番茄红素联合地塞米松治疗双硫仑样反应的研究＊

陈星宇 胡薇 朱法蓉 邢琪 汪莉萍

双硫仑样反应是临床最常见的药物副反应之一，临床常利用其副反应帮助嗜酒患者戒酒，故又称戒酒硫样反应[1]。双硫仑样反应临床症状多样，病情严重程度与药物、酒精摄入量、患者体质等因素密切相关，个体差异大，病情轻重不一，严重影响患者工作与生活质量，更有甚者会有生命危险[2-3]。药物与酒精的中间产物抑制乙醛脱氢酶活性导致乙醛代谢受阻并大量蓄积是目前双硫仑样反应机制的主流学说[4]。近年来随着医疗卫生知识的普及，患病率得到了有效的控制，但是患者服用头孢类药物期间或停药后摄入酒水的案例仍时有发生。当前，关于双硫仑样反应的研究几乎以临床案例分析为主，基于动物实验的研究却较少，本实验参考刘非凡等[5-6]建立动物模型的方法及其研究成果，对番茄红素和地塞米松缓解双硫仑反应综合征的作用机制进行进一步研究。

1 材料与方法

1.1 实验动物

SPF级别的昆明种小鼠56只，25～35 g，雌雄各半，由济南朋悦实验动物繁育有限公司提供。实验前3 d使小鼠自由摄食、饮水，适应实验室环境。

1.2 药品及试剂

番茄红素（货号：B20378，规格：20 mg粉剂，上海源叶生物科技有限公司）；地塞米松磷酸钠（货号：MB1536，规格：1 g粉剂，大连美仑生物科技有限公司）；头孢哌酮钠（货号：CN00021511，规格：2 g粉针剂，丽珠集团丽珠制药厂）；总超氧化物歧化酶活性测试盒（货号：A001-3-2，规格：96 T，南京建成生物工程研究所）；丙二醛测试盒（货号：A003-1，规格：100 T/96样，南京建成生物工程研究所）；谷丙转氨酶试剂盒（货号：C009-2，规格：96 T，南京建成生物工程研究所）；乙醛脱氢酶活性测试盒（货号：A075-1-1，规格：50管/48样，南京建成生物工程研究所）；BCA蛋白浓度测定试剂盒（货号：P0010S，规格：200 T，Beyotime）；乙酸（货号：10000218，规格：500 ml，上海国药集团化学试剂有限公司）；无水乙醇（国药集团化学试剂有限公司）；食用油（嘉里粮油有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 动物分组与处理 56只小鼠随机分为7组（n=8）：正常组（N组）、模型组（O组）、地塞米松组（P组）、番茄红素低、中、高剂量组（L组、M组、H组）、中剂量番茄红素联合地塞米松组（U组）。N组：生理盐水灌胃（0.2 ml/10 g）、生理盐水腹腔注射（0.2 ml/10 g）；O组：前3 d用浓度50%酒精灌胃（0.2 ml/10 g），后3 d于灌胃前1 h腹腔注射头孢哌酮钠（0.5 mg/g），其他各组动物模型均按照O组相同方法建立；P组：注射头孢哌酮钠1 h后给予腹腔注射0.002 mg/g地塞米松磷酸钠液；L组、M组和H组：注射头孢哌酮钠1 h后给予食用油稀释成低、中、高浓度（5、10、20 mg/kg）番茄红素灌胃；U组：注射头孢哌酮钠1 h后给予腹腔注射0.002 mg/g地塞米松磷酸钠液联合10 mg/kg番茄红素灌胃。

1.3.2 检测指标及方法 各组动物最后1次腹腔注射60 min后处死小鼠，用生理盐水灌注动物肝脏至发白，取肝脏冻存于-80 ℃，各组取肝脏及保存方法同上。取组织块研磨制成10%组织匀浆，12 000 r/min，4 ℃，离心20 min，取上清液即10%匀浆上清液待测。样本蛋白浓度、SOD、MDA、ALT、ALDH均按照相应试剂盒说明书步骤测试。

1.4 观察指标

小鼠肝脏超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性、乙醛脱氢酶（ALDH）活性、丙二醛（MDA）含量。

1.5 统计学处理

采用SPSS 16.0统计软件对数据进行分析，计量资料以（±s）表示，采用t检验及单因素方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组小鼠肝脏SOD活性、MDA含量比较

L组及N组SOD活性高于O组，MDA含量与O组接近，但差异均无统计学意义（P>0.05）；M组和H组SOD活性均高于L组，MDA含量均低于L组，差异均有统计学意义（P<0.05），但M组及H组SOD活性、MDA含量比较差异无统计学意义（P>0.05）；P组及U组SOD活性均高于其余组，MDA含量均低于其余组，差异均有统计学意义（P<0.05），但P组及U组SOD活性、MDA含量比较差异无统计学意义（P>0.05），见表1。

2.2 各组小鼠肝脏ALT活性比较

O组ALT活性低于N组，但差异无统计学意义（P>0.05）；L组、M组和H组ALT活性均高于O组，但差异无统计学意义（P>0.05），L组、M组和H组ALT活性比较差异无统计学意义（P>0.05）；P组及U组ALT活性均高于其余组，差异均有统计学意义（P<0.05），但P组及U组ALT活性比较差异无统计学意义（P>0.05），见表1。

2.3 各组小鼠肝脏ALDH活性比较

O组ALDH活性低于N组，差异有统计学意义（P<0.05）；L组、M组和H组ALDH活性均高于O组，但差异无统计学意义（P>0.05），L组、M组和H组ALDH活性比较差异无统计学意义（P>0.05）；P组和U组ALDH活性均高于其余组，差异均有统计学意义（P<0.05），但P组及U组ALDH活性比较差异无统计学意义（P>0.05），见表1。

表1 各组小鼠肝脏中SOD、MDA、ALT、ALDH比较 （±s）

表1 各组小鼠肝脏中SOD、MDA、ALT、ALDH比较 （±s）

*与O组比较，P<0.05；其余统计分析结果以文字描述为准。

组别 SOD[U/（mg·prot）] MDA[nmol/（mg·prot）] ALT[U/（g·prot）] ALDH[U/（mg·prot）]N 组（n=8） 244.33±17.50 8.80±2.07 21.12±3.09 95.63±30.52*O 组（n=8） 168.42±21.89 9.97±3.10 14.98±2.09 60.52±6.88 P 组（n=8） 411.17±33.29* 4.40±1.48* 34.77±12.13* 142.76±17.17*L 组（n=8） 177.08±28.87 10.73±2.22 16.61±2.64 61.21±9.52 M 组（n=8） 260.21±31.14* 5.97±1.43* 24.45±6.75 64.50±14.78 H 组（n=8） 279.65±84.36* 6.13±2.30* 25.04±6.46 77.43±21.57 U 组（n=8） 472.47±98.37* 4.20±1.22* 36.52±5.98* 128.37±21.08*F值 35.78 13.16 13.28 25.44 P值 <0.05 <0.05 <0.05 <0.05

3 讨论

双硫仑样反应是由于乙醛脱氢酶和多巴胺β-羟化酶功能的障碍中断乙醇的正常代谢过程，进而乙醛、多巴胺代谢障碍、滞留、蓄积，随后机体产生一系列的人体生理、病理的应激变化，最终形成一组典型的双硫仑样反应临床综合征[7]。正常代谢过程中，乙醇经细胞色素CYP2E1代谢后产生大量羟自由基、过氧化氢和超氧阴离子并促进体内氧自由基生成和脂质过氧化，诱发器官损伤，尤其是肝脏和神经系统[8-10]。同时，乙醛和氧自由基都极易与细胞内的蛋白质和其他复杂分子相互作用，形成称为加合物的混合化合物，与蛋白形成的加合物与多种疾病相关（免疫相关疾病或心血管疾病）[11-14]。大量蓄积的乙醛与谷胱甘肽和半胱氨酸结合，使其失去清除自由基作用而产生大量羟基和自由基[15]，通过氧化应激和Ca2+失衡介导的内质网应激乙醛亦可在体外诱导神经毒性，乙醛还与肝损伤及致癌作用密切相关[16-17]。可见病理过程中产生的大量自由基对机体可产生潜在损伤，氧化应激可能造成的损伤不可忽视。

番茄红素是目前自然界的植物中被发现的清除自由基的能力最强的抗氧化剂之一，其抗氧化能力其他胡萝卜素远不能及[18]。最近研究表明，番茄红素可通过清除超氧阴离子、羟基自由基减轻血管内皮及平滑肌的氧化损伤，降低组织氧化应激反应改善脂质过氧化，拮抗肝脏线粒体膜脂质过氧化，具有抗氧化、抗血脂异常和器官保护的作用[19]。因此，番茄红素缓解双硫仑样反应症状可能与清除自由基拮抗氧化应激反应和脏器保护有关。

本研究发现，地塞米松可通过提高乙醛脱氢酶活性对于降低病死率缓解临床症状具有显著作用，再一次证实乙醛脱氢酶活性受抑制是双硫仑反应的重要机制。番茄红素对于缓解双硫仑样反应症状具有一定疗效，高浓度治疗效果更佳，H组SOD活性增高（P<0.05），MDA含量降低（P<0.05），ALT和ALDH活性无显著变化，可见，高剂量番茄红素对缓解临床症状和降低病死率与氧自由基含量密切相关，与乙醛脱氢酶活性相关性较低。P组和U组ALT活性均显著增加，药物治疗造成的肝脏损伤可能与乙醛蛋白加合物和激素副作用有关。P组ALDH活性稍高于U组，其原因可能与联合用药稀释了地塞米松磷酸钠的浓度有关。U组SOD和ALDH活性均显著增加MDA含量显著降低，小鼠治疗后恢复较快并且更精神活泼，可见在提高乙醛脱氢酶活性的基础上增加机体抗氧化能力有益于双硫仑样反应小鼠快速康复。综上所述，除乙醛脱氢酶活性受抑制外，自由基在双硫仑样反应过程中具有重要意义。另有文献表明，地塞米松作为肝药酶P450诱导剂增高乙醛脱氢酶活性，还可通过调节机体的NO水平进而提高机体抗氧化能力[22]。本实验为双硫仑样反应临床治疗提供有力的理论依据，同时番茄红素应用于双硫仑样反应的剂量、疗效和肝脏保护作用仍需要进一步实验探究。