HPLC 法同时测定盐酸左氧氟沙星滴眼液中两种成分含量*

蒋 荣，殷海霞，顾佳美

（苏州市中西医结合医院，江苏 苏州 215101）

由于眼部炎症，如：眼睑炎、睑腺炎、泪囊炎、结膜炎、睑板腺炎及角膜炎等，主要源于眼部感染细菌，而盐酸左氧氟沙星因其抗菌谱广、抗菌作用强，被临床医生常用于眼部的抗菌治疗[1,2]，但盐酸左氧氟沙星滴眼液开启使用后，外界细菌易侵入药液，影响其质量，因此，防腐剂的添加成为重要质量保证[3,4]。羟苯乙酯是滴眼液中常用防腐剂之一，对霉菌和酵母菌的抑制作用强，且对革兰氏阳性菌、阴性菌均有一定清除作用[5,6]。由于滴眼液主成分与防腐剂含量均为2015 版药典规定检验指标，但分析方法不一，为保证药品质量，提高产品的检验效率，本研究采用高效液相色谱法同时测定药品中左氧氟沙星与羟苯乙酯的含量，以对相关产品的质量控制提供参考。

1 仪器与试剂

U3000 高效液相色谱系统（Thermo-fisher 公司）；XSE205DU 电子天平（梅特勒-特利多公司）。

左氧氟沙星对照品 （中国药品食品检定研究院）；羟苯乙酯对照品（中国药品生物制品检定所）；盐酸左氧氟沙星滴眼液（山东博士伦福瑞达有限公司）；NaAc、NaClO4、H3PO4均为分析纯，上海阿拉丁试剂有限公司；乙腈为色谱纯（Merck 试剂）；试验用水为高纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Thermo Hypersil C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：NH4Ac-NaClO4溶液（3.08mg·mL-1NaAc、5.38mg·mL-1NaClO4，H3PO4调节 pH 值至 2.2）-乙腈 （85∶15）；流速 1.0mL·min-1，检测波长：270nm，柱温：40℃，进样体积：10μL。

2.2 溶液配制

2.2.1 混合对照品溶液配制 精密称定盐酸左氧氟沙星、羟苯乙酯对照品适量后，加水稀释定容，得到盐酸左氧氟沙星含量0.30mg·mL-1、羟苯乙酯0.03mg·mL-1的混合对照溶液。

2.2.2 空白辅料溶液配制 根据盐酸左氧氟沙星处方组分浓度，按照相关制备工艺，配制得到不含有主成分盐酸左氧氟沙星及防腐剂羟苯乙酯的空白辅料溶液。

2.2.3 供试品溶液配制 精密移取盐酸左氧氟沙星滴眼液1mL 至10mL 容量瓶内，加水稀释定容，即得供试品溶液。

2.3 专属性考察

精密移取混合对照品溶液、空白辅料溶液及供试品溶液10μL 进样，考察分析方法的专属性，相关图谱见图1。

图1 液相色谱图Fig.1 Liquid chromatograms of mixed control solution（A）,sample solution（B）and blank solution（C）

由图1 可见，左氧氟沙星峰与羟苯乙酯峰及其它峰之间的分离度均大于1.5，具有良好的分离度，彼此之间无干扰，因此，该分析方法专属性较好。

2.4 稳定性考察

同一混合对照品与供试品溶液分别于配制后0、2、4、8、12、24h 后进样，记录峰面积，考察相关样品溶液的稳定性，结果显示，混合对照品溶液中左氧氟沙星与羟苯乙酯的峰面积的相对标准偏差分别为0.32%、0.49%，供试品溶液中左氧氟沙星与羟苯乙酯的峰面积的相对标准偏差分别为0.51%、0.76%，表明在24h 内，两种溶液中左氧氟沙星与羟苯乙酯的稳定性良好。

2.5 线性关系考察

分别取混合对照溶液中盐酸左氧氟沙星浓度的80%～120%，羟苯乙酯浓度的50%～150%进样，记录峰面积。以相应对照品溶液的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，拟合回归方程，结果见表1。

表1 两种组分的线性回归方程Tab.1 Linear regression equation of two components

由表1 可见，盐酸左氧氟沙星在0.24～0.36mg·mL-1的浓度范围内，羟苯乙酯在0.015～0.045mg·mL-1的浓度范围内，两种组分的峰面积与浓度呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验

同一混合对照品溶液与供试品溶液，在“2.1 色谱条件”下重复进样6 次，计算得到混合对照溶液中盐酸左氧氟沙星与羟苯乙酯的峰面积相对标准偏差分别为0.29%、0.37%，供试品溶液中盐酸左氧氟沙星与羟苯乙酯的峰面积相对标准偏差分别为0.31%、0.52%，表明该分析方法结果精密度良好。

2.7 重现性试验

在不同试验时间、仪器和人员的条件下，重复进样6 次，测定同一供试品溶液中盐酸左氧氟沙星与羟苯乙酯的含量，以考察该分析方法的结果重现性，结果见表2。

表2 方法重现性结果Tab.2 Reproducibility results of the method

由表2 可知，不同试验条件下，得到不同组分测定结果的相对标准偏差均低于1.0%，且12 次测定结果的相对标准偏差为0.62%，表明该分析方法的结果重现性良好。

2.8 回收率考察

利用两种物质的对照品与空白辅料溶液，制得20mL 3 组不同浓度的供试品溶液，每组溶液各3份，在“2.1 色谱条件”下进样，结果见表3。

表3 回收率结果Tab.3 Recovery results of method

由表3 可知，不同浓度的各组分回收率均在98% ～102%范围内，且相对标准偏差均低于1%，表明该分析方法结果回收率较好，结果准确度高。

2.9 样品含量测定

按照上述含量测定方法，分别测定3 批药品的盐酸左氧氟沙星与羟苯乙酯含量，并与药典[7]及相关文献[8]所列方法测定结果进行比较，见表4。

表 4 3 批样品含量测定结果（n=6, mg·mL-1）Tab.4 Contents of levofloxacin and ethylparaben in three batch sample（n=6, mg·mL-1）

由表4 可知，3 批样品的测定结果与其它方法相比较无明显差异，含量相差均不超过1%，同时该方法操作简便，检测效率较高，因此，适用于相关产品的质量控制。

3 结论

本研究建立了高效液相色谱法同时测定盐酸左氧氟沙星滴眼液中主成分盐酸左氧氟沙星与防腐剂羟苯乙酯的含量。在该色谱条件下，左氧氟沙星峰、羟苯乙酯峰与其它杂质峰分离度较好，无干扰，测定结果具有较好的重复性、重现性和准确度，同时操作过程简便、可极大提高检验效率，因此，适用于相关产品的质量控制。