基于GC-MS的陈皮不同炮制品挥发性成分定性研究△

潘盼盼，孙戡平，郑艳萍，金俊杰，李淑佩

1.南京医科大学附属妇产科医院(南京市妇幼保健院)，江苏 南京 210004；2.南京海昌中药集团有限公司，江苏 南京 210061；3.江苏省中医院，江苏 南京 210029

陈皮为芸香科植物橘CitrusreticulataBlanco及其栽培变种的干燥成熟果皮，有理气健脾、燥湿化痰的功效[1]，临床用于脘腹胀满、食少吐泻、咳嗽痰多的治疗[2]。现代药理学表明，陈皮具有抗炎[3]、抗氧化[4]、抗心血管疾病[5]等作用，其有效成分主要为挥发油及黄酮[6]。研究报道陈皮含挥发油1.5%(压榨法)至2%(蒸馏法)，挥发油主要是由D-柠檬烯、β-月桂烯、α-及β-蒎烯等，另含黄酮类成分橙皮苷、新橙皮苷、柑橘素、二氢川陈皮素等；其中川陈皮含橙皮苷约8.4%，川陈皮素约0.15%。挥发油是广陈皮中除黄酮类化合物外另一重要的活性物质，质量分数为1.9%～3.5%，陈皮挥发油中主要成分为右旋柠檬烯、柠檬醛，还含有川皮酮、橙皮苷、肌醇、维生素Bx等。大量研究表明，陈皮挥发油有抗氧化、抗菌、祛痰、平喘、促进消化液分泌、排除肠内积气、扩张冠状动脉和利胆等功效。

《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)2015年版中对陈皮含量检测只规定了黄酮类成分橙皮苷的检测，对其挥发油成分没有监控，查阅文献发现，陈皮挥发油成分研究的相关报道也局限于不同产地[7]、不同提取方法[8-9]等方面，缺乏对陈皮不同炮制方法[10]的比较研究。本实验选取了陈皮醋制、麸炒、蜜制、土炒4种炮制品，以水蒸气蒸馏法提取陈皮炮制品中挥发油并通过气相色谱-质谱(GC-MS)分析，初步探讨4种陈皮炮制品中挥发性成分的种类。

1 材料

1.1 仪器

SXHW型电热套(巩义市英峪予华仪器厂)；HP6890N.GC15973N型气质联用分析仪(安捷伦科技有限公司)；十万分之一精度电子分析天平、万分之一精度天平(Sedoris公司)；KQ5200DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；XL-10B型500 g密封摇摆式粉碎机(广州市旭朗机械设备有限公司)；CKN7630J 30 CM型炒锅(浙江炊大王炊具有限公司)；YE187AL1168351型移液器(大龙星创实验仪器有限公司)。

1.2 试药

陈皮药材取于南京海源中药饮片有限公司，批号：181006，产地浙江，按《中国药典》2015年版一部及四部标准检验，结果符合规定。

纯水为南京海昌中药集团有限公司制剂车间所制备的纯化水；陈醋(总酸质量浓度≥40.0 g·L-1，山西水塔醋业股份有限公司)；蜂蜜(产地：山东菏泽，山东省归农养蜂股份有限公司)；麦麸(产地：浙江金华，晨曦饲料二部)；灶心土(产地：河北保定，康德瑞琪旗舰店)；花雕酒(酒精度≥12%，产地：浙江绍兴，浙江古越龙山绍兴股份有限公司)；氦气、氧气纯度≥99.999 9%；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 陈皮不同炮制样品制备

2.1.1醋制陈皮 称取陈皮药材100 g，加入陈醋337.5 mL，拌匀，稍闷润30 min后转移至炒锅内，用文火(240 ℃)炒制30 min，取出摊放，并筛去碎屑。

2.1.2麸炒陈皮 称取陈皮药材100 g，麦麸10 g，将锅加热至70 ℃左右后撒入麦麸，见麦麸冒烟时，迅速将陈皮倾入锅中，后以中火(120～150 ℃)将陈皮和麦麸快速地拌炒均匀，至将陈皮表面炒成棕黄色时即可，取出摊放，筛去麦麸以及碎屑。

2.1.3蜜制陈皮 1)配制辅料：称取生蜜40 g，炼蜜20 g，花雕酒10 g，水20 g，生蜜、酒和水混合备用。2)辅料浸润：称取陈皮100 g至闷润容器中，加入上述混合辅料拌匀、浸润；闷润至混合辅料被吸收殆尽。3)炙炒：将闷润后的陈皮转移到炒锅内，以文火炒至手按觉硬度为宜，约八分干时，将炼蜜倒至陈皮上进行拌炒，炒至陈皮表面呈蜜样光泽，触之不粘手，以握之成团，撒手即散为度，取出摊放，并筛去碎屑。

2.1.4土炒陈皮 称取陈皮药材100 g，灶心土30 g，在加热至100 ℃左右的热锅中均匀地撒入灶心土，不断转动炒锅，至其呈流化状态，此时锅温约220 ℃，将称好的100 g陈皮倒入炒锅内，待陈皮表面被炒成焦黄色时，取出药材，放凉，筛去灶心土。

2.2 色谱条件

HP-5MS色谱柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm)；载气为高纯氦气；进样量1 μL；分流比300∶1；程序升温条件：柱温60 ℃，停留3 min，以1 ℃·min-1升温至80 ℃，维持3 min，再以5 ℃·min-1升温至125 ℃。

电离方式为电子轰击离子源(EI)，电子能量70 eV，离子源温度为230 ℃，四级杆温度150 ℃，扫描质量范围m/z：30～550。

2.3 GC-MS检测

2.3.1提取方法 称取各陈皮炮制样品粉末150 g，置2000 mL圆底烧瓶中，加入1350 mL纯化水，按水蒸气蒸馏法(《中国药典》2015年版一部附录XD方法)提取陈皮中所含挥发油，经3～4 h加热回流直至挥发油不再增加，再将所得挥发油用无水Na2SO4干燥即得。

2.3.2测定方法 将脱水后的挥发油加甲醇稀释4倍，进样量1 μL，按照2.2色谱条件检测，得到陈皮炮制品GC-MS图，见图1，直接用设备的数据系统进行检索(美国NIST 2.0谱库)，并用标准图谱结合相关文献比较，确定其成分，具体成分见表1。

图1 陈皮样品GC-MS图

表1 陈皮不同炮制品挥发油含量测定结果

续表1

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3 分析与讨论

将4种陈皮的炮制品相应GC-MS谱图与NIST 2.0谱库进行数据检索、比对，进行数据整理分析后发现，在这4种炮制陈皮中测定到的挥发性成分共有180种，其中含量最高的挥发性成分均为柑橘柠烯(D-limoneoe)，柑橘柠烯是1种单萜类化合物，能够通过抑制肿瘤微血管形成、诱导胃癌细胞凋亡来抑制体内胃癌的生长和转移[11]；醋制陈皮和土炒陈皮柑橘柠烯含量最高，分别为76.86%和72.56%。其他含量较高的挥发性成分有萜品烯(土炒9.88%)、松油醇(蜜制12.05%)、(4R)-1-甲基-4-(1-甲基乙烯基)-环己烯(麸炒38.61%)等[11]；另外，通过不同辅料炮制后共有的化合物有18种，新出现的化合物有94种，如麸炒陈皮中的guaia-9，11-diene，土炒陈皮中的9-methyl-nonadecane等，说明陈皮的炮制对其挥发性成分影响较为显著，其含量和组分都发生了变化，这可能是影响不同陈皮炮制品药效作用的物质基础。