免疫层析法快速定量检测乳品中庆大霉素

2020-12-26刘荣琴邢台市食品药品检验所王彦斐北京中检维康生物技术有限公司

食品安全导刊 2020年33期

□ 周刚刘荣琴邢台市食品药品检验所王彦斐果旗北京中检维康生物技术有限公司

庆大霉素（GEN）是一种氨基糖苷类抗生素[1]，对多种革兰氏阳性菌和阴性菌都具有显著的抗菌效果，广泛应用于畜牧业。但其对于人类具有明显的毒性，能导致听神经和前庭功能损害[2—3]。庆大霉素有较强的肾毒性，能抑制肾脏细胞蛋白质的合成，导致肾衰竭。为严格控制该类抗生素在动物源食品中的残留，欧盟、美国和日本均对该类药物的最高残留限量（MRLs）进行了规定[4]，我国相关公告中规定牛奶中庆大霉素含量不得超过200 μg/L—1，本实验方法可以对庆大霉素进行快速筛选，快速检测牛奶中庆大霉素的含量。

本研究的目的为建立检测乳品中庆大霉素残留的免疫层析筛选方法。该方法的建立对确保动物性食品的安全，提高我国动物食品的质量，增强我国动物性食品在国内、国际市场上的竞争力，促进我国畜牧业的稳定和健康发展，保障人类的健康，具有非常显著的意义。

目前，庆大霉素的检测方法主要有微生物法、免疫分析法（包括放射免疫法、酶联免疫法、荧光免疫法、免疫传感器和蛋白芯片）、仪器分析法（气相色谱法、薄层色谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳色谱法、液相色谱—质谱法和气相色谱—质谱法）等。

免疫层析法分为酶免疫层析法和胶体金免疫层析法。日本的Watanabe 2002 年报道了DHS（盐酸甘氨酰胺）的酶免疫层析法，两者在牛奶中的检测限为100 ng/mL。胶体金免疫层析法具有灵敏、快速、检测成本低与结果判断直观等优点。不需要仪器设备，适用于基层抽检、乳品企业自检、原料奶站现场大量筛查使用。

1 材料与方法

1.1 仪器和试剂

1.1.1 主要仪器

微量加样器、iCheck—Ⅲ型定量快检仪（北京中检维康生物技术有限公司）等。

1.1.2 试剂

庆大霉素固体标准品（GEN，63.8%）中国生物制品检定所。

乳品样品：采购的不同品牌乳品样品，分别为伊利、蒙牛、三元与君乐宝4 个品牌的乳品。

1.2 试验方法

1.2.1 样品的提取

吸取1 mL 牛奶样品于1.5 mL 离心管中（如果不立即检测，可将牛奶冷藏保存，避免腐败，造成失效或污染），7 000 r/min、离心10 min。

1.2.2 样品的检测步骤

吸取120 μL 稀释后的缓冲溶液加入金标抗体微孔中，再加入30 μL 滤液样品，用移液器吸打数次混匀，吸取100 μL 混匀后的样品加入到快检卡样品孔中。（37±1）℃反应10 min 后，立即将快检卡放入定量快检仪中读数，结果即为样品的实际浓度。检测范围为30 ～300 μg/L。如读值为300 μg/L或大于300 μg/L 时，需要将样品用纯水进行一定比例的稀释，实际结果需要乘稀释倍数。