过敏性紫癜合并肺炎支原体感染患儿外周血中细胞因子及淋巴细胞亚群水平变化

陈见南，占刘英

(浙江大学医学院附属儿童医院实验检验中心/国家儿童健康与疾病临床医学研究中心，浙江杭州 310003)

过敏性紫癜(HSP)是儿童时期常见的一种以免疫复合物在受累组织小血管内皮沉积为主要特征的、多种免疫介导的系统性免疫性血管炎，多累及皮肤、关节、消化道和肾脏，病因复杂，致病机制目前并不十分清楚[1-2]。目前大多认为HSP的发病可能与感染、药物、疫苗接种、食物过敏等因素有关。近年有较多研究报道HSP合并肺炎支原体(MP)感染病例，但尚缺乏确切证据证实MP感染可导致HSP。HSP发病诱因以感染占第1位，而MP感染诱发儿童HSP近年有增多趋势[3]。本研究通过回顾性调查2016-2018年在浙江大学医学院附属儿童医院进行检查的HSP-MP感染患儿、HSP患儿和健康体检儿童的白细胞介素-2(IL-2)、IL-4、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)、干扰素-γ(IFN-γ)、CD4+、CD8+、CD3-CD16+CD56+、CD4+/CD8+水平，探讨MP感染与HSP发病机制的关系。此外，对HSP-MP感染组根据临床特点和累积部位进行临床分型，观察各型之间年龄和T细胞亚群水平的差异，为临床及早判断HSP的病情和预后提供依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2016-2018年在浙江大学医学院附属儿童医院住院的HSP急性期发作儿童作为研究对象，均符合美国风湿病学会制定的HSP诊断标准[4]，所有患儿均为初次发病。起病在15 d以内，既往身体健康，排除其他免疫性疾病。HSP-MP感染组101例，男49例，女52例；HSP组101例，男65例，女36例。另选取年龄、性别与HSP-MP感染组和HSP组相配的同期在浙江大学医学院附属儿童医院健康体检且资料齐全的59例儿童作为对照组，男32例，女27例。3组研究对象性别、年龄等一般资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。所有HSP患儿均为急性期初发病例，近期(2周内)均未使用抗组胺药物、肾上腺皮质激素和免疫抑制剂治疗。本研究通过浙江大学医学院附属儿童医院伦理委员会批准，患儿家长均知情同意并签署知情同意书。

1.2仪器与试剂 (1)病原学诊断：德国Virion/Serion公司的MP-IgM试剂盒。(2)免疫功能检测：仪器为美国BD公司 FACSCalibur型流式细胞分析仪，抗体及溶血素均为美国BD公司产品，试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。

1.3方法 (1)病原学诊断：HSP患儿于入院当天未治疗前采集静脉血，取2 mL血清，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测，德国Virion/Serion公司的MP-IgM试剂盒，严格按说明书操作，检测患儿MP-IgM水平。抗体效价>1∶80确诊为阳性。(2)免疫功能检测：①入院后治疗前空腹抽取EDTA-K2抗凝血2 mL，采用流式细胞术测定T淋巴细胞亚群，由专人严格根据试剂盒说明书步骤进行操作，检测各组CD4+、CD8+、CD3-CD16+CD56+、CD4+/CD8+水平。②入院后治疗前采集空腹静脉血2 mL,3 000 r/min离心10 min,分离收集血清,置-20 ℃冰箱保存待测,采用ELISA双抗体夹心法检测上清液中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF和IFN-γ水平，试剂盒购自深圳晶美有限公司，步骤按试剂盒说明书进行操作。

2 结 果

2.13组外周血细胞因子水平比较 HSP-MP感染组、HSP组IL-2、IFN-γ水平均低于对照组,IL-4、TNF水平均高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)；HSP-MP感染组IL-4水平高于HSP组，差异有统计学意义(P<0.05)；HSP-MP感染组和HSP组IL-6和IL-10水平与对照组比较，差异均无统计学意义(P>0.05)；HSP组IL-6和IL-10水平与对照组比较，差异均无统计学意义(P>0.05)；HSP-MP感染组IL-2、IL-6、IL-10、TNF、IFN-γ水平与HSP组比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，见表1。

2.23组外周血淋巴细胞亚群水平比较 HSP-MP感染组、HSP组CD3-CD16+CD56+水平均低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)； HSP-MP感染组和HSP组CD4+、CD8+、CD3-CD16+CD56+和CD4+/CD8+水平与对照组比较，差异均无统计学意义(P>0.05)；HSP-MP感染组CD4+、CD8+、CD3-CD16+CD56+和CD4+/CD8+水平与HSP组比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，见表2。

2.3HSP-MP感染组各临床分型间年龄和淋巴细胞亚群水平比较 HSP-MP感染组101例患儿中，单纯皮肤型13例，关节型36例，腹型16例，肾型8例，混合型28例。通过比较发现，肾型患儿年龄和CD8+水平均明显高于单纯皮肤型、关节型、腹型和混合型，CD4+/CD8+水平低于单纯皮肤型、关节型、腹型和混合型，两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)；肾型患儿CD4+水平与其他临床分型比较，差异均无统计学意义(P>0.05),见表3、图1～4。

表1 3组外周血细胞因子水平比较[ M(P25～P75),pg/mL]

表2 3组外周血淋巴细胞亚群水平比较

表3 HSP-MP感染组各临床分型间年龄和淋巴细胞亚群水平比较

图1 HSP感染组各临床分型间年龄比较(月)

图2 HSP感染组各临床分型间CD4+水平比较(%)

图3 HSP感染组各临床分型间CD8+水平比较(%)

图4 HSP感染组各临床分型间CD4+/CD8+水平比较

3 讨 论

HSP是儿童时期常见的一种自身免疫性疾病，HSP患儿存在体液免疫紊乱、T细胞亚群功能失调及细胞因子分泌异常等多种免疫失衡，但其具体发病机制尚不清楚[5]。MP感染的HSP的发病机制也未明确，有研究显示，HSP-MP感染较单纯HSP 存在更为严重的T细胞功能紊乱[6]。本研究通过观察外周血中细胞因子、T细胞亚群水平的变化，了解HSP患儿免疫功能状态，探讨MP 感染与HSP免疫学发病机制之间的关系；并通过比较HSP-MP感染患儿不同临床分型间年龄和T细胞亚群水平的差异，为临床及早对HSP进行分型提供参考。

CD4+T淋巴细胞接受不同刺激后向不同的功能亚群分化，相应的细胞因子在CD4+T淋巴细胞分化过程中起调控作用。IL-4主要由Th2辅助细胞分泌，参与体液免疫，促进过敏反应；IL-4对B细胞的增殖和抗体的产生特别是IgE的产生有巨大促进和诱导功能；IL-2和IFN-γ主要由Th1辅助细胞分泌，参与细胞免疫，对抗细胞内细菌及原虫的免疫反应，在清除结核、麻风等细胞内寄生菌感染中发挥重要作用。如果Th1功能亢进，将导致炎症的慢性迁延、接触性皮炎、自身免疫性疾病和器官移植急性排斥反应等疾病的发生和病理损伤。CD4+T淋巴细胞分化过程中，Th1和Th2存在交互调节，作用相反的两种细胞因子在调节Th1/Th2免疫平衡中发挥重要作用，高水平IL-4抑制CD4+T淋巴细胞向Th1分化；而Th1通过IFN-γ抑制IL-4的分泌和CD4+T淋巴细胞向Th2分化。LI等[7]研究表明，HSP存在Th2功能亢进，血清IL-4水平升高，而Th1和IFN-γ改变不明显。本研究发现，HSP-MP感染患儿和HSP患儿IL-4水平升高，IL-2和IFN-γ水平下降，Th2优势活化，存在Th1/Th2失衡。此外，Th2类的细胞可产生IL-4等抗炎性的细胞因子，促进抗体产生，介导体液免疫应答[8]。本研究HSP-MP感染患儿IL-4水平明显高于HSP患儿，提示儿童HSP合并MP感染时可能存在Th2细胞分泌亢进，体液免疫更加明显。

TNF是由单核-巨噬细胞分泌的一种具有多种生物活性的多肽调节因子，属于促炎因子，能有效反映肾脏受损程度，是检测评估HSP持续性进展的重要指标，在HSP发病机制中发挥重要作用[9]。本研究中HSP-MP感染患儿和HSP患儿TNF水平均升高，符合以往报道。而HSP-MP感染组和HSP组TNF水平差异无统计学意义(P>0.05)，说明HSP患儿是否合并MP感染，TNF水平均会升高。

自然杀伤(NK)细胞即CD3-CD16+CD56+，是第三类群淋巴细胞，其特征性表型是CD16+和CD56+分子。测定CD3-CD16+CD56+水平可较准确反映机体的免疫活性细胞状态。魏樊[10]研究表明，HSP-MP感染患儿和HSP患儿的NK(CD3-CD16+CD56+)细胞水平均下降，且HSP-MP感染患儿NK(CD3-CD16+CD56+)细胞水平低于HSP患儿。还有文献表明，HSP患儿CD3-、CD4+/CD8+水平均低于对照组[11-13]。本研究结果显示，HSP-MP感染患儿和HSP患儿的NK(CD3-CD16+CD56+)细胞水平较对照组下降，二者与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)，说明HSP患儿的细胞免疫活性降低。此外，由于 NK细胞对B细胞有一定的抑制作用，因此，NK细胞的活性降低使B细胞过度增殖，导致体液免疫亢进。

HSP好发于儿童，本研究通过比较HSP-MP感染组不同临床分型间中位年龄可发现，单纯皮肤型中位年龄为83.6个月，关节型为83.8个月，腹型为84.5个月，混合型为73.7个月，肾型为105.8个月，肾型中位年龄明显高于其他临床分型，差异有统计学意义(P<0.05)，可以为临床及早对HSP分型提供参考。通过比较HSP-MP感染组不同临床分型间CD4+、CD8+和CD4+/CD8+水平发现，肾型CD8+水平明显高于其他临床分型,CD4+/CD8+低于其他临床分型。近年来有研究发现，与健康人比较，HSP患者CD4+水平降低，而CD8+水平升高[14]，CD4+/CD8+水平下降，由此提示在HSP患者急性期体内T淋巴细胞亚群功能处于紊乱状态，同时也说明CD4+、 CD8+T细胞参与了HSP的发病过程。 本研究中肾型CD8+水平明显高于其他临床分型，提示肾型HSP患儿体内存在更加严重的T细胞功能紊乱。

4 结 论

本研究表明，HSP患儿体内存在免疫失衡，表现为Th1/Th2分化失衡，IL-2、IFN-γ水平降低，IL-4、TNF水平升高，MP感染合并HSP时IL-4水平升高更加明显。此外，肾型HSP-MP感染患儿年龄和CD8+水平均高于其他临床分型，CD4+/CD8+低于其他临床分型，可为临床对HSP-MP感染患儿尽早进行临床分型提供参考，有利于及早进行个体治疗，尽早康复。