致假阴性；过量血红蛋白导致反应体系中的抗原过剩出现前滞现象；患者血红蛋白的抗原与单克隆抗体不匹配。实验结果显示胃液的血红蛋白法阳性率42%(21/50)，转铁蛋白法阳性率76%(38/50)，证实了转铁蛋白法优于血红蛋白法。原因是由于血红蛋白易被胃酸、细菌降解消化，失去原有的免疫原性和反应原性，从而出现假阴性结果，而转铁蛋白在肠道内的自身稳定性及抗菌能力都强于血红蛋白。转铁蛋白在粪便中的稳定性高于血红蛋白，经56℃30min 处理，抗原活性无变化，而血红蛋白活性大部分丧失，37℃4 小时转铁蛋白抗原活性无明显变化，Hb 蛋白抗原活性丧失65%[5,6]。

实验结果显示正常组有1 例胃液标本两种方法都阳性，后来经仔细检查，发现该样本来自一位牙龈有出血的人员，牙龈出血吞到胃里造成胃液隐血试验阳性。

实验结果显示8 例胃液样本血红蛋白和转铁蛋白隐血试验均阴性，原因可能有几种：如果标本中混有甲醛(大于0.5%)或高浓度维生素C 可导致胶体金免疫法结果假阳性[7]；取样本不合格；转铁蛋白量低于检测限；抗原抗体不匹配等。

结果显示29 例血红蛋白隐血试验阴性样本中转铁蛋白阳性21 例，证实了转铁蛋白法敏感性及特异性高于血红蛋白法。部分样本也有可能血红蛋白含量过大，引起后带反应导致假阴性[8]，后来其中有4 例样本稀释后复查阳性也证实这一点。

实验结果还显示4 例血红蛋白隐血试验阳性而转铁蛋白隐血试验阴性，可能是胃液中的转铁蛋白量含量低，检测不出，有文献报道10%的病例呈现转铁蛋白含量较低的现象[9]。另一方面，转铁蛋白为负向急性蛋白，在各种以炎性反应为主的疾病中，如创伤、感染、手术、心肌梗塞，转铁蛋白浓度降低，导致转铁蛋白试验假阴性，还有遗传性无转铁蛋白血症患者转铁蛋白患者，此时转铁蛋白试验出现阴性[10]。

胃液隐血试验具有非创伤特点，是辅助诊断包括胃出血等上消化道出血的简便方法及指标，单克隆抗体免疫法是采用双抗体夹心法特异地检测人血红蛋白抗原，基本可以排除食物、药物等因素的干扰，特异性强，灵敏度高，标本中的微量血红蛋白能被检测，目前已被认可为大便隐血试验的确认方法[11]。但该方法不足的是正常的牛理性失血时，某些健康者特别是服用刺激胃肠道的药物后可造成假阳性；该方法仍然基于抗原抗体反应，当两者比例不当或不匹配或血红蛋白抗原因为理化因素变性或消失等的影响易出现假阴性结果。转铁蛋白检测消化道出血具有高特异性和不易被细菌分解的特点，克服了血红蛋白因变性产生假阴性的缺点，为检测消化道出血的良好指标[12]。

综上所说，免疫法隐血试验特异性强、灵敏度高，操作简便，不受饮食的干扰，转铁蛋白法测定胃液样本灵敏度及特异性都优于血红蛋白法，两者结合检测，可提高检测阳性率。但该法不能对胃肠道出血性病变做结论性的诊断，只能作为筛查或辅助诊断用，而不能代替临床内窥镜、X 线和其他检查，对于阳性结果，应结合临床做进一步检查。