特异性靶抗原的抗中性粒细胞胞质抗体的临床价值研究*

温 阳，翟建昭，胡 静，黄卓春，李贵星，唐鸿鹄，苏林冲，武永康△

(1.四川大学华西医院实验医学科，四川成都 610041；2.四川大学华西医院风湿免疫科，四川成都 610041；3.湖北民族大学附属民大医院风湿免疫科/风湿性疾病发生与干预湖北省重点实验室,湖北恩施 445000)

抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)是一组以人中性粒细胞胞质成分为靶抗原的自身抗体[1]。ANCA推荐采用间接免疫荧光法检测，观察结果可显示出不同的荧光模型[2]，之后通常采用中性粒细胞中的蛋白纯化后作为靶抗原，通过免疫法检测特异性靶抗原结合的ANCA[3]。ANCA对应的靶抗原较多，主要包括髓过氧化物酶(MPO)、蛋白酶3(PR3)、乳铁蛋白(LF)、杀菌/通透性增加蛋白(BPI)及弹性蛋白酶(EL)等[4-6]。对于上述具体的靶抗原抗体的临床价值研究不多，为了研究特异性靶抗原ANCA与临床疾病的关系，本课题组回顾性分析近2年四川大学华西医院不同特异性靶抗原的ANCA阳性患者与疾病种类的相关性，为指导临床疾病的诊断和治疗提供依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集四川大学华西医院2017年1月至2019年1月ELISA检测不同靶抗原ANCA结果为阳性的患者652例(无重复病例)作为研究对象，男女比例为0.64∶1.00，平均年龄(55.50±17.52)岁。男性患者发病年龄1～94岁，平均(59.30±16.59)岁；女性患者发病年龄13～91岁，平均(53.00±17.69)岁。收集患者最终诊断进行分析。

1.2仪器与试剂 ANCA相关靶抗原[MPO、PR3、EL、LF、BPI、组织蛋白酶G(Cat-G)]抗体检测采用ELISA，试剂盒购自德国Euroimmun公司,仪器型号为：EUROIMMUN Analyzer 1。本实验室该检测项目已通过美国病理协会认可，检测项目使用德国Euroimmun公司质控品，每天做阴阳性质控，质控结果均在控，以保证检测结果的准确性及可靠性。

1.3方法 收集652例ANCA阳性患者的疾病信息及不同靶抗原抗体在652例ANCA阳性患者中的占比，筛选出单独靶抗原抗体阳性的患者，并将其分为自身免疫性疾病、非自身免疫性疾病及临床症状三大类，统计主要疾病的占比及并发症发病情况。

1.4统计学处理 采用SPSS 21.0统计软件进行数据分析处理。计数资料以例数或百分率表示，组间比较采用χ2检验，若样本量小于40，采用Fisher确切概率法计算P值。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1ANCA阳性对应的单个靶抗原抗体的单独阳性率情况 652例ANCA阳性患者对应的靶抗原抗体单独阳性率(即仅该靶抗原抗体阳性，其他靶抗原抗体均为阴性)分别为：抗MPO抗体为52.91%(345/652)，抗PR3抗体为8.59%(56/652)，抗BPI抗体为4.14%(27/652)，抗EL抗体为3.37%(22/652)，抗LF抗体为4.91%(32/652)，抗Cat-G抗体为0.77%(5/652)。由于抗Cat-G抗体阳性率低，容易引起偏差，故不做进一步分析。

2.2抗MPO自身免疫性疾病与自身免疫性疾病并发症百分率比较 在345例单独抗MPO抗体阳性病例中，自身免疫性疾病239例，占69.28%(239/345)，非自身免疫性疾病89例，占25.80%(89/345)，前者明显高于后者，差异有统计学意义(χ2=130.75，P<0.05)。仅有临床症状未确诊的患者占4.93%(17/345)。在自身免疫性疾病中，ANCA相关性血管炎占88.28%(211/239)，ANCA相关性肾炎占12.97%(31/239)，系统性红斑狼疮(SLE)占6.69%(16/239)(由于疾病有重叠，所占比例之和大于100.00%)，ANCA相关性血管炎占比明显高于ANCA相关性肾炎，差异有统计学意义(χ2=271.17，P<0.05)。自身免疫性疾病所引起的并发症以肾功能不全占53.14%(127/239)，肺部感染占48.54%(116/239)，肾性贫血占28.45%(68/239)，肾性骨病和肺间质纤维化占比较少，见表1。

表1 抗MPO自身免疫性疾病与自身免疫性疾病并发症百分率比较

2.3抗PR3自身免疫性疾病与自身免疫性疾病并发症百分率比较 在56例单独抗PR3抗体阳性病例中，自身免疫性疾病29例，占51.79%(29/56)，非自身免疫性疾病21例，占37.50%(21/56)，二者之间差异无统计学意义(χ2=2.312，P=0.128)。仅有临床症状未确诊患者占10.71%(6/56)。在自身免疫性疾病中以ANCA相关性血管炎[75.86%(22/29)]和结缔组织病[13.79%(4/29)]为主，周围神经炎占6.90%(2/29)，ANCA相关性血管炎比结缔组织病等更具有诊断价值，差异有统计学意义(χ2=20.147，P<0.05)。自身免疫性疾病所引起的并发症中，肺部感染和肾功能不全分别占34.48%(10/29)和10.34%(3/29)，差异无统计学意义(χ2=3.569，P=0.056)，少部分患者表现为肾性贫血和风湿性心脏病，见表2。

表2 抗PR3自身免疫性疾病与自身免疫性疾病并发症百分率比较

2.4抗BPI自身免疫性疾病与自身免疫性疾病并发症百分率比较 在27例单独抗BPI抗体阳性病例中，自身免疫性疾病9例，占33.33%(9/27)，非自身免疫性疾病15例，占55.56%(15/27)，二者之间差异无统计学意义(P=0.17)，仅有临床症状未确诊患者占11.11%(3/27)。在自身免疫性疾病中，ANCA相关性血管炎占66.67%(6/9)，而其他疾病(皮肌炎和自身免疫性肝炎)只有3例。抗BPI抗体在诊断ANCA相关性血管炎中相对于其他自身免疫性疾病并不具有明显优势，差异无统计学意义(P=0.153)。自身免疫性疾病所引起的并发症中，主要为肺部感染和肺间质纤维化等，见表3。

表3 抗BPI自身免疫性疾病与自身免疫性疾病并发症百分率比较

2.5抗LF自身免疫性疾病与自身免疫性疾病并发症百分率比较 在32例单独抗LF抗体阳性患者中，以自身免疫性疾病为主，高达81.25%(26/32)，非自身免疫性疾病占12.50%(4/32)，前者明显高于后者，差异有统计学意义(P<0.05)。仅有临床症状而未确诊患者占6.25%(2/32)。自身免疫性疾病患者中，SLE占92.31%(24/26)，狼疮性肾炎占73.08%(19/26)，显示出较强的相关性。抗LF抗体对诊断SLE 及狼疮性肾炎具有重要提示价值。自身免疫性疾病引起的并发症中，以肺部感染[26.92%(7/26)]、肾功能不全[7.69%(2/26)]和肾性贫血[7.69%(2/26)]为主，肺部感染相对于肾功能不全等其他疾病不具明显优势，差异无统计学意义(χ2=3.359,P=0.067)，见表4。

表4 抗LF自身免疫性疾病与自身免疫性疾病并发症百分率比较

2.6抗EL自身免疫性疾病与自身免疫性疾病并发症百分率比较 在22例单独抗EL抗体阳性患者中，自身免疫性疾病13例，占59.09%(13/22)，非自身免疫性疾病9例，占40.91%(9/22)，二者之间差异无统计学意义(P=0.228)。自身免疫性疾病患者中所对应的疾病特异度不高，ANCA相关性血管炎、SLE、肺间质纤维化等均占30.77%(4/13)。自身免疫性疾病引起的并发症中以肾功能不全为主，抗EL抗体疾病预示价值较差，差异无统计学意义(P=1.00)，见表5。

表5 抗EL自身免疫性疾病与自身免疫性疾病并发症百分率比较

3 讨 论

ANCA是一组以中性粒细胞胞质成分为特异抗原的自身抗体，可激活人中性粒细胞并导致脱颗粒反应，使中性粒细胞释放大量有害的蛋白水解酶和氧自由基，从而导致小血管壁损害，导致血管炎发生。因此，ANCA是一种敏感且特异的系统性血管炎标志物[7]。本研究通过检测ANCA相对应的特异靶抗原抗体来诊断疾病和判断预后[8]。临床实践中通过ELISA检测相应的靶抗原抗体水平。本研究将抗MPO抗体、抗PR3抗体、抗BPI抗体、抗EL抗体、抗LF抗体等纳入研究并进行讨论。

在ANCA相关靶抗原抗体中，对抗MPO抗体和抗PR3抗体的研究相对较多[9]。抗MPO抗体和抗PR3抗体在靶抗原抗体中占比较多，这与前期大量研究相一致。有研究证实，MPO活性是评价中性粒细胞在组织中浸润程度的可靠指标，但其特异性比较差，在很多疾病中都可检出，如：心血管疾病、炎症性疾病、神经退行性病变、肾脏疾病和免疫介导性疾病等[10]。在抗MPO抗体阳性患者的疾病构成比例中，以自身免疫性疾病为主，占69.28%。有研究表明，抗MPO抗体是ANCA相关性血管炎的重要标志物[11]。在抗MPO抗体阳性患者中，以ANCA相关性血管炎为主，占88.28%。由于抗MPO抗体特异性差，在很多疾病中均有表达。本研究中当抗MPO抗体单独阳性时，ANCA相关性肾炎阳性率为12.97%，SLE阳性率均为6.69%。抗MPO抗体阳性主要预示ANCA相关性血管炎，且抗MPO抗体对诊断ANCA中相关性血管炎的预示价值明显高于ANCA相关性肾炎等，差异有统计学意义(P<0.05)。本研究还发现，当抗MPO抗体单独靶抗原抗体阳性时，在自身免疫性疾病引起的并发症中，肾功能不全阳性率为53.14%，肺部感染阳性率为48.54%，并出现肾性贫血和肾性骨病等相关并发症，这与文献[12-14]报道的结论一致。

PR3是只存在于中性粒细胞嗜天青颗粒中的中性丝蛋白酶。有研究表明，抗PR3抗体的特异性较强[15]。本研究中抗PR3抗体阳性患者以ANCA相关性血管炎为主。MARTIN等[16]研究小组通过一系列研究证实了其致病机制，也与本研究结果相互印证。抗PR3抗体对ANCA相关性血管炎的预示价值高于结缔组织病等其他疾病，差异有统计学意义(P<0.05)。本研究结果显示，当抗PR3抗体阳性时，肺部疾病和肾脏疾病的阳性率也较高。以上结果提示，当抗PR3抗体阳性时，应关注ANCA相关性血管炎及肺和肾的损伤，尽早治疗和预防。

抗BPI抗体是ANCA特异性靶抗原抗体。有研究表明，抗BPI抗体存在于囊性纤维化、炎症性肠病、血管炎和原发性硬化性胆管炎中，其与炎症性疾病活动增加和器官损害密切相关[17]。自身免疫性疾病以ANCA相关性血管炎为主，阳性率为66.67%，但该抗体在诊断ANCA相关性血管炎中相对于其他自身免疫性疾病并不具有明显优势，差异无统计学意义(P>0.05)。抗BPI抗体阳性患者并发症常以累及肺部为主。一直以来，抗BPI抗体的致病机制尚不清楚，直到最近TAKEDA等[18]研究发现，抗BPI抗体可影响血管网状结构的形成，并可能作为致病性自身抗体参与系统性血管炎的发生和发展。但抗BPI抗体是一种不常见的ANCA，目前有研究表明BPI-ANCA与肺部疾病具有相关性，但其中的致病机制还需要进一步深入研究[18]。

LF是中性粒细胞次级颗粒中水平最丰富的铁结合蛋白，在发生急性炎症性疾病时，循环中的EL水平升高。前期有研究发现，抗LF抗体与SLE的发生和发展有明显相关性[19]。本研究中抗LF抗体在诊断SLE及狼疮性肾炎时具有重要提示价值，阳性率分别为92.31%、73.08%。此外，抗LF抗体与肺部感染和肾功能不全的相关性也值得关注。

目前抗EL抗体的研究较少，本研究中抗EL抗体阳性时，所对应的疾病特异性较差，在自身免疫性疾病中，主要与ANCA相关性血管炎、SLE、肺间质纤维化等相关。自身免疫性疾病所引起的并发症中，主要与肺部疾病和肾脏疾病相关，如肺部感染、肺间质纤维化、肾功能不全等。

4 结 论

总之，ANCA相关靶抗原抗体主要与ANCA相关性血管炎有关，引起的症状主要与肺部感染和肾损伤有关，但不同的抗体所对应的疾病不一样，对于临床疾病的诊断有提示价值。