嗅素结构域家族蛋白4在类风湿性关节炎的表达及其临床意义

王茹，赵瑞婧，范亚莉，宋雅楠，张东升，王鸽，刘旭静，王玉环

作者单位：1西安交通大学医学部，陕西 西安710061；2西安交通大学医学院附属中心医院呼吸科，陕西 西安710003；3延安大学医学院，陕西 延安716000；4西安交通大学第二附属医院内分泌科，陕西 西安710004；5延安大学咸阳医院心内科，陕西 西安712000

类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一 种以对称性多关节炎为主要临床表现的全身性、慢性、自身免疫性疾病。目前，其发病机制仍有待进一步明确。该病为一种常见的自身免疫性疾病，我国RA的患病率为32%～36%［1］。RA病人的预后在很大程度上是由疾病活动性决定的。

人类嗅素结构域家族蛋白4（olfcctomedin4，OLFM4）属于olfcctomedin家族相关成员，是一种糖蛋白，可正常表达于人的多种组织及器官。其在肿瘤组织中表达具有特异性，在胰腺癌、宫颈癌、结肠癌、胃癌等中均为高表达。其与消化系统肿瘤的关系成为近年研究的热点［2］。而本研究则通过检测OLFM4在RA关节滑膜组织中的表达，探讨其与人类风湿关节炎的临床病理关系。

1 资料与方法

1.1一般资料收集2017年10月至2018年10月期间就诊于西安市红会医院的13例确诊RA病人滑膜组织存档蜡块。其中，男性5例，女性8例；年龄范围为36～63岁，平均年龄55岁。所选病人均符合2010年美国风湿病学会（ACR）/欧洲抗风湿联盟（EULAR）修订的RA分类诊断标准。另选取14例骨关节炎病人作为对照。标本经10%中性甲醛固定、常规石蜡包埋，连续切片厚5µm。本研究符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》相关要求，病人或近亲属对研究方案签署知情同意书。

1.2方法采用SP法检测OLFM4，一抗工作浓度1∶500，HRP-DAB显色，操作严格按照免疫组化试剂使用说明书进行。免疫组化试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司，HRP-DAB显色剂、兔抗OLFM4抗体（NBP2-24535）均购自美国罗福斯生物制剂公司。

1.3结果判断标准OLFM4阳性表达定位于细胞质，染色为棕黄色［3］。随机选取3个高倍镜（40×）视野。染色强度分4级：无色为0分、浅黄色为1分、棕黄色为2分、黄褐色为3分。判断0分为阴性，1分为弱阳性，2分为阳性，3分为强阳性。

1.4统计学方法OLFM4在RA病人及骨关节炎病人滑膜组织表达，OLFM4与RA临床病理关系比较均采用χ2检验，统计分析由SPSS 18.0软件完成，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 OLFM4在骨关节炎、RA病人滑膜组织中的表达情况在骨关节炎病人滑膜组织中OLFM4细胞质及细胞核均未出现明显的棕黄色或棕褐色颗粒，镜下视野呈阴性表达（见图1），而在RA病人中OLFM4表达时，阳性表达定位于细胞质，染色为棕黄色（见图2）。14例骨关节炎病人滑膜组织中，OLFM4阳性表达1例（7.14%），其中弱阳性1例（7.14%），阴性表达13例（92.86%）；13例RA病人滑膜组织中，OLFM4阳性表达10例（76.92%），其中强阳性5例（38.46%），弱阳性5例（38.46%），阴性表达3例（23.08%），OLFM4在RA病人滑膜组织中的阳性表达高于骨关节炎病人（χ2＝13.595，P＝0.012）。

2.2 OLFM4表达与类风湿性关节炎病人临床病理的关系13例类风湿性关节炎滑膜组织标本中OLFM4表达与病人类风湿因子表达有关（P＜0.05），但与病人性别、年龄、ESR、CRP、及抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体并不具有明显的相关性（P＞0.05），见表1。

表1 OLFM4的表达与类风湿性关节炎病人临床病理参数的关系/例

3 讨论

RA对女性的影响较男性多3倍以上，于各年龄层次均可发病，但患病者年龄多集中于40～60岁之间。RA的早期临床表现为关节肿胀及疼痛，人们往往可于体检时发现，因此快速准确地转诊到风湿病专科对于早期缓解疼痛症状和预防或减少残疾至关重要［4］。近年来，针对该疾病的相关研究不断深入，但仍尚无特异性的临床诊断方法［5］。因此，如何能够早期、迅速，且特异性的确诊RA是我们所迫切需要解决的问题。

OLFM4，又称为 hOLfD［6］、GW112［7］，OLFM4 是olfcctomedin家族成员之一，该家族成员总数超过100多种，可分为7个亚族，因为都具有由一个250个氨基酸构成的C-末端序列，故被叫做“olfcctomedin结构域”。在细胞增殖、黏附和周期调节、神经发育及肿瘤发生、发展中均发挥着非常重要的作用［6］，OLFM4最初发现于人的结肠炎黏膜隐窝上皮细，它位于人类第13号染色体q14.3，含有5个外显子，跨度为23 000 bp，大小在156～801 bp，内含子大小在980～7 400 bp［2］。OLFM4 在许多癌症肿瘤细胞中已被证明有着密切的相关性，如胃癌［8］、胰腺癌［9-10］、结直肠癌［11］、非小细胞肺癌［12］等，其更是结直肠癌不同阶段的定量蛋白质组学方法中新的非转移性肿瘤标记物［13］。同时，其对于小肠干细胞分化也有一定的作用［14-15］。此外，其参与人髓系细胞白血病细胞的生长、分化、凋亡等过程［16-17］。但OLFM4在自身免疫性疾病特别是RA分子研究方面仍较为新颖，以往少见报道。本课题组通过检测OLFM4在RA病人滑膜组织中的表达，旨在研究其表达是否会与RA的发病有关。进一步的研究分析发现，RA病人滑膜组织OLFM4水平与部分临床病理学参数有关［17］，如病人RF是否异常，提示OLFM4在RA的发生发展中可能发挥相关作用。

本研究严格按照实验规范执行，但仍可能存在以下几方面的局限：首先，纳入研究的病人数较少，故而可能会导致汇总结果偏高。其次，同样由于研究对象数量较少，导致本研究未能分析OLFM4表达与病人预后之间的关系。再次，研究结果可见OLFM4在骨关节炎病人的滑膜组织表达几乎均为阴性。因此，仍需更大量、更多样本、更高质量的研究来科学、客观、全面的评价OLFM4在诊断RA方面的价值。

通过以上的实验，我们可以看到OLFM4在确诊为RA病人的滑膜组织中的表达与骨关节炎病人滑膜组织表达差异有统计学意义。提议对疑似RA的成人进行OLFM4表达检测。总之，OLFM4在提示RA的病情发展中具有重要作用，可为RA及骨关节炎的早期检测、诊断、治疗、预防提供新的靶点和分子标志物。

（本文图1，2见插图12-1）