全自动阴道分泌物检测工作站性能验证方案的建立及应用

赵运转，赵 晖，宋 蓓，刘 扬，张国军

(首都医科大学附属北京天坛医院实验诊断中心，北京 100070)

保证检验结果的质量是实验室的立命之本。按照《医疗机构临床实验室管理办法》[1]和ISO15189《医学实验室质量和能力认可准则》[2]规定，在开展新的检测项目，更换检测系统或改变试剂盒厂商时，实验室需要对其相关方法学分析性能予以验证。因此，本实验室需要对新引进的HJ-500全自动阴道分泌物检测工作站进行性能验证，以确保其各项指标满足厂家声明的分析性能或国际公认的质量目标后再用于常规检测，满足临床需求，但目前国内少见该类检测系统性能验证的相关文献，也没有规范化文件可供参考。本实验室根据CNAS-CL02-A02：2018《医学实验室质量和能力认可准则在体液学检验领域的应用说明》[3]要求、中华人民共和国医药行业标准(YY/T-0996-2015)尿液有形成分分析仪(数字成像自动识别)[4]、国家干化学尿液分析仪行业标准YY/T 0475-2011[5]、定性测定评价指南中华人民共和国卫生行业标准：WS/T-505-2017[6],参考本中心全自动尿液干化学分析仪流水线性能验证方案及关于全自动尿液分析仪或其他全自动分析仪性能验证相关文献[7-11]，结合仪器特性及实际情况从形态学和酶学2个方面进行验证，建立了一套全面、简便、实用的性能验证方案，希望能为其他实验室对此类仪器的性能验证提供参考。

1 材料与方法

1.1标本来源 阴道分泌物标本来自临床用于阴道分泌物检测的标本，包括阴性和阳性标本。

1.2仪器与试剂 仪器为青岛华晶生物技术有限公司生产的HJ-500全自动阴道分泌物检测工作站，试剂为仪器配套试剂及阴性和阳性质控品，所有试剂均在有效期内，且未受污染。采用日本Olympus CH 型光学显微镜对分泌物进行观察。

1.3方法 本研究参照人工镜检相关标准[3-6]和文献[7-11]，结合实际情况，对HJ-500全自动阴道分泌物检测工作站的镜检识别率、假阴性率、重复性、携带污染率、干化学检出限、干化学6项阴性和阳性符合率及室间比对结果进行检验，完成对阴道分泌物检测工作站形态学部分和功能学部分各指标的验证。

1.3.1仪器镜检识别率验证 选取阴道分泌物标本100例(阳性标本不低于50%)，仪器检测后，回收仪器镜检玻片，交由人工严格按照《全国临床检验操作规程》[12]进行镜检。统计仪器镜检结果与人工镜检结果的符合率。观察项目包括滴虫、真菌、上皮细胞、白细胞、乳酸杆菌、线索细胞、清洁度。评价标准：仪器镜检结果与人工镜检结果的滴虫总符合率、真菌总符合率、线索细胞总符合率、清洁度符合率均≥90%，假阴性率均≤5%。

1.3.2阴道分泌物检测工作站重复性验证 将多例患者阴道分泌物标本[包括真菌阳性及细菌性阴道病(BV)阳性患者标本]充分混匀，分装到20个标本管中，连续测试20次。判断仪器镜检结果及干化学结果的重复性。镜检结果重复性评价标准：相关病原体(真菌、滴虫、线索细胞)的检出，重复性结果应无差异。其他有形成分(上皮细胞、乳酸杆菌、白细胞)的检出，重复性结果应无差异或浮动不超过一个梯度(近似)，且阴性不可为阳性，阳性不可为阴性。干化学指标重复性评价标准：结果应无差异。酸碱度重复性结果变异系数(CV)≤5%。

1.3.3携带污染率验证 10例随机标本与空白标本(稀释液)交替做，记录结果。评价标准：空白标本检测结果应不被污染。

1.3.4干化学检出限验证 将阴道炎六联检试剂盒的阳性质控品进行稀释，终浓度等于或略高于阴道炎六联检试剂盒所描述的灵敏度，进行六联检测卡灵敏度测定，重复4次。评价标准：阳性质控品稀释至说明书要求的检出限后，检测卡应显色或颜色较浅。

1.3.5干化学6项阴性和阳性符合率验证 根据阴道炎六联检质控品试剂盒说明书要求，在开机稳定后进行阴性和阳性质控品检测，各检测20次，评价每个结果之间的差异。评价标准：阴性和阳性质控品检测结果均应无差异。

1.3.6室间比对结果评价 首都医科大学附属北京天坛医院实验诊断中心与北京中医药大学东直门医院检验科2台阴道分泌物检测工作站型号相同，2个医院在同一天内检测10例(阳性标本≥50%)患者阴道分泌物标本，记录检测结果并评价检测结果的一致性。评价标准：真菌、滴虫、线索细胞等相关病原体及其相应的干化学指标应完全相符，其他项目上下浮动应不超过一个梯度。

1.4统计学处理 采用SPSS19.0统计软件进行数据分析处理。计数资料以例数或百分率表示，采用χ2检验进行比较。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1仪器镜检识别率验证结果 各项指标符合率及假阴性率见表1。滴虫总符合率为100%，假阴性率为0%；真菌总符合率为99%，假阴性率为1%；线索细胞总符合率为97%，假阴性率为0%；清洁度总符合率为100%，假阴性率为0%。仪器镜检识别率验证合格。

2.2阴道分泌物检测工作站重复性验证结果 HJ-500全自动阴道分泌物检测工作站重复性验证结果见表2。仪器镜检中真菌、滴虫、线索细胞等相关病原体结果无差异；清洁度及乳酸杆菌结果无差异；白细胞、上皮细胞重复仪器镜检结果近似，浮动不超过一个梯度。干化学指标重复性无差异；酸碱度结果随滴加稀释液的量略有浮动，CV=1.58%<5%。重复性验证结果合格。

2.3携带污染验证结果 HJ-500全自动阴道分泌物检测工作站携带污染验证结果见表3。经验证阳性标本和阴性标本均不会影响下一个空白标本的结果，10例空白标本结果完全一致，携带污染验证合格。

表1 HJ-500全自动阴道分泌物检测工作站镜检识别率验证结果

表2 HJ-500全自动阴道分泌物检测工作站重复性验证结果

续表2 HJ-500全自动阴道分泌物检测工作站重复性验证结果

表3 HJ-500全自动阴道分泌物检测工作站携带污染率验证结果

2.4干化学检出限验证结果 将干化学4种酶及过氧化氢的阳性质控液分别稀释到各自的检出限附近进行检出限验证，结果见表4。4种酶及过氧化氢质控品浓度在等于或略高于临界值时均显色，干化学检出限验证合格。

2.5干化学阴性和阳性符合率验证结果 六联检检测卡检测阴性和阳性质控品，各检测20次，6个项目的阴性和阳性符合率均为100%。

2.6室间比对结果 HJ-500全自动阴道分泌物检测工作站室间比对结果见表5。结果显示，10例标本中，真菌、滴虫、线索细胞，以及干化学指标过氧化氢、唾液酸苷酶、 白细胞酯酶、乙酰氨基β-半乳糖苷酶、脯氨酸氨基肽酶结果差异均无统计学意义(P>0.05)；清洁度、上皮细胞、白细胞、乳酸杆菌上下浮动不超过一个梯度；pH值经配对t检验，差异无统计学意义(t=-0.896,P=0.394)。室间比对结果合格。

表4 HJ-500全自动阴道分泌物检测工作站干化学检出限验证结果

表5 HJ-500全自动阴道分泌物检测工作站室间比对结果(n=10)

3 讨 论

阴道分泌物检测是妇科术前评估、孕期检查及阴道炎诊断常用的检测项目[13]。阴道微生态评价可以更好地评估阴道的微环境及治疗效果，更好地为临床提供参考[14-15]。全自动阴道分泌物检测仪器包括形态学和功能学2个部分，可以全面评估阴道微生态，取代人工镜检，降低由于经验原因导致的人员之间的差异，还可以检测干化学指标，辅助诊断，提高检测的准确性，自动化的检测设备还可提高检测效率。目前，市场上该类仪器多在标本量较大的大型医院应用，品牌较多，形态学部分检测原理不同，有数字成像自动识别法和流式细胞法等；功能学部分即干化学法检测，原理大致相同。对该类仪器的性能评价包括形态学评价和功能学评价2个部分。各项指标均应符合相关标准要求，保证该系统检测的可行性。本研究对HJ-500全自动阴道分泌物检测工作站7个形态学项目(滴虫、真菌、线索细胞、上皮细胞、白细胞、乳酸杆菌、清洁度)的仪器镜检识别率、重复性、携带污染率和6个干化学项目(pH值、脯氨酸氨基肽酶、乙酰氨基β-半乳糖苷酶、白细胞酯酶、唾液酸苷酶、过氧化氢)的重复性、检出限、携带污染率、阴性符合率、阳性符合率等性能进行了评价，并与东直门医院检验科同款仪器进行室间比对，评价HJ-500全自动阴道分泌物检测工作站共13个项目的一致性。各项目指标均符合相关标准要求。

形态学部分参考了尿液有形成分分析仪(数字成像自动识别)中华人民共和国医药行业标准(YY/T-0996-2015)，包括识别率、重复性、携带污染率，但略有不同。因为阴道分泌物检测主要侧重病原体的检出，如真菌、滴虫、线索细胞，而不是红细胞和白细胞。因此，没有做白细胞和红细胞的检出限评估，因为阴道分泌物检测属于定性检测而不是定量分析,没有做病原体检出限的评估。由于没有病原体的标准质控品，所以无法评估稳定性，但标本一般均可在半小时内完成检测，而且数十日内100例临床标本仪器镜检与人工镜检结果比对的高符合率可以间接证明该仪器形态学检测部分性能的稳定性。本次性能评估试验中识别率评估的评价标准为90%，高于中华人民共和国医药行业标准(YY/T-0996-2015)的尿液有形成分分析仪(数字成像自动识别)对尿液中识别率要求最高的白细胞评估标准(≥80%)。由于清洁度Ⅰ和Ⅱ表示正常，Ⅲ和Ⅳ表示阴道炎症程度，所以将Ⅰ和Ⅱ合并，Ⅲ和Ⅳ合并。将阴道清洁度分为正常和炎症进行评估。由于是定性项目，对重复性的评估无法执行中华人民共和国医药行业标准(YY/T-0996-2015)的尿液有形成分分析仪(数字成像自动识别)标准，只需保证病原体(真菌、滴虫、线索细胞)的检出无差异，其他有形成分(上皮细胞、乳酸杆菌、白细胞)的重复性结果应无差异或上下浮动不超过一个梯度即可。对于功能学评价部分，参考国家行业标准YY/T 0475-2011文件，包括重复性、携带污染率、检出限、阴性符合率和阳性符合率，与尿干化学法性能评估相似，性能指标均符合要求。

由于没有室间质评，因此，需要通过室间比对评估实验室结果的准确性。与东直门医院进行比对的10例标本中有3例真菌阳性标本和3例线索细胞阳性标本。标本由天坛医院先检测，然后1 h内低温转运至东直门医院检测，保证从标本采集到检测结束的时间不超过4 h，并注意在比对试验前应加足稀释液，保证室间比对的标本一致。

4 结 论

本研究初步建立了一套用于评估全自动阴道分泌物检测工作站性能验证的方案。HJ-500全自动阴道分泌物检测工作站7个形态学项目(滴虫、真菌、线索细胞、上皮细胞、白细胞、乳酸杆菌、清洁度) 的仪器镜检识别率、重复性、携带污染率及6 个干化学项目(pH值、脯氨酸氨基肽酶、乙酰氨基β-半乳糖苷酶、白细胞酯酶、唾液酸苷酶、过氧化氢)的重复性、携带污染率、检出限、阴性符合率、阳性符合率等性能均符合要求。