RhoGDI2和NDRG2在肝癌组织中的表达及与预后的相关性*

石林昌 王雅冰 赵孟杰 孙景武

河北中石油中心医院肝胆外科 (河北 廊坊， 065000)

肝癌是临床常见的消化系统恶性肿瘤之一，恶性程度高，预后差，死亡率目前位居所有恶性肿瘤第3位。乙型肝炎病毒感染是国内造成肝癌发病率升高的主要原因，肝癌的早期诊断及治疗对于改善患者预后具有重要意义[1]。传统的诊断方法是采取甲胎蛋白(AFP)进行预测，但是诊断准确性与可靠性值得商榷。近年来分子生物学指标的发展使得越来越多的指标在临床应用，Rho GTP酶属于同细胞骨架、细胞黏附关系密切物质，表达升高会造成肿瘤发生侵犯与转移，鸟嘌呤核苷酸抑制因子2(RhoGDI2)则是调节Rho GTP 酶活性的重要因子；N-myc下游并受其调节基因2(NDRG2)则是临床新近发现的基因家族，同细胞增殖与分化关系密切，可以参与肿瘤发生、发展过程，与细胞生长与分化关系密切[2]。本研究分析了RhoGDI2和NDRG2在肝癌组织中的表达，以期为临床提供指导，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年6月至2019年8月在我院治疗的肝癌患者89例，其中男51例，女38例；年龄30～61岁，中位年龄50.40岁。术中采集肝癌组织及癌旁组织，即距离肿瘤边缘超过5 cm作为对照。纳入标准：①均经病理检查确诊；②术前未行放化疗等抗肿瘤治疗；③随访资料保存完整。排除标准：①合并有其他恶性肿瘤者；②继发转移性肝癌者。

1.2 免疫组化染色 组织固定、石蜡包埋，切成厚度4 μm切片，免疫染色按照试剂盒流程操作，按照脱蜡、脱水、抗原修复、封闭、加抗体、染色步骤在镜下观察，阴性对照采用PBS代替一抗，观察RhoGDI2、NDRG2蛋白表达情况。每张切片随机选取5个视野，每个视野计数200个细胞。①染色强度：无着色为0分，浅黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分，棕褐色为4分；②阳性细胞比例低于25%为1分，26%～50%为2分，51%～70%为3分，超过70%为4分。①+②最终得分≥3分为阳性表达。

1.3 统计学方法 数据分析采用SPSS19.0软件，阳性表达率比较使用χ2检验，RhoGDI2和NDRG2表达相关性采用Pearson相关分析。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 肝癌和癌旁组织RhoGDI2、NDRG2表达 肝癌组织RhoGDI2阳性表达率为69.66%，明显高于癌旁组织的28.09%(P<0.05)，而NDRG2阳性表达率为22.47%，明显低于癌旁组织的97.75%(P<0.05)。见插页彩图1。

2.2 RhoGDI2、NDRG2表达与临床病理关系 Ⅲ～Ⅳ期患者RhoGDI2阳性表达率明显高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05)，而NDRG2阳性表达率明显低于Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05)；有淋巴结转移患者RhoGDI2阳性表达率明显高于无淋巴结转移患者(P<0.05)。见表1。

表1 不同临床病理特征患者的RhoGDI2、NDRG2阳性表达率 [例(%)]

2.3 相关性分析 肝癌组织RhoGDI2与NDRG2表达的相关分析结果显示，RhoGDI2与NDRG2表达呈负相关(rs=-0.406，P<0.05)。

2.4 RhoGDI2、NDRG2表达与患者复发、预后的关系 截止随访结束日2019年10月，共有36例患者复发，复发率为40.45%；复发患者RhoGDI2阳性表达率明显高于无复发患者(P<0.05)，而NDRG2阳性表达率明显低于无复发患者(P<0.05)。29例患者死亡，60例患者存活；死亡患者RhoGDI2阳性表达率明显高于存活患者(P<0.05)，而NDRG2阳性表达率明显低于存活患者(P<0.05)。见表2。

表2 RhoGDI2、NDRG2表达与患者复发、预后的关系 [例(%)]

3 讨论

原发性肝癌属于临床常见的消化系统恶性肿瘤，是目前世界范围内死亡率最高的癌症之一，目前在我国肝癌发病率呈现逐年升高的趋势，预后极差，有报道显示诊断后5年生存率不足5%[3]。目前认为肝癌的发生和发展是多因素、多阶段的过程，一般认为肝细胞恶性肿瘤主要由乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒慢性感染或者黄曲霉毒素感染造成肝硬化进而演变而来。由于肝癌发病隐匿，临床症状不典型，因此多数患者就诊时已处于中晚期，外科手术一直是治疗肝癌的首选方法，但是外科手术治疗也无法达到完全根除肿瘤的目的，术后出现复发和转移会影响患者预后[4]。研究发现肿瘤干细胞是慢周期细胞，大部分处于细胞分裂周期的G0和G1周期，一旦受到外界刺激情况下将表达具有化学抵抗分子或者活化的信号通路，导致进行细胞分裂增殖周期，但是在手术后未被杀死肿瘤干细胞会进入到细胞周期并参与调控肿瘤细胞增殖和分化过程，也是术后导致肝癌复发的重要原因[5]。病理学检查一直是肝癌诊断的金标准，但是在部分患者中可能出现假阴性率，而且在操作的过程中也可能导致肿瘤破裂引发播散种植的风险[6]。近年来化学肿瘤标记物检查在临床应用越来越广泛，其中AFP是原发性肝癌应用最广泛的标记物，但是近年来研究显示其缺乏敏感性与特异性，尤其是在肝炎、肝硬化患者病变急剧恶化时AFP数值也会显著升高，而且在妊娠或者炎症反应过程中AFP也存在假阳性的结果，而在部分原发性肝癌患者中也存在AFP阴性或者数值较低的情况，但是目前临床尚无更为可靠地血清标记物取代AFP在肝癌诊断中的低位[7，8]。

研究显示肝癌的发生发展涉及多个分子通路，牵涉的基因较多，而且越来越多的研究希望相关基因可以作为靶点，对肝癌进行早期诊断并开展治疗[9]。NDRG2在正常组织中广泛表达，但是在肿瘤组织中几乎不表达，而且表达的量与器官成熟程度具有正相关关系，成熟度越高且增殖能力越低的细胞中表达更多。一方面该基因可以参与细胞的分化过程，有报道指出NDRG2能够减弱转移性结肠癌细胞浸润过程，同时可以抑制裸鼠转移酶的活性，提示其在诱导分化与逆转表型抑制肿瘤细胞转移具有重要意义[10]。另一方面该基因可以参与应激反应，通过模拟缺氧条件造成细胞发生氧化应激反应，可以诱发形成活性氧通过信号转导促进相关基因表达，而且肿瘤发生后会启动NDRG2启动子活性并在细胞恶性转化的过程中会抑制NDRG2表达[11]。RhoGDI2属于Rho GTPases 蛋白家族重要的调节因子，可以对该蛋白家族分布与活性状态进行调节，对细胞的分裂、形态改变、血管侵犯等多种生物学行为进行影响[12]。研究发现RhoGDI2在多种肿瘤组织中形成异常表达过程，该因子可以和各种受体、解离因子之间相互作用，通过促进Rho GTPases 释放的蛋白质并运送至细胞膜并产生激活作用发挥解离因子效果[13]；同时RhoGDI2在内皮细胞中可以在酶作用下发生磷酸化过程，研究发现其表达会造成肿瘤细胞对失巢凋亡敏感程度，肿瘤细胞由于丧失和其他细胞黏附造成凋亡信号通路表达不通，因此肿瘤细胞极易发生转移[14，15]。

本研究显示，肝癌组织RhoGDI2阳性表达率明显高于癌旁组织，而NDRG2阳性表达率明显低于癌旁组织，说明在肝癌组织中存在RhoGDI2表达升高，NDRG2表达降低。Ⅲ～Ⅳ期患者RhoGDI2阳性表达率明显高于Ⅰ～Ⅱ期患者，而NDRG2阳性表达率明显低于Ⅰ～Ⅱ期患者；有淋巴结转移患者RhoGDI2阳性表达率明显高于无淋巴结转移患者，说明随着肝癌患者分期越晚且出现淋巴结转移患者RhoGDI2阳性表达率更高，而分期越早的肝癌患者NDRG2阳性表达率越低。通过相关性分析发现，RhoGDI2与NDRG2表达呈负相关，说明两者同肝癌发生具有一定的关联。本组研究还发现，复发患者RhoGDI2阳性表达率明显高于无复发患者，而NDRG2阳性表达率明显低于无复发患者，同时死亡患者RhoGDI2阳性表达率明显高于存活患者，而NDRG2阳性表达率明显低于存活患者，说明肝癌患者复发、存活与RhoGDI2、NDRG2表达具有一定的联系。本研究优势在于证实了RhoGDI2与NDRG2表达同肝癌患者发生和发展具有一定的关系，对患者预后具有一定的判断意义，但是本研究随访时间短，入组病例有限，因此还需扩充样本量、长期随访深入研究论证。