不同产地木瓜中齐墩果酸与熊果酸含量分析

单莉，陈莉，杨洁，徐晨昱，孟楣

作者单位：安徽中医药大学第一附属医院药学部三级实验室，安徽 合肥230031

木瓜为蔷薇科植物贴梗海棠Chaenomeles speciosa（Sweet）Nakai的干燥成熟果实［1］，早在《神农本草经》中记载：“木瓜，生夷陵”（夷陵，今湖北宜昌附近）；《本草经集注》：“山阴兰亭尤多，今处处有之，而宣城者为佳。”；《本草乘雅半偈》中也有“木瓜处处有之，西雒者最胜，宣城者亦佳，山阴兰亭尤多也。”的记载；《本草纲目》中有“木瓜处处有之，而宣城者为佳”的记载。可见，本草古籍中木瓜的产地为安徽、湖北等地。

现代木瓜的主要产区有安徽、湖北、重庆等地［2-3］，与本草古籍中的记载基本吻合。综上所述，本课题组选择安徽、湖北、重庆三地的木瓜进行质量比较。文献研究显示，木瓜中化学成分众多［4-7］，不同产地木瓜质量的比较中已进行木瓜多糖含量、多种有机酸含量等的研究［8-10］，而针对有效成分齐墩果酸/熊果酸含量比值进行研究的文献较少，因此，本课题组于2017年6月至2018年6月以齐墩果酸、熊果酸的含量为指标，采用高效液相色谱法（HPLC）进行含量测定和SPSS软件分析比较不同产地木瓜质量，为木瓜药材质量评价提供科学依据。

1 材料与方法

1.1仪器美国Agilent1260高效液相色谱仪（DAD检测器、四元低压梯度泵、在线脱气装置和自动进样器）；BP211D电子天平（SartoriusBP211D）；超声波清洗器（KQ-300VDE，昆山市超声仪器有限公司）；水浴锅（HH-S，巩义市英峪予华仪器厂）。

1.2试剂甲醇为色谱纯；对照品：齐墩果酸（批号110709-201206）、熊果酸（批号110742-200314），均购于中国食品药品检定研究院；其余试剂均为分析纯。38批（安徽产地19批，湖北产地13批，重庆产地6批）木瓜药材经安徽中医药大学中药资源教研室彭华胜教授鉴定为皱皮木瓜Chaenomeles speciosa（Sweet）Nakai，基源均为贴梗海棠。

1.3实验方法

1.3.1 供试品制备 取干燥木瓜细粉约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定质量，超声处理20 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足失去质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

1.3.2 对照品的制备 分别称取齐墩果酸、熊果酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1毫升含齐墩果酸1.01 mg、熊果酸1.43 mg的混合对照品母液；精密量取混合对照品母液适量，加甲醇稀释成每1毫升含齐墩果酸0.101 mg、熊果酸0.143 mg的混合对照品储备液。

1.3.3 色谱条件［11-12］色谱柱：Agilent 5HC-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5µm）；流动相：甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（265∶35∶0.1∶0.05）等度洗脱；检测波长：210 nm；流速：0.6 mL/min；柱温：25℃；进样量：20µL。供试品色谱中齐墩果酸和熊果酸峰的保留时间与对照品的保留时间一致（图1），理论塔板数按齐墩果酸峰计不低于5 000，分离度大于1.5。

图1 对照品（A）与木瓜供试品（B）高效液相色谱图

1.3.4 方法学考察 在“1.3.3”项下进行方法学考察，齐墩果酸在检测浓度范围为0.020～0.202 g/L，熊果酸在检测浓度范围为0.029～0.286 g/L内与峰面积呈良好的线性关系，精密度试验良好，供试品中的齐墩果酸和熊果酸在24 h内稳定，本方法重复性良好。加样回收率试验齐墩果酸平均回收率为100.04%，相对标准偏差（RSD）为1.65%，熊果酸平均回收率为99.45%，RSD为1.56%，表明结果可靠。

1.4统计学方法采用SPSS 17.0软件进行统计分析。符合正态分布的计量资料以xˉ±s表示，多组间比较方差齐性则采用单因素方差分析；方差不齐则采用Kruskal-Wallis非参数检验，差异有统计学意义则进行多组间的两两比较。以Freeman-Halton检验比较各产地达标率。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1各产地木瓜含量测定结果比较Kruskal-Wallis非参数检验表明湖北产地齐墩果酸含量显著高于安徽、重庆两产区（P＜0.05）；湖北产地熊果酸含量显著低于安徽、重庆两产区（P＜0.05）；安徽产地总含量显著高于湖北、重庆两产区（P＜0.05）。湖北产地总含量标准差最小，均一性较好；重庆产地总含量标准差最大，离散程度较大。见表1。

2.2各产地木瓜总含量达标率在现行药典标准（≥5.0 mg/g）下，安徽产区总含量达标率高于重庆产区（P＜0.05）；提高标准（≥6.0 mg/g）表明安徽产区总含量达标率高于湖北产区（P＜0.05）。见表2。

表1 各产地木瓜含量测定结果比较/

表1 各产地木瓜含量测定结果比较/

注：与湖北产地比较，aP＜0.05；与安徽产地比较，bP＜0.05

产地安徽湖北重庆H值P值齐墩果酸/熊果酸含量比值1.0±0.3a 5.6±1.0 2.1±2.8a 18.454＜0.001批数19 13 6齐墩果酸含量/（mg/g）3.2±0.8a 4.6±0.4 1.9±0.9a 19.962＜0.001熊果酸含量/（mg/g）3.4±0.9a 0.8±0.1 3.5±1.9a 18.246＜0.001总含量/（mg/g）6.6±1.2 5.5±0.4b 5.4±1.7b 11.377 0.003

表2 各产地木瓜齐墩果酸与熊果酸总含量不同标准下达标率/%

3 讨论

3.1产地对木瓜质量的影响课题组在2009年对不同产地木瓜中齐墩果酸与熊果酸进行过初步研究［13］，涉及皱皮木瓜及其不同亚型品种、光皮木瓜和榠楂等不同基源的含量比较，存在采样量少和部分品种不是现行药典收载品种等问题。随着中药木瓜的种植栽培技术的发展，皱皮木瓜得到广泛的种植，故本次实验在前期研究基础上，选择基源为贴梗海棠的木瓜药材，以齐墩果酸、熊果酸含量为指标，不局限于宣城、资丘等地，扩大采样范围，加大样本量。研究表明，湖北产地木瓜的市场占有率较高，但其熊果酸含量较低；安徽产地木瓜药材总含量最高，齐墩果酸、熊果酸含量均较高；重庆产地总含量离散程度较大，提示均一性较差；提高现行药典标准（≥6.0 mg/g），安徽产地木瓜总含量达标率高于湖北产地；综上可知，安徽产地木瓜质量较优良，与古籍中记载的道地产区不谋而合。

3.2齐墩果酸/熊果酸含量比值对不同产地木瓜药材的区分含量测定结果发现，在现行药典含量标准基础上，安徽产地、湖北产地达标率均为100%，不能对此2个产地木瓜进行质量划分。本课题组在药典总量控制的基础上，考察了齐墩果酸/熊果酸含量比值，发现安徽产地木瓜中齐墩果酸与熊果酸含量比值为（1.0±0.3），接近1.0；而湖北产地木瓜中齐墩果酸与熊果酸含量比值（5.6±1.0），接近5.6；可作为两主要产地的质量划分依据之一，弥补现行药典对质量控制的不足。本研究利用齐墩果酸/熊果酸含量比值可以将安徽产地与湖北产地木瓜进行区分；但此次实验中重庆产地样本量较少，未能明确其与安徽产地在比值上的差异性，将在后续的实验中进一步研究。