唾液α-突触核蛋白(SNCA)与嗅觉评估在帕金森病早期筛查中的应用研究

尚天明，毕开湘(宝鸡市康复医院精神科, 陕西宝鸡 721000)

帕金森病(parkinson’s disease, PD)是目前国内最常见的椎体外系疾病，研究发现PD 的患病率会随年龄的增长而升高[1]，并且超过90%的PD 患者病情进展较慢。临床上常用左旋多巴胺类药物进行治疗，但近年来有报道指出长期应用左旋多巴胺类药物不仅副作用显著，而且可发生药效衰减效应，最终可使患者出现肌强直和全身僵硬的临床表现[2-3]。早期识别并进行单胺氧化酶抑制剂干预治疗可有效推迟左旋多巴胺的应用时间，部分患者还可达到阻断病情进展的效果[4]。因此PD 的早期识别对指导临床具有重要作用。α-突触核蛋白(α-synuclein, SNCA)是路易氏小体的主要蛋白质成分，既往有报道显示SNCA突变与PD 关系密切[5-6]，但较少以唾液为检测标本。另外，嗅觉缺陷是PD 早期非运动特征表现。因而，本研究探讨嗅觉评估和唾液SNCA 在PD 早期筛查中的作用。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取我院2018年2月～2020年2月共45 例PD 患者作为观察组，另选取同期45 例体检健康者为对照组。其中观察组中男性29例，女性16例；平均年龄58.84±13.36 岁；体重指数22.78±1.65kg/m2。对照组中男性32 例，女性13 例；平均年龄58.22±14.09 岁；体重指数22.05±1.71 kg/m2。根据改良H-Y 临床分级量表[9]，将观察组45 例PD 患者分为早期(1，2 级)、中期(3 级)和晚期(4，5 级)。两组的一般资料差异无统计学意义 (P＞0.05)，具有可比性。本研究经由我院伦理委员会批准通过，所有受试者自愿参加且均签署知情同意书。

入选标准：①参照国际运动障碍疾病协会帕金森病诊断新标准(2015年版)诊断为PD 者[7]；②病例资料完整且自愿参加本研究者；③无严重心、肺等基础性疾病。

排除标准：①精神障碍、重度抑郁、先天性智力发育不全者；②视力、听力障碍、鼻和鼻窦病变者；③近期急性上呼吸道感染者。

1.2 仪器与试剂 采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测SNCA 蛋白水平，检测试剂盒由南京卡米洛生物工程有限公司提供。

1.3 方法 嗅觉评估方法：采用嗅觉评估工具Sniffin’Sticks 方法中的16 种气味识别(SS-16)进行评估。具体如下：选取酱油、鸡精、橙子、大蒜、米饭、香蕉、柠檬、绿茶、咖啡、巧克力、桂皮、玫瑰、草莓、黄油、香水及海藻16 种常见气味。检测时让受试者充分闻嗅后记录识别结果，每间隔4周进行1 次检测，共3 次。计分0～16 分，以16 种气味识别(SS-16)评分≤10 分为有嗅觉障碍[8]。

唾液SNCA 的检测方法：检测前受试者禁食2h，清晨用生理盐水漱口，刺激唾液分泌，收集3ml 唾液并置于离心管中，将唾液标本离心除菌后冷冻保存。采用ELISA 法检测SNCA 的表达水平，具体操作按试剂盒说明书严格进行。

1.4 统计学分析 选用SPSS22.0 统计学软件处理和分析数据。对于符合正态分布的计量资料以均数±标准差(±s)表示，对于不符合正态分布的计量资料以M(P25，P75)表示。多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用SNK 检验。计数资料以(n/%)表示，相关性分析采用pearson 或Spearman 秩相关分析，P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组SS-16 评分、嗅觉障碍率和唾液SNCA的比较 观察组嗅觉障碍共34 例，嗅觉障碍率为75.56%。对照组嗅觉障碍11 例，嗅觉障碍率为24.44%。两组嗅觉障碍率差异具有统计学意义(χ2=23.511，P＜0.05)。 两组唾液SNCA（1 272.13±38.52pg/ml vs 1 235.16±23.46pg/ml）和SS-16 评分水平（8.51±3.79 分 vs 11.04±3.96 分）差异均具有统计学意义（t=5.499，3.096，P＜0.05）。

2.2 不同程度PD 患者SS-16 评分和唾液SNCA 的比较 见表1。不同程度PD 患者的SS-16 评分和唾液SNCA 差异具有统计学意义(H=7.456，F=5.130，P＜0.05)。经Spearman 秩相关分析，PD 病情发展程度与SS-16 评分呈显著负相关关系(r=-0.351，P=0.000)，与唾液SNCA 呈显著正相关关系(r=0.426，P=0.000)。

表1 不同程度PD 患者SS-16 评分和唾液SNCA 的比较

图1 SS-16 评分和唾液SNCA 判断早期PD 的ROC 分析

2.3 SS-16 评分与唾液SNCA 在PD 早筛中的价值以SS-16 评分和唾液SNCA 为检验变量，以是否为早期PD 为状态变量绘制ROC 曲线，见图1。结果显示SS-16 评分和唾液SNCA 对PD 的早期判断具有一定的应用价值(P＜0.05)。进一步对SS-16 评分和唾液SNCA 进行二分类Logistic 回归分析，见表2。ROC 分析结果发现两者联合预测概率判断早期PD 的AUC 为0.807，显著高于SS-16 评分和唾液SNCA 单项检测的AUC 值。

表2 SS-16 评分和唾液SNCA 判断早期PD 的Logistic 回归分析

3 讨论

PD 是病程较长的神经退行性疾病，PD 的早期识别和防治对改善患者预后具有重要意义。已有研究证实PD 存在较长的前驱阶段，此阶段因神经细胞变性逆行，导致鼻腔上皮和嗅球细胞功能异常[10]，患者临床表现为嗅觉障碍等非运动症状。罗懿等[11]报道嗅觉障碍可被认为是PD 的早期预警筛查项目。另外，周立等[12]还提出嗅觉障碍不仅是PD 的首发症状，其严重程度与PD 病情呈显著相关性，此与本文结果一致。本文探讨了SS-16 评分对PD 诊断的临床价值，结果显示其判断PD 风险的AUC 为0.664，提示SS-16 可作为早期PD 的辅助筛查项目，但单项检测的价值有限。PD 患者嗅觉障碍仅反映嗅脑病理改变，而与黑质多巴胺神经元功能损伤无关[13]，这是造成SS-16 评分诊断早期PD 特异度较低的重要原因。

对于处于非运动症状的PD 患者，大多已伴有临床生物学标记物的异常，因而有学者认为联合检测非运动症状和生物标记物有助于提高PD 阳性检出率[14]。由SNCA 基因编码组成的路易小体是PD重要的病理标记物，SNCA 不仅可通过激活小胶质细胞，成为PD 的始发因子，还可能成为SNCA 基因变异和PD 易感性的诱因[15]。既往有报道显示脑脊液SNCA 与Hoehn-Yahr 分级相关，对PD 和阿尔茨海默病鉴别诊断也有辅助作用，但临床也有研究认为脑脊液SNCA 在健康志愿者与PD 患者间无显著差异[16-17]，且受标本取材限制，脑脊液SNCA 检测在临床应用难以推广。而外周血作为目前临床实验室常用检测标本，因其易受红细胞污染，PD 患者外周血SNCA 仍存在争议[18]。本研究选用唾液作为实验标本，不仅因唾液标本具有无创、简便易收集特点，且最近有研究证明分泌唾液的下颌下腺是PD早期的受累靶器官[19-20]。本研究采用ELISA 法进行检测，结果发现唾液SNCA 与PD 病情程度呈显著相关性，且唾液SNCA 诊断PD 的AUC 为0.716，提示唾液SNCA 有可能成为PD 早期筛查的潜在生物标记物。

本研究联合应用SS-16 评分和唾液SNCA，结果显示其AUC 达0.807，显著高于SS-16 评分与唾液SNCA 单项检测的AUC 值，说明生物标记物与非运动症状联合筛查模式有助于提高PD 的敏感度和特异度。