苏木乙酸乙酯提取物对动脉粥样硬化模型大鼠总胆固醇及白细胞介素-18的影响

袁 野，范增光

动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是由脂质驱动的一种缓慢进展的炎症过程，当粥样斑块破裂时会导致冠心病、脑卒中及外周动脉疾病等的发生，已成为危害人类健康的主要危险因素[1-2]。已有研究表明，血清总胆固醇(TC)及白细胞介素-18(IL-18)在AS的形成中均具有明显的促进作用，是预测AS发生、发展的重要指标。在我国，中药尤其是一部分活血化瘀药物在抗AS方面具有较好的疗效，在临床上得到了广泛的应用[3]。而中药苏木具有活血祛瘀等作用，在临床上得到反复的验证。近年来，随着苏木现代药理研究的不断深入，进一步证实苏木及其提取物具有抗炎、免疫抑制、抗氧化、保护血管、抗心脏移植排斥反应等药理作用[4-5]。基于此，本研究观察苏木乙酸乙酯提取物对AS模型大鼠TC及IL-18水平的影响，探讨其抗AS的部分机制。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康成年雄性SD大鼠40只，体重(200±20)g，实验动物购于黑龙江中医药大学实验动物中心，合格证书号：SCXK-(黑)2013-004，在适宜温度、湿度、风速的室内饲养，12 h明暗循环，24 h自由获取食物和水。

1.2 苏木提取物的制备 苏木产地云南，药材购于黑龙江省药材公司，委托黑龙江中医药大学药学院进行提取和制备。具体方法：经生药鉴定制成苏木粗粉(40目)，浸泡于75%的乙醇溶液中，经重复回流2次，去渣，加热，水浴蒸干制成苏木醇提取干粉，将提取的干粉与双蒸水混匀得到混悬液，再用乙酸乙酯萃取，进而回收得到苏木提取物。

1.3 实验药物 辛伐他汀片(杭州默沙制药有限公司生产)，羧甲基纤维素钠(河北石家庄森隆化工有限公司生产)，维生素D3注射液(上海通用药业股份有限公司生产)1 mL；酶联免疫吸附实验(ELISA)试剂盒(上海信裕生物生产)。辛伐他汀混悬液制备：将辛伐他汀溶于羧甲基纤维素钠溶液中，得到浓度为0.42 mg/mL的混悬液；将苏木乙酸乙酯提取物同样溶于羧甲基纤维素钠溶液中，得到浓度为0.115 g/mL的混悬液。

1.4 AS模型建立 将大鼠适应性喂养7 d，然后腹腔注射维生素D3注射液7×105U/(kg·d)，每日1次，共注射3 d，同时喂高脂饲料12周(93.4%普通饲料+5%猪油、0.1%丙硫氧嘧啶、1%胆固醇、0.5%胆酸钠)。

1.5 实验分组与给药 将全部SD大鼠适应性喂养7 d后采用随机分组方法分为空白组、模型组、辛伐他汀组及苏木乙酸乙酯提取物组，每组10只。喂养12周后，第13周对各组大鼠进行灌胃，连续4周。根据课题组前期实验结果及人鼠剂量换算后给药，其中空白组、模型组均灌服等体积的羧甲基纤维素钠10 mL/(kg·d)；辛伐他汀组：灌服含0.42 mg/mL辛伐他汀的羧甲基纤维素钠混悬剂10 mL/(kg·d)；苏木乙酸乙酯提取物组：灌服含生药0.115 g/mL的羧甲基纤维素钠10 mL/(kg·d)。

1.6 标本取材 实验16周后，将大鼠充分麻醉后固定四肢，进行腹主动脉采血，经离心10 min后取得血清，于冰箱内冷藏待检，然后检测TC，ELISA法检测血清IL-18的表达。

2 结 果

2.1 大鼠一般状态 在12周模型复制期间，40只大鼠未出现死亡情况，给药灌胃期间模型组死亡2只，辛伐他汀组死亡1只，苏木乙酸乙酯提取物组死亡1只，大鼠总死亡率为10%，将死亡大鼠解剖发现，辛伐他汀组1只大鼠无明显诱因导致死亡，其余3只由于灌胃时操作不当液体进入气管导致死亡。

2.2 各组TC水平比较 与空白组对比，模型组大鼠血清TC水平升高，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组对比，辛伐他汀组及苏木乙酸乙酯提取物组TC水平均降低，差异均有统计学意义(P<0.05)；与辛伐他汀组对比，苏木乙酸乙酯提取物组TC水平差异无统计学意义(P>0.05)。详见表1。

表1 各组大鼠TC水平比较(±s) 单位：mmol/L

2.3 各组血清IL-18水平比较 与空白组对比，模型组大鼠血清IL-18水平升高，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组对比，辛伐他汀组及苏木乙酸乙酯提取物组IL-18水平均降低，差异均有统计学意义(P<0.05)；与辛伐他汀组对比，苏木乙酸乙酯提取物组IL-18水平差异无统计学意义(P>0.05)。详见表2。

表2 各组大鼠血清IL-18 水平比较(±s) 单位：pg/mL

3 讨 论

苏木，又名赤木、苏方、苏方木等，为豆科植物苏木的干燥心材，在我国主要分布于两广、四川、贵州等地，但以广西为主要产地，其味甘、咸，微涩，性平，归心、肝脾经，是一味常用活血化瘀药，具有活血化瘀、消肿止痛的作用[6-8]。赵焕新等[9]为证实苏木的主要化学成分，从苏木乙酸乙酯提取物中分离出8个化合物，同时，将这8种化合物在体外培养，结果发现其对内皮细胞损伤具有明显的保护作用。有研究表明，苏木乙酸乙酯提取物具有明显的抗炎及抗血脂的药理作用[10]。近年来，苏木在心血管领域，尤其在抗AS方面的应用越来越广泛。

在AS的形成过程中，脂肪浸润学说、炎症反应学说等受到了人们的广泛关注。特别在AS发生、发展的过程中，炎症与血脂代谢紊乱两者往往有着一定的联系，相互影响，加快了AS的形成。血脂代谢异常会刺激血管内皮细胞释放炎性细胞，而炎性细胞移至内皮下，会转换成巨噬细胞，形成泡沫细胞贴敷于血管壁上，后逐渐演变为脂质斑块，而斑块不断聚集会导致动脉壁增厚变硬，血管腔狭窄，甚至会发生完全闭塞，此外，不稳定的粥样斑块破裂极易导致局部血管出血、钙化等，继而导致急性心脑血管事件的发生[11]。而血清TC是血脂成分中的一项极为重要的指标，其含量增加会促使红细胞的硬化，进而影响红细胞的变形能力，使血液黏稠性增加、细胞膜的流动性下降，引起血脂代谢紊乱[12]。师豪等[13]研究表明TC等血脂指标异常的表达可能是冠状动脉粥样硬化斑块形成的重要机制之一。而炎症反应是由一系列致炎因子及细胞因子参与的复杂过程。研究表明，白细胞介素常作为炎症的特异指标在AS发生发展的过程中都有不同程度的表达，其变化与AS的程度具有显著的关系。IL-18是一种多效性前炎性细胞因子，也是强大的致炎诱导剂，在调节免疫反应中起重要作用[14]。胡秋玲等[15]研究也表明，IL-18可上调多种炎性因子，比如上调干扰素-γ(INF-γ)的表达和诱导Th1型免疫反应，增加斑块易损性效应及促进AS形成，是AS形成的重要生化标志物。他汀类药物既具有降血脂的作用，又具有抗炎作用，在AS的治疗中起重要的作用。而中药对AS的疗效同样显著，越来越受到人们的重视。有研究证明，降血脂与抗感染治疗可以减慢甚至会逆转动脉粥样斑块的病变过程，调控粥样斑块，减轻病人的临床症状，减少急性心脑血管事件发生[16]。

本实验结果表明，在给予高脂饮食的基础上腹腔注射维生素D3可使SD大鼠血清TC及IL-18水平升高，而给予辛伐他汀和苏木乙酸乙酯提取物治疗后可不同程度降低TC及IL-18水平。根据实验结果可以初步得出结论：苏木乙酸乙酯提取物可降低AS模型大鼠血清TC及IL-18水平，其机制可能是通过抑制炎症反应及改善血脂水平两方面同时对AS起作用。但其抗AS的另一些机制还有待今后进一步的研究。