外泌体在骨及软组织肿瘤中的研究进展

刘畅 王华，2

1北京大学医学部病理学系（北京100191）；2北京大学第三医院病理科（北京100191）

骨及软组织肿瘤主要指来源于人体间充质的肿瘤。恶性骨及软组织肿瘤一般统称为肉瘤，多经血道转移，预后较差，复发和转移性肉瘤患者的总体生存率小于20%［1-2］。肉瘤的治疗方法包括手术、放疗和化疗。然而，肉瘤演进的分子机制研究相对缓慢，转移患者的治疗效果不尽如人意［1-2］，因此对于肉瘤发生发展机制及其靶向药物的研究非常必要。近年来发现外泌体在肿瘤发生发展、分化、凋亡、转移和化疗耐药中发挥重要作用，部分外泌体中的生物标志物可为肿瘤体液诊断和预后判断提供帮助，并有望成为肿瘤治疗的候选靶标［3-4］。这篇综述将外泌体在不同肉瘤中的研究进行总结，并讨论外泌体在肉瘤诊断和治疗中的潜在价值。

1 外泌体概述

外泌体直径为30～150 nm，由脂质双层膜包绕；膜相关的脂质筏主要由胆固醇、鞘磷脂、神经酰胺和磷脂酰胆碱组成。外泌体胞质内含有亲本细胞来源的多种成分，包括DNA、mRNA、miRNA、lncRNA 和蛋白质［5］，其中蛋白质包括膜转运及其融合蛋白、与外泌体产生有关的蛋白质（如内吞体分选转运复合体ESCRT）、肿瘤易感基因101（tumor susceptibility gene 101，TSG101）表达蛋白、四跨膜蛋白超家族（tetraspanins）、热休克蛋白以及不同细胞来源所特有的蛋白质［3］。外泌体的形成过程分为三个阶段：细胞膜内陷形成胞内体、胞内体多囊泡化、多囊泡体与质膜融合释放外泌体。第一阶段中，真核细胞首先内吞形成早期内体（early endosome），在高尔基体和ESCRT 等细胞器和蛋白的调控下逐渐成熟为晚期内体（late endosome），晚期内体的包膜通过内向出芽作用，包裹特异分选的蛋白质、核酸等物质，形成多个管腔囊泡（intraluminal vesicles，ILVs），即外泌体前体。晚期内体包含多个ILVs 后，即成为多泡体（multivesicular body，MVB）。MVB 在溶酶体中降解或以外泌体形式分泌到细胞外间隙［6］。

外泌体的分泌具有较复杂的调控机制，主要受外泌体中蛋白质的调控，包括RAB 及其效应分子、GTP 酶以及SNARE（soluble NSF-attachment protein receptor）蛋白家族。RAB家族由60多种GTP 酶组成，分别调节细胞内囊泡运输的不同环节［7］。其中RAB11 是第一个被发现与外泌体分泌有关的RAB 家族成员，抑制RAB11，细胞产生的外泌体数量减少。此外，外泌体的分泌也可受其他因素影响，如细胞内Ca2+、乙酰肝素酶的表达或微环境中pH 值［7］。外泌体迁移到受体细胞的过程可能依赖于三种机制：细胞表面受体与外泌体相互作用、外泌体直接与细胞膜融合内化、外泌体通过内吞作用进入受体细胞［6］。外泌体内化除了通过表面蛋白质的配体与受体结合来实现外，还可以通过膜上的脂质成分来协助细胞间通讯传导并完成内化［8］。

人体多种细胞可产生外泌体，从血液、唾液、尿液等体液中均可检测到外泌体［9］。常用的外泌体提取方法有超速离心法、密度梯度离心法、尺寸排阻法、聚合物沉淀法和膜亲和法等。其中，超速/密度梯度离心法是分离外泌体较常用的技术，成本较低，但其离心功效取决于样品密度等理化性质。通过透射电子显微镜、Nanosight 或流式细胞术可以检测外泌体的大小、含量及质量。此外，可调电阻脉冲传感技术或纳米颗粒追踪分析技术可以测量外泌体的浓度和粒径。外泌体中具有相对特异性的膜相关蛋白（如CD9、CD63、CD81 和CD82 等跨膜蛋白）、ESCRT、TSG101、热休克蛋白（如Hsp70 和Hsp90）、黏附分子（如整合蛋白）和膜联蛋白等，可通过Western blotting 验证这些蛋白标记物［3］。

2 外泌体与骨及软组织肿瘤

2.1 外泌体在骨及软组织肿瘤发生发展和分化中的作用肿瘤细胞产生的外泌体在其生长和分化中发挥重要作用。VENTURA等［10］从培养的尤因肉瘤细胞外泌体中检测到CD99 的表达，而CD99 参与了尤因肉瘤细胞分化、迁移和凋亡过程的调控。CD99 和特异性融合蛋白EWS-FLI1 可通过NF-κB信号传导通路对尤因肉瘤细胞的分化产生拮抗作用。在CD99 沉默的尤因肉瘤细胞来源的外泌体中，CD99 表达缺失，但miR-34a 含量增多，将这种外泌体转染到尤因肉瘤亲本细胞中，可以下调亲本细胞中Notch1/3 的表达，影响NF-kB 的转录活性，抑制肿瘤细胞的生长和迁移［10］。DE FEO 等［11］的研究进一步发现，CD99 沉默的尤因肉瘤细胞产生的外泌体中miR-199a-3p 增多，miR-199a-3p 在野生型尤因肉瘤细胞系中通过Jun/Fos 通路降低AP-1 转录因子水平，而AP-1 和NF-kB 活性降低后产生协同作用，可促进受体细胞的神经分化，并抑制受体细胞的生长。GHAYAD 等［12］发现，横纹肌肉瘤细胞比正常成纤维细胞和成肌细胞能产生更多的外泌体，且胚胎型和腺泡型横纹肌肉瘤细胞分泌的外泌体均可诱导受体肿瘤细胞和正常成纤维细胞增殖，并促进成纤维细胞迁移、血管形成［12］。

2.2 外泌体在骨及软组织肿瘤微环境、转移中的作用活化的间质细胞通过释放趋化因子和生长因子，使细胞外基质（ECM）沉积、结缔组织重新构建，促进肿瘤细胞生长和侵袭，并可导致化疗耐药［13］。QI 等［14］研究表明，来自人骨髓间充质细胞（hBMSC）产生的外泌体，可通过激活Hedgehog信号传导途径促进骨肉瘤细胞的生长。比较两种外泌体内容物，发现转移性骨肉瘤细胞产生的外泌体中，miR-675 的含量比非转移性骨肉瘤明显增加［5］，用此外泌体转染成骨细胞HFOB1.19，后者CALN1 基因表达下调，细胞迁移和侵袭能力增加［5］，提示肿瘤分泌的外泌体可以作为信使在转移性肿瘤细胞和周围细胞之间传递miRNA，重塑骨肉瘤中的微环境，促进肿瘤转移。

RAIMONDI 等［2］采用骨肉瘤细胞来源的外泌体，处理小鼠单核巨噬细胞白血病Raw264 细胞，可以诱导Raw264 细胞形成多核巨细胞，并促进成熟破骨细胞样细胞的骨吸收活性。用骨肉瘤细胞外泌体处理人脐静脉内皮细胞（HUVEC），发现HUVEC中促血管生成因子的表达增加，促进HUVEC形成新生血管。进一步研究发现，用骨肉瘤细胞来源的外泌体处理Raw264 和HUVEC 细胞后，均能检测到miR-148a-3p 和miR-21-5p 表达增加，提示外泌体可通过特定的miRNA 影响受体细胞，促进破骨细胞和新生血管形成；两种miRNA 在骨肉瘤组织样本中的高表达均与预后不良有关。

卡波西肉瘤（kaposi sarcoma，KS）可携带相关疱疹病毒（KSHV）。HOSHINA 等［15］分离KS 病人及小鼠模型血浆中的外泌体，在这些外泌体中检测到了KSHV 特异性miRNA；用这些外泌体转染内皮细胞，发现内皮细胞迁移能力增强，IL-6 分泌增多，周围血管生成潜力增加，肉瘤细胞生长加速，Ki67 阳性率显著增高，提示KSHV 中的miRNA可以通过外泌体影响周围细胞，反过来再影响肿瘤的进展。MCNAMARA 等［16］研究发现携带KSHV的外泌体可通过激活ERK1/2 通路来诱导HUVEC细胞的增殖与迁移，加速卡波西肉瘤的进程。含有KSHV 的外泌体长期转染HUVEC，可以稳定促进内皮细胞重编程，对这些重编程的HUVEC 细胞进行基因表达谱分析，MCC、ARFGEF3 等67 种转录因子显著上调，而DKK1、JUNB 等84 种转录因子显著下调［16］，提示外泌体在卡波西肉瘤新生血管形成方面发挥了重要作用［16］。YOGEV 等［17］发现，受KSHV 感染的淋巴管内皮细胞分泌的外泌体可将病毒miRNA 转移到邻近细胞中，并且可下调受体细胞靶基因表达，如抑制EGLN2 和HSPA9基因表达来促进有氧糖酵解，导致细胞产生有氧糖酵解，使其对KSHV 的敏感性降低，阻止KSHV进一步扩散，为KSHV 在微环境中的富集提供了条件。

肿瘤分泌的外泌体可以选择性地将信息转移至相应的受体细胞，改变局部微环境，调节受体细胞的相关通路，促进肿瘤细胞的转移。ENDO-MUNOZ 等［18］根据转移特性分出一组骨肉瘤细胞系，在转移性骨肉瘤细胞系KHOS 中，尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）-尿激酶型纤溶酶原激活物受体（uPAR）轴的高表达与骨肉瘤的转移行为密切相关，且不依赖于Ras 基因的表达。对KHOS 细胞条件培养基进行超速离心，在外泌体沉淀和上清液中均检测到uPA 的存在，证明uPA 以可溶形式分泌，并作为骨肉瘤分泌的细胞外囊泡（包括外泌体）的蛋白质载体的一部分，通过uPA/uPAR/MAPK 轴激活MAPK 信号来促进骨肉瘤转移［18］。

BAGLIO 等［19］发现骨肉瘤细胞来源的外泌体可以通过激活间充质干细胞（MSC）中的IL-6/STAT3通路促进肿瘤生长和转移，而这一过程可以被IL-6 阻断剂逆转［19］。WANG 等［20］发现癌症相关成纤维细胞（CAF）分泌的外泌体中miR-1228 上调，将CAF 来源的外泌体转染骨肉瘤细胞，可以下调骨肉瘤细胞中的肿瘤细胞侵袭抑制因子（suppressor of cancer cell invasion，SCAI）的mRNA 和蛋白质水平，促进骨肉瘤细胞的迁移和侵袭。

唾液酸酶（NEU1）是细胞内溶酶体胞吐作用的负向调节分子，而溶酶体相关膜蛋白1（LAMP1）则是该过程的活化分子。如果NEU1 缺乏，LAMP1 则保持高度唾液酸化并聚集在溶酶体膜上，使溶酶体易结合于质膜上，有利于溶酶体的胞吐作用［21］。MACHADO 等［21］在横纹肌肉瘤的研究中，比较了两种人横纹肌肉瘤RH41 和RH30 细胞系中NEU1和LAMP1 的表达情况，RH41 中NEU1 呈高表达而LAMP1 呈低表达，RH30 细胞则相反。在RH30 细胞中，发现较多的溶酶体结合于质膜上，并显示出明显的胞吐现象。通过超速离心法分别提取两种细胞的外泌体，发现RH30 细胞能产生更多的外泌体［21］，进一步在RH41 和RH30 细胞中分别敲低和过表达NEU1 或LAMP1 基因，可以通过下调NEU1 或上调LAMP1 表达来增强溶酶体胞吐作用和外泌体释放。在RH30 细胞分泌的外泌体存在的情况下，RH41 细胞的侵袭能力增强，但沉默LAMP1 的RH30 细胞分泌的外泌体则对RH41 细胞没有类似效果。为进一步探讨横纹肌肉瘤进展的机制［21］，在肉瘤细胞中下调NEU1、上调LAMP1 基因的表达，再进行基因表达阵列分析；结果显示，肌球蛋白-11（MYH11）基因表达上调，并且MYH11可以与LAMP1 协同作用，促进溶酶体的胞吐作用。此外，溶酶体胞吐作用和外泌体释放增加可以降解人和小鼠肉瘤细胞周围的细胞外基质，促进侵袭［21］，也提示外泌体在横纹肌肉瘤转移中发挥重要作用。

2.3 外泌体在骨及软组织肿瘤诊断及预后预测中的作用外泌体可以保护RNA 等内容物免受人体血浆中RNA 酶的降解，使其在循环血中保持一定的稳定性［22-23］。不同来源外泌体携带了亲本细胞的核酸或蛋白质信息，可以据此判断来源肿瘤的类型，被认为是细胞外液或体液中理想的生物标志物。此外，外泌体产生的数量与某些肿瘤的恶性程度正相关，可辅助进行预后预测［9］。MILLER等［22］在尤因肉瘤细胞来源的外泌体中检测到NROB1、NKX2.2、STEAP1、LIPI 及EWS-FLI1 融合基因等12 种潜在的分子标志物，qRT-PCR 结果验证了上述基因在外泌体中的表达具有一定的特异性，其中EWS-FL1 融合基因的出现说明尤因肉瘤细胞分泌的外泌体中含有较完整的mRNA，可成为尤因肉瘤体液诊断及监测的特异性分子标志物。在尤因肉瘤细胞外泌体中有超过1 200个转录物与对照组明显不同，这些转录物在尤因肉瘤细胞衍生的外泌体中高度富集或减少，可能作为尤因肉瘤细胞和微环境通讯的相关介质发挥作用［22］，其中部分有望成为鉴别诊断和预后判断的候选分子标志物。

除特异性融合基因外，外泌体中的一些特异性蛋白和核酸也可以协助诊断、鉴别诊断及预后判断［23］。FUJIWARA 等［4］发现骨肉瘤患者血浆外泌体中的miR-25-3p 的浓度显著高于非骨肉瘤患者和健康志愿者。由于miR-25-3p 可以在外泌体中稳定存在，因此检测血浆中miR-25-3p 水平是区分骨肉瘤患者、非骨肉瘤患者或健康人群有效的生物标志物之一。此外，血浆miR-25-3p 水平与骨肉瘤患者的预后相关，miR-25-3p 水平越高，患者发生转移的可能性越大，因此miR-25-3p 的血浆水平也可以作为骨肉瘤的预后判断指标［4］。

有研究发现滑膜肉瘤来源的外泌体中miR-92b-3p 稳定表达［24］，与对照组相比，miR-92b-3p 水平在滑膜肉瘤细胞系培养基中含量显著增高，并与肿瘤细胞数量和培养时间呈正相关。在小鼠血清中发现miR-92b-3p 水平与滑膜肉瘤大小有关。进一步对滑膜肉瘤患者和对照组的miR-92b-3p 水平进行分析，证实血清miR-92b-3p 水平与肿瘤大小相关；当肿瘤被切除和辅助化疗后，血清miR-92b-3p 水平降低，但在局部复发或肺部转移的患者中逐渐升高。由于主要存在于肿瘤细胞分泌的外泌体中的miR-92b-3p 比较稳定，因此，循环血外泌体中的miR-92b-3p 可作为监测滑膜肉瘤复发和转移的新型生物标志物［24］。此外，与其他骨及软组织肿瘤相比，miR-92b-3p 水平在滑膜肉瘤呈特异性上调，因此也可以用于与其他骨软组织肉瘤的鉴别诊断［24］。

CASADEI等［25］发现脂肪肉瘤患者血浆中有3种miRNA（miR-25-3p、miR-451a、miR-92a-3p）表达上调，而miR-199a-3p 表达下调。进一步对比来自多个不同脂肪肉瘤细胞系和正常脂肪组织的外泌体miRNA［25］，发现miR-25-3p 和miR-92a-3p 在所有脂肪肉瘤细胞系的外泌体中明显上调。随后将患者和健康组血浆中的外泌体进行分析，发现miR-25-3p 和miR-92a-3p 在脂肪肉瘤患者血浆的外泌体中含量升高。当脂肪肉瘤细胞与外泌体抑制剂共培养时，miR-25-3p 和miR-92a-3p 的表达水平也降低，证明血浆中miR-25-3p和miR-92a-3p主要是脂肪肉瘤细胞通过外泌体产生的［25］，受试者工作特征（ROC）曲线分析显示［25］，这两种miRNA特异性较高，有望成为新的脂肪肉瘤辅助诊断的分子标志物。

COLLETTI 等［26］发现促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤（DSRCT）患者血浆外泌体中有55 种miRNA含量显著不同，其中14 种miRNA 含量在至少1 例患者血浆外泌体中明显不同，在3 例患者的血浆外泌体中发现有3 种miRNA 表达上调（miR-34a-5p、miR-22-3p 和miR-324-5p）、2 种miRNA 表达下调（miR-150-5p 和miR-342-3p），说明富含miRNA的血浆外泌体可成为DSRCT 患者潜在的辅助诊断标志物。

液体活检具有微创、快速、容易重复等优点，从血液、尿液、唾液或脑脊液中分析游离核酸、可溶性蛋白质等已成为肿瘤活检的重要辅助检测方法［27］。与组织活检相比，液体活检可以更好地监测肿瘤复发和转移、预测化疗后反应、实时了解肿瘤耐药演变、确定靶向治疗的方向［9］。由于外泌体中富含肿瘤细胞来源或衍生的各种蛋白质、核酸等成分，将成为液体活检又一新的方向［3］。

2.4 外泌体在骨及软组织肿瘤治疗中的作用

2.4.1 外泌体与骨及软组织肿瘤的免疫治疗由于外泌体含有来自肿瘤细胞的抗原并参与免疫应答，所以外泌体可能成为免疫治疗的靶标。TSUNO 等［28］发现，滑膜肉瘤SW982 细胞系的外泌体中含有的蛋白质数量大约是亲本细胞的三分之一。用柳氮磺吡啶（SASP）和甲氨蝶呤（MTX）处理后，SW982 细胞来源的外泌体和亲本细胞的蛋白质谱变化明显不同；表明外泌体中的内容物不仅仅是亲代细胞的简单输出［28］，而是在形成和分泌过程中发生了不同程度的变化。SASP 和MTX 通过抑制IL-1β可以影响SW982 细胞外泌体的蛋白质谱构成。在外泌体中观察到两种发生变化的功能组蛋白质，一种为免疫系统相关蛋白，包括与免疫抑制相关的蛋白，如Ras 相关蛋白Rab-7b、GTP 结合核蛋白Ran；另一种为氧化应激相关蛋白，如3-磷酸甘油醛脱氢酶、NAD（P）H 脱氢酶1、硫氧还蛋白相互作用蛋白；其中氧化应激相关蛋白对细胞的氧化应激具有保护作用。外泌体中的这两组蛋白质中的部分可在IL-1β的作用下含量降低，SASP 和MTX 则可通过抑制IL-1β使这些蛋白含量增加，其中的免疫系统相关蛋白可有望成为未来免疫治疗的候选靶标［28］。

2.4.2 外泌体与药物呈递系统将外泌体用于肿瘤药物治疗的载体传递系统已成为外泌体研究的一大热点。相对于脂质体和基于蛋白质的纳米粒子，外泌体具有如下优势：（1）体内分布广泛，具有明显生物相容性，可将药物直接装载在经过纯化的外泌体中，并且亲脂性和亲水性物质均可以通过不同的方法加载到外泌体中；（2）可对生物源性或合成物质的药物进行分类递送；（3）选择合适亲本细胞释放的外泌体可以优先被特定受体细胞内化［29］；（4）选择特异性外泌体膜修饰蛋白或脂质可以使其被特定的靶细胞内化［8］；（5）可以在外泌体产生和分泌过程中完成靶向递送，如将药物注入亲本细胞内，或将治疗用的DNA 转染亲本细胞，所产生的外泌体中即含有相应的药物；理想的亲本细胞可以分泌大量携带药物的外泌体，这些外泌体不仅可以诱导非免疫应答，还可以靶向定位于特定的受体细胞。

SHIMBO 等［30］发 现 在转染miR-143 的MSC 的条件培养基中，骨肉瘤细胞中miR-143 的表达水平显著增高，细胞迁移能力明显降低，提示miR-143可以对骨肉瘤细胞发挥抑制作用。通过超速离心法分离转染后MSC 的条件培养基中的外泌体，与单纯的条件培养基进行比较，前者miR-143 的水平高于后者，提示细胞外液中多数miR-143 存在于外泌体中［30］。此外，与未被转染的MSC 相比，转染miR-143 后的MSC 细胞外囊泡分泌量更高；并且从这种培养基中分离出的外泌体或未分离的条件培养基均可以抑制骨肉瘤细胞的迁移能力，但去除外泌体的条件培养基中未能观察到143B 细胞迁移受到抑制的现象。这些结果显示细胞外miR-143 主要位于外泌体中并发挥抑制作用［30］。外泌体的递送效率虽低于脂质转染法，但外泌体递送的毒性反应较小，抑制肿瘤迁移的效应相似。推测外泌体中的miR-143 可能被整合到其他复合物（如Ago2 蛋白）中，并被有效地转送至受体细胞相应位置，直接作用于靶点，提高了miR-143 的利用效率［30］。外泌体作为潜在的药物呈递系统的作用机制还在进一步研究中。

WEI 等［29］从骨髓间充质干细胞（BM-MSC）中分离出外泌体，将其与盐酸阿霉素（Dox-HCl）混合，用三乙胺和磷酸缓冲盐溶液（PBS）处理后，获取装载阿霉素（Dox）的外泌体（Exo-Dox）。透射电子显微镜显示Exo-Dox 有明显的外泌体结构。用纳米颗粒追踪分析，发现装载Dox 前，外泌体直径为112.4 nm 左右，装载Dox 后，外泌体直径增大为152.7 nm 左右，-20 ℃培养7 d，Exo-Dox 的大小无明显变化［29］。进一步分析发现，酸性环境可以加速Exo-Dox 的Dox 释放，而肿瘤细胞中的晚期内体和溶酶体往往呈嗜酸性，提示Exo-Dox 可能成为有效的治疗肿瘤的靶向药物［29］。由于Dox 的主要副作用是心脏毒性，用游离Dox 和Exo-Dox 分别转染心肌细胞系，发现进入心肌细胞中的Exo-Dox 数量比游离Dox 明显减少，反之，Exo-Dox 进入到骨肉瘤细胞核中的数量明显多于对照组，提示Exo-Dox 可以更加有效地进入肿瘤细胞内发挥抑制作用，而对心肌细胞的毒性较小。此外，将BM-MSC 产生的外泌体与骨肉瘤细胞和心肌细胞共培养24 h，细胞活力仍保存92%，证明外泌体有较好的细胞相容性［29］，并提示从BM-MSC 分离出的外泌体适合作为药物载体运载化疗药物。

2.4.3 外泌体与化疗效果评估、肿瘤耐药外泌体中部分miRNA 的含量可随化疗效果发生改变。XU 等［1］分析了骨肉瘤患者化疗中的外泌体miRNA 变化情况，发现部分miRNA 的表达随着化疗效果不同而有所不同。如化疗效果差时，外泌体中的miR-124、miR-133a、miR-135b、miR-148a、miR-199a-3p、miR-27a、miR-385 和miR-9 等的含量下降。因此，骨肉瘤外泌体miRNA 有望作为判断化疗效果的生物标志物，并据此来制定和重新评估化疗方案。

外泌体分泌的某些物质也可促进肿瘤细胞之间的耐药性转移。TORREGGIANI 等［31］分离出具有多重耐药性的人骨肉瘤细胞MG-63DXR30 的外泌体（Exo/DXR）、无耐药性的MG-63 细胞的外泌体（Exo/S）。用Exo/DXR 感染骨肉瘤细胞可降低细胞对阿霉素的敏感性，而用Exo/S 感染骨肉瘤细胞则不会改变细胞对阿霉素的敏感性［31］。此外，具有阿霉素抗性的骨肉瘤细胞产生的外泌体可以被摄入无药物抗性的MG-63 细胞，并诱导受体细胞出现阿霉素抗性的表型。P-糖蛋白（P-gp）是一种跨膜转运蛋白，它是MDR-1 基因编码的ATP 结合转运体的成员，可依赖ATP 将细胞内药物排出，使细胞内药物浓度降低，肿瘤细胞继续存活。Exo/DXR与Exo/S 相比，前者表达更高水平的MDR-1 mRNA和P-gp，而被Exo/DXR 转染后，MG-63 细胞中MDR-1 mRNA 和P-gp 表达水平均升高［31］，提示外泌体可以通过其内在的mRNA 或蛋白质介导肿瘤细胞的耐药性转移。

3 结语与展望

大多数骨及软组织肿瘤的发病机制还不十分明确，尚无有效的靶向治疗药物。近年来，外泌体在骨及软组织肿瘤中的研究日趋增多，包括外泌体在肉瘤发生发展、分化、侵袭、转移、耐药、靶向治疗和辅助诊断中的作用，这些研究为揭示骨及软组织肿瘤的演进机制和潜在治疗方式提供了重要线索。未来关于外泌体的研究可能集中在以下几个方面：（1）继续深入了解外泌体的生物学结构、内容物和分泌方式；（2）寻找更为简捷、有效的纯化和检测外泌体的方法；（3）建立能反映病理生理状态下外泌体功能研究的条件；（4）明确外泌体用于体液活检、并作为诊断和预后预测指标的可行性；（5）优化外泌体的靶向输送系统，寻找有效途径使外泌体与其他抗肿瘤药物协同发挥作用。对外泌体的深入研究，将为骨及软组织肿瘤的诊断、预后判断和治疗等带来新的方向。