美佑壮对奶牛隐性乳房炎的疗效及部分血清生化指标的影响

张传师， 雍 康， 王方国， 罗正中， 沈留红， 曹随忠

(1.重庆三峡职业学院动物科技系， 重庆万州404155 ； 2.四川农业大学动物医学院， 四川成都611130)

奶牛乳房炎主要分为临床型和隐性型，其中隐性乳房炎的发病率远远高于临床型乳房炎[1]。造成奶牛乳腺炎中临床常见的菌属有：链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和支原体等[2]。当奶牛患乳房炎时，会导致奶牛泌乳能力降低、牛奶体细胞数上升，造成牛奶品质下降，对奶牛业造成了巨大的经济损失[3]。

美佑壮的主要成分是博落回提取物，博落回〔Macleaya cordata(Wild)R.Br.〕为罂粟科(Paperveraceae)博落回属植物，多年生高大草本，主要生长于丘陵或低山林的灌丛或草丛中，分布在我国的贵州、广西、广东、福建等南部省份，少量分布在日本中部[4]。博落回含有异喹啉类生物碱，约为干重的1%，已分离鉴定的成分有10余种，主要为血根碱(Sanguinarine)和白屈菜红碱(Chelerythrine)[5-6]。有研究表明，博落回提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等有抗菌的作用[7]，还有杀虫、改善肝功能、增强免疫力、抗炎和抗肿瘤等作用[8-9]。由于博落回活性有效成分是天然物质，使用后易降解无残留，在动物养殖上具有良好的保健和生产作用[9-10]。博落回注射液对仔猪的白痢、黄痢有较好的治疗效果，其注射液被载入2003年版《兽药质量标准》[11]。Wang等[12]对博落回安全性的试验结果表明，博落回提取物对奶牛的体况评分、产奶量和乳成分无显著影响。本试验的目的是在患有隐性乳房炎的奶牛日粮中添加美佑壮，评价其对奶牛隐性乳房炎和血清生化指标的影响。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂 全自动兽用血液生化分析仪(型号SMT-12V，成都斯马特科技有限公司)；检测试剂板(成都斯马特科技有限公司)；离心机(型号TD-4Z台式低速离心机)。美佑壮(博落回提取物)由湖南美可达生物资源有限公司(批号:170303；规格100 g：0.375 g)惠赠。兰州隐性乳房炎诊断液(中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所药厂)。

1.2 试验方法 试验奶牛来自四川某规模化奶牛养殖场。采用加利福尼亚州乳房炎试验(California mastitis test，CMT)随机筛选出患有隐性乳房炎的奶牛。检测方法：兰州隐性乳房炎诊断液与蒸馏水1∶3稀释(现配现用)。待检测乳区弃去前3把奶，然后将乳样挤在检测杯，弃去多余乳样，检测杯内约留2 mL乳样，然后加入2 mL稀释液，做水平同心圆摇动，摇动10～30 s，使乳样与稀释液充分混合。

在检测出来患有隐性乳房炎的奶牛日粮中添加美佑壮，添加剂量为10 g/(d·头)，添加周期为14 d。饲喂0 d、7 d、14 d三组之间相互比较。

1.3 样品采集 试验牛只分别在饲喂美佑壮0 d、7 d和14 d经尾静脉采血5 mL，室温静置30 min，3 000 r/min离心5 min收集血清，-20 ℃冷冻保存待检。

1.4 测定指标与方法

1.4.1 隐性乳房炎的检测及评分 将筛选出的患隐性奶牛乳房炎39头奶牛，测量其在饲喂0 d、7 d、14 d乳汁中体细胞数。判定标准见表1。隐乳检查结果采用计分法统计，阴性(-)为0分，弱阳性(+)为1分，阳性(++)为2分，强阳性(+++)为3分。CMT分值与乳区感染水平呈正比关系。

1.4.2 血清生化指标测定 使用全自动兽用血液生化仪检测3个时间段血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、总胆红素(TB)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、淀粉酶(AMY)、尿素(UREA)、肌酐(CREA)、钙(Ca)、无机磷(PHOS)和血糖(GLU)的水平。

1.5 数据分析 血清生化指标采用SPSS 2.3.0软件进行单因素方差分析，以P<0.05(差异显著)、P>0.05(差异不显著)作为差异显著性的判定标准，试验结果用平均值±标准差表示。

2 结果

2.1 饲喂美佑壮对隐性乳房炎的影响 通过CMT筛选的用于治疗的隐性乳房炎奶牛共计39头，根据试验前、后奶牛隐性乳房炎的计分差判定疗效，饲喂美佑壮后有5头奶牛计分为负数，表示隐性乳房炎等级增加，占比12.8%；有13头奶牛试验前、后隐性乳房炎计分没有变化(无疗效)，占比33.3%；有9头分数减低的等级为1，占比23.0%；有9头分数减低的等级为2，占比23.0%；3头奶牛分数减低的等级为3，占比7.7%。试验后共计有21头奶牛隐乳等级下降，即有疗效的占比53.85%，而其中有8头奶牛等级降低为0(即痊愈)，占比20.51%。结果表明美佑壮有较好疗效。

2.2 饲喂美佑壮对奶牛血清生化指标的结果 由表2可知，添加美佑壮饲喂7 d和饲喂前相比较，ALT、AST、ALP、LDH、CK、TB、TP、ALB、AMY、CREA、Ca、GLU的含量差异不显著(P>0.05)，UREA差异显著(P<0.05)。添加美佑壮饲喂14 d和饲喂前相比较，ALT、AST、ALP、LDH、CK、TB、TP、ALB、AMY、UREA、CREA、Ca、PHOS、GLU差异均不显著(P>0.05)。

表2 美佑壮对奶牛血清生化指标的影响Table 2 Effects of Meiyouzhuang to serum biochemical indcators in dairy cows

3 讨论

3.1 美佑壮对乳汁体细胞数的影响 乳汁中的体细胞数和乳房炎密切相关。当奶牛患乳房炎时，其乳汁中的体细胞数会显著增加，故体细胞数可作为奶牛乳房炎的指示物[3]。通过在患有隐性乳房炎的奶牛日常饲料中添加美佑壮饲喂14 d，测量饲喂0 d和饲喂后隐性乳房炎的等级，共有53.85%的隐性乳房炎病例的等级降低，对隐性乳房炎的治愈率为20.5%，表明美佑壮对奶牛隐性乳房炎有明显的治疗效果，且能有效降低隐性奶乳房炎奶牛泌乳期时乳汁中的体细胞数。

3.2 美佑壮对血清生化指标的影响 机体血清生化指标能间接反映畜禽生理健康状况血清生化指标中，ALT、AST指标可反应肝细胞是否病变或坏死。ALT主要分布在肝脏，其次是骨骼肌、肾脏、心肌等组织中，AST主要分布在心肌，其次在肝脏、骨骼肌和肾脏组织中，当这些组织细胞受损时，细胞膜的通透性增加，胞浆中的酶释放进入血液，导致血清酶活性升高[13]。血浆碱性磷酸酶(ALP)在机体代谢过程中起着非常重要的作用，它能催化水解磷酸单酯、磷酸核苷以及6-磷酸糖等类似化合物，主要来自肝细胞和毛细胆管的微绒毛，当胆汁排出不畅，毛细胆管内压升高时，可诱发产生大量ALP[14]。药物的转化部位主要在肝脏，因此当机体出现药物中毒时，多表现为肝脏的病理变化。本试验中饲喂美佑壮7 d、14 d血清ALT、AST、ALP活性与饲喂0 d比较差异均不显著。

肝脏是蛋白质代谢的主要的器官，许多蛋白质如白蛋白、糖蛋白、凝血因子、纤溶因子及各种转运蛋白等都由肝细胞合成。在肝脏疾病时，可表现出血液中蛋白质质和量的改变。TP、ALB含量在一定程度上可反映机体蛋白质的合成与代谢状况[15]。美佑壮饲喂7 d、饲喂14 d和饲喂0 d比较TP、ALB含量，差异均不显著。

血清UREA和CREA是反映肾小球的滤过功能的较好指标。本试验中，UREA的含量在饲喂7 d以后含量降低，且差异显著，14 d以后和饲喂0 d相比有降低，但差异不显著。UREA可以反映饲料中蛋白质利用情况和氨基酸的平衡情况[16]，提示美佑壮可以降低血清中尿素的含量，促进蛋白质的吸收和利用。CREA在饲喂7 d和饲喂14 d以后和饲喂0 d相比，无显著差异。结果表明，美佑壮对肾脏功能无不良影响。

CK是一种能量转换酶催化三磷酸腺苷与二磷酸腺苷的相互转换，与细胞内能量运转肌肉收缩、三磷酸腺苷再生有直接的关系，可作为诊断肌肉萎缩、心肌梗死及肠梗阻的指标。本试验饲喂以后，CK活性略有升高，但差异不显著，表明日粮中添加美佑壮对奶牛心脏、肝脏等脏器健康无不良影响。AMY主要来自胰腺和唾液腺，一般多考虑胰腺的问题。本试验中，饲喂7 d和饲喂14 d以后AMY活性都比饲喂0 d降低，但差异不显著，说明美佑壮对胰腺的消化功能无实质性的影响。

美佑壮添加前、后对血清LDH活性无显著影响，与Zhao等[17]的研究结果一致。曾建国等[18]博落回提取物对大鼠的毒性研究发现，试验组对大鼠体重无不良影响，血清生化指标和阴性对照组比较无显著差异。

本试验结果表明，在患有隐性乳房炎的奶牛在日粮中添加美佑壮，可以有效降低奶牛乳汁中的体细胞数，对患隐性乳房炎的奶牛有较好的治疗效果，而对奶牛血清生化指标无不良影响。