深圳龙华地区β-地中海贫血基因型与红细胞参数分析

刘运洪 崔晓阳 魏晓珠 汪宇婴 张婧惟 苏维 吴文权 孙平 姜孝新★

广东省为地中海贫血（下称地贫）高发病区之一，作为广东省外来人口占比最高的城市，深圳市的外来人口带来了不同地贫基因型，可能产生了新的基因型组合。在深圳市龙华区，地贫的防治工作已经成为优生优育工作的重点之一，地贫基因的检测已成为孕妇产检常规开展项目。血液学参数，尤其是红细胞计数（red blood cell count，RBC）、血红蛋白浓度（hemoglobin concentration，HGB）、平均红细胞体积（mean corpuscular volume，MCV）、平均红细胞血红蛋白量（mean corpuscular hemoglobin，MCH）、平均红细胞血红蛋白浓度（mean corpuscular hemoglobin concentration，MCHC）、红细胞分布宽度（red cell distribution width，RDW）等血液学参数和HbA亚型（hemoglobin A、A2、and F，HbA、HbA2 和HbF）检测分析，对地贫患者筛查和亚型鉴别有重要价值［1］。近年，裴元元［2］、刘洋［3］、贺志军［4］等对不同地贫基因型的血液学参数进行统计分析，指出不同基因型β-地贫患者的红细胞参数存在差异，可以用来辅助地贫类型的鉴别，但这些研究或者没有综合考虑性别、年龄等影响因素，还不够全面。因此，本文全面地研究了近一年龙华地区β 地贫发病率和基因型分布，以及患者血液特征在不同性别和基因型间的差别，以期为临床提供更准确的诊断依据，报告如下。

1 材料和方法

1.1 一般资料

选取2018年4月至2019年4月在本院就诊并进行地贫基因检测的受检者（包括婚检、产检、体检人群），共计4 983 例。受检者纳入标准为：①主要为实验室检测血液学指标异常（平均红细胞体积MCV＜80fl 和/或平均红细胞血红蛋白含量MCH＜27pg）、Hb 电泳提示有地中海贫血（HbA2≤2.5%或HbA2≥3.5%或正常但HbF≥3%）；②家族中有地中海贫血的患者、地中海贫血基因携带者的孕前和产前检查者以及疑似地贫的儿童等。排除标准为：①缺铁性贫血；②甲状腺、肝脏及自身免疫病等导致红细胞血液学参数明显变化的相关疾病。本研究获得深圳市龙华区人民医院医学伦理委员会批准，受检者及其家属均知情了解并签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 血液学参数检测

采集受检者肘静脉血2 mL，乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）抗凝，用全自动血细胞仪（Sysmex XN-10，希森美康医用电子（上海）有限公司）检测RBC、Hb、MCV、MCH、MCHC、RDW 等。使用全自动毛细管电泳仪（SEBIA CAPILLARYS，赛比亚公司，法国），检测参数为HbA、HbA2、HbF 和变异Hb。标本均在2 h 内检测完毕，所使用试剂均为原厂配套试剂。

1.2.2 地贫基因检测

样本要求同血常规检测，采集外周静脉血后充分混匀，置于2～8℃冰箱保存。采用自动核酸提取仪（Smart-32 型，中山大学达安基因股份有限公司）及全血基因提取试剂盒（磁珠法）（中山大学达安基因股份有限公司）提取外周血基因组DNA。使用基因诊断试剂盒（中山大学达安基因股份有限公司）和流式荧光检测仪（MAGPIX 多功能液态悬浮芯片系统，Luminex 公司，美国）检测β 地贫的17 种点突变，包括PCR 扩增，杂交和检测分析，具体步骤严格按照说明书操作。

1.3 统计学方法

使用SPSS 23.0 软件进行统计学分析。计数资料用n（%）表示，计量资料以（±s）表示。两组均数比较采用两独立样本t检验；多组比较用方差分析，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 地贫基因检测结果

4 983 例标本共检出携带β 地贫基因突变436例，排除其他疾病后，单β 地贫型400 例，检出率为8.03%。共检出14 种突变类型，3 种突变未检出（-30，-32 和CD31），未发现纯合子基因型。其中14 岁以上患者338 人，男性107 例，女性231 例，14 岁及以下儿童和婴儿62 例。见表1。

2.2 血液学参数统计

14 岁以上β 地贫患者共338 人，其中281 人接受了红细胞血液学参数检测，男性80 例，女性201例，均表现为小细胞、低色素，细胞大小不一且HbA2 明显升高。男性与女性的平均年龄比较差异具有统计学意义（P＜0.05），β0/βN型、β+/βN型以及βE/βN型之间的部分血液学参数比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表2和表3。

表1 400 例β-地中海贫血患者的基因型分布Table 1 Genotypic distribution of 400 patients with β-thalassemia

表2 80 例男性β 地贫不同基因型携带（患）者与对照组血常规红细胞参数比较（14 岁以上）（±s）Table 2 Comparison of red blood cell parameters between 80 male β-thalassemia carriers（patients）with different genotypes（over 14 years old）（±s）

表2 80 例男性β 地贫不同基因型携带（患）者与对照组血常规红细胞参数比较（14 岁以上）（±s）Table 2 Comparison of red blood cell parameters between 80 male β-thalassemia carriers（patients）with different genotypes（over 14 years old）（±s）

注：a 为β0/βN vs β+/βN；b 为β0/βN vs β+/βN vs βE/βN；c 为P＜0.05。

组别β0/βN β+/βN βE/βN P 值a F 值b P 值b n 40 36 4---RBC（×1012/L）6.48±0.89 6.44±0.65 5.44±0.43 0.840 3.303 0.042 HGB（g/L）128±15.58 130.58±12.35 138.25±7.97 0.494 1.006 0.371 HCT（%）41.39±4.79 42.08±4.15 41.98±1.58 0.507 0.236 0.790 MCV（f1）64.173±4.25 65.46±5.16 77.32±3.18 0.237 14.534 0.000c MCH（pg）19.89±1.34 20.32±1.74 25.45±1.05 0.223 24.238 0.000c MCHC（g/L）309.95±8.99 310.56±8.68 329.00±9.06 0.767 8.579 0.000c组别β0/βN β+/βN βE/βN P 值a F 值b P 值b n E（%）40 36 0 0 4---RDW（%）17.42±1.40 15.99±1.34 13.50±0.68 0.000c 21.584 0.000c HbA（%）93.63±1.45 93.85±1.46 69.97±1.36 0.557 505.193 0.000c HbA2（%）5.65±0.72 5.26±0.72 3.73±0.15 0.027c 17.616 0.000c HbF（%）0.72±1.02 0.89±1.33 0.33±0.57 0.667 0.328 0.772 25.97±1.27---年龄（岁）30.27±6.68 30.31±6.15 29.25±4.50 0.982 0.051 0.950

3 讨论

β 地贫主要由β 珠蛋白基因点突变所致，少部分是由于β 珠蛋白基因的缺失所引起［5］。β 珠蛋白链合成减少即为β+地贫，β 珠蛋白链完全不能合成即为β0地贫，该病轻者可无临床表现，重者以进行性溶血性贫血为主要特征，中重型地贫属于致死或致残性疾病［6-7］。对突变基因携带者大规模筛查，防止中重型地贫患儿出生是目前最有效的措施［8］。

β 地贫基因突变类型与突变频率存在地域和人种差异，我国长江以南的广大地区，尤其以广西、广东和海南3 省是高发区［9-11］。目前，在中国已报道有34 种β 地中海贫血基因突变，中国人最常见的6 种基因突变类型为CD41-42、IVS-II-654、CD17、-28、CD71-72、CD26［12］。

本研究中共发现14 种β 基因突变类型，与周围地区相比较，前3 位突变型构成比接近的有：东莞地区［13］、广州地区［14］、惠州地区［15］。前2 位突变型构成比接近的有：广东清远地区［16］，广东河源客家人［17］。与深圳市内近年相比，有一定差别，深圳市南山区［18］也是CD41-42/N、IVS-II-654/N 最常见。龙岗区［19］以CD41-42/N 和IVS-II-654/N 最常见，而成年以CD41-42、IVS-II-654 最常见。光明区［20］2015年CD41-42、CD17、-28 最常见。盐田区［21］CD41-42/N、IVS-II-654/N、-28/N。说明本区域携带地贫基因的比例，与同在深圳市内的南山区、龙岗区相近。而与光明区和盐田区有更大的差别，一定程度上反应了人口结构的差别和人口流动规律，但需要结合人口变化数据进一步研究。与本地区往年报道数据相比，变化不大，龙华地区［22］2013年4月至2015年3月以CD41-42，IVS-II-654，CD17 为主，排前三的基因类型CD41-42/N 和CD17/N 比率下降，近年来地贫相关筛查成为常规项目，一定程度上说明地贫疾病的防控工作取得了成效。

表3 201 例女性β 地贫不同基因型携带（患）者与对照组血常规红细胞参数比较（14 岁以上）（±s）Table 3 Comparison of red blood cell parameters between 201 female β-thalassemia carriers（patients）with different genotypes（over 14 years old）（±s）

表3 201 例女性β 地贫不同基因型携带（患）者与对照组血常规红细胞参数比较（14 岁以上）（±s）Table 3 Comparison of red blood cell parameters between 201 female β-thalassemia carriers（patients）with different genotypes（over 14 years old）（±s）

注：a 为β0/βN vs β+/βN；b 为β0/βN vs β+/βN vs βE/βN；c 为P＜0.05。

组别β0/βN β+/βN βE/βN P 值a F 值b P 值b n 112 82 7---RBC（×1012/L）4.84±0.73 4.77±0.74 4.50±0.44 0.539 0.832 0.437 HGB（g/L）98.24±11.94 100.79±13.36 115.86±14.63 0.164 6.759 0.001c HCT（%）31.66±4.02 32.07±4.21 35.21±4.25 0.495 2.525 0.083 MCV（f1）65.70±4.53 67.57±5.70 78.10±3.04 0.012c 21.455 0.000c MCH（pg）20.41±1.56 21.25±2.06 25.71±1.60 0.001c 31.392 0.000c MCHC（g/L）310.61±8.35 314.48±10.89 329.286±10.87 0.006c 14.643 0.000c组别β0/βN β+/βN βE/βN P 值a F 值b P 值b n 112 82 7---RDW（%）16.27±1.65 15.337±1.13 14.81±2.43 0.000c 10.860 0.000c HbA（%）92.66±3.22 93.46±1.46 69.42±1.22 0.120 185.125 0.000c HbA2（%）5.40±0.60 5.17±0.50 3.74±0.36 0.035c 21.289 0.000c HbF（%）1.57±1.92 1.34±1.33 0.33±0.65 0.475 1.156 0.318 E（%）0 25 26.58±0.76-3.637 0.129年龄（岁）27.64±4.56 28.03±6.17 28.29±4.39 0.583 0.181 0.834

β 地贫的血液学特征以MCV、MCH 明显减小的小细胞、低色素为主要特征，MCV、MCH 和HbA2 在地贫初筛中有重要价值［23］。之前的研究报道也有关于不同基因型β 地贫的血液学特征并做了统计学分析。裴元元等［2］报道深圳龙岗地区β0/βN型 和β+/βN型地贫之间，RBC、MCV、MCH、RDW-CV、HbA2 均有统计学差异，但是作者没有将儿童和成年、男性和女性分开来进行分析。本实验结果说明男性β 地贫患者代偿造血情况更重，可能与不同性别的激素水平有关，需要后续研究证明。

本研究还检出血常规接近正常的两种基因型各1 例，其中CAP 型地贫患者的MCV、MCH 分别为97.50 fL、31.40 pg，Int 型地贫患者MCV、MCH分别为83.30 fL、27.70 pg，且两例均为女性，与其他基因型相差较大。如果仅通过血液学筛查极易造成漏诊，有赖于DNA 分子诊断。

综上所述，本研究显示深圳市龙华区β 地贫基因突变最常见类型为CD41-42/N、IVS-II-654/N和CD17/N 基因型。本研究还使用了更详细的分组比较了本地区不同基因型的β 地贫患者血液学参数，研究结果可用于辅助当地不同类型地贫的鉴别诊断，为本地区的地贫防控提供有价值的基础资料，具有重要意义。