大鲵活性肽牡蛎多糖复合粉体外ACE 抑制作用的研究

纪钱萍，李 伟，佟长青

（大连海洋大学 食品科学与工程学院，辽宁大连 116023）

研究表明，全世界的高血压患者已占世界总人口的1/3，并且患病比例逐年增加[1]。其中，肾素-血管紧张素-醛固酮系统在高血压的发生、发展中起着重要作用，血管紧张素-II 能够导致血压的暂时升高[2]。血管紧张素转化酶（ACE） （EC 3.4.15.1）催化血管紧张素I 转变成具有活性的血管紧张素II。抑制ACE 活性的物质往往具有潜在的抑制高血压发生的活性，因此常常利用抑制ACE 活性试验来筛选这类物质。

肽类和多糖类物质的抗高血压作用有很多研究报道[3-5]。前期研究证明了牡蛎多糖对高血压模型Wistar 大鼠的降血压活性[6]。结合企业的生产实际，将大鲵肽与牡蛎多糖进行组合，制备成具有协同抗高血压活性的复合粉，为其在保健食品中的应用提供基础数据。

1 材料与方法

1.1 材料

大鲵活性肽，张家界（中国） 金驰大鲵生物科技有限公司提供；马尿酰- 组氨酰- 亮氨酸（N-hippuryl-His-Leu hydrate，HHL）、血管紧张素转化酶（Angiotensin converting enzyme，ACE），美国Sigma 公司提供；其他试剂均为国产分析纯。

牡蛎多糖按照石璇等人[6]的方法制备。

1.2 仪器与设备

高效液相色谱仪，大连依利特分析仪器有限公司产品；Hypersil BDS C18色谱柱。

1.3 ACE 活性测定

将牡蛎多糖配制成质量浓度为8 mg/mL 的溶液，大鲵活性肽配制成质量浓度为2 mg/mL 的溶液，然后分别按照5∶1，3∶1，1∶1，1∶3，1∶5 体积比进行混合，制备成大鲵活性肽牡蛎多糖复合粉溶液。5∶1 复合粉溶液的牡蛎多糖质量浓度为6.67 mg/mL，大鲵肽质量浓度为0.33 mg/mL；3∶1 复合粉溶液的牡 蛎多糖质量浓度为6 mg/mL，大鲵肽质量浓度为0.5 mg/mL；1∶1 复合粉溶液的牡蛎多糖质量浓度为4 mg/mL，大鲵肽质量浓度为1 mg/mL；1∶3 复合粉溶液的牡蛎多糖质量浓度为2 mg/mL，大鲵肽质量浓度为1.5 mg/mL；1∶5 复合粉溶液的牡蛎多糖质量浓度为1.33 mg/mL，大鲵肽质量浓度为1.67 mg/mL。

使用大连依利特Hypersil BDS C18色谱柱，检测波长设定为228 nm，进样量20 μL，流速1 mL /min；流动相为30 %甲醇（0.1%三氟乙酸TFA 和0.05%冰醋酸，pH 值3.0～3.3）；柱温为25 ℃。

在离心管中加入5 μL 样品溶液和15 μL ACE（60 mU/mL） 混匀后于37 ℃条件下水浴5 min，之后加入25 μL HHL（7.6 mmol/L） 于37 ℃条件下水浴反应25 min，随后加入10%三氟乙酸溶液10 μL用来终止反应，最后加入150 μL 超纯水混匀。用1 mL 的注射器将反应液过0.22 μm 的过滤膜，于波长228 nm 处使用高效液相色谱紫外检测器对滤液进行检测，记录出峰时间和面积，空白试验用等体积的超纯水代替样品溶液。样品溶液对ACE 活性的抑制率计算公式是：

式中：M——空白组马尿酸的峰面积；

N——样品中马尿酸的峰面积。

2 结果与分析

2.1 大鲵活性肽ACE 抑制活性

通过大鲵活性肽ACE 抑制活性测定试验，发现大鲵活性肽具有很好的抑制ACE 活性。

大鲵活性肽ACE 抑制活性见图1。

由图1 可知，在大鲵活性肽质量浓度5 mg/mL时，对ACE 抑制率达到75.78%，ACE 抑制率随着大鲵活性肽质量浓度的增加而增加，具有质量浓度依赖性。大鲵活性肽是通过大鲵肉酶解制备的分子量小于2 000 Da 的肽，具有较好的抗氧化活性[7]。张江涛等人[8]研究林蛙低聚肽的抗氧化活性与ACE 抑制作用，发现林蛙低聚肽具有较好的抗氧化活性和ACE 抑制作用。

2.2 牡蛎多糖ACE 抑制活性

通过牡蛎多糖的ACE 抑制活性测定试验，发现牡蛎多糖具有一定的抑制ACE 活性。

牡蛎多糖ACE 抑制活性见图2。

由图2 可知，在牡蛎多糖质量浓度9 mg/mL 时，对ACE 抑制率为33.40%，ACE 抑制率随着牡蛎多糖质量浓度的增加而增加，具有质量浓度依赖性。石璇等人[6]的研究表明，牡蛎多糖对高血压模型Wistar大鼠具有较好的降血压活性。但是，在试验质量浓度范围内，牡蛎多糖抑制ACE 的活性并不强，这表明降血压模型的不同会导致结果产生差异。另一方面，也说明牡蛎多糖与ACE 的活性部位的结合不是很紧密或者没有结合于ACE 的活性部位。

3 大鲵活性肽牡蛎多糖复合粉的ACE 抑制活性

通过大鲵活性肽牡蛎多糖复合粉的ACE 抑制活性测定试验，发现大鲵活性肽牡蛎多糖复合粉具有一定的抑制ACE 活性。

大鲵活性肽牡蛎多糖复合粉ACE 抑制活性见图3。

由图3 可知，在牡蛎多糖与大鲵活性肽溶液按体积比1∶1 混合时，即其中的牡蛎多糖质量浓度为4 mg/mL，大鲵活性肽的质量浓度为1mg/mL 时，对ACE 的抑制率达到61.27%，对照图1 与图2 的结果，可以看出牡蛎多糖与大鲵活性肽复合粉在抑制ACE 活性时产生了协同作用，一定质量浓度的牡蛎多糖与大鲵活性肽复合粉ACE 抑制率高于相应质量浓度的牡蛎多糖与大鲵活性肽的ACE 抑制率之和。

传统降血压药卡托普利（Captopril） 是一种具有类多肽结构的ACE 抑制剂[9]。由此可见，多肽结构是ACE 抑制剂的潜在侯选对象。大鲵活性肽溶液与牡蛎多糖溶液混合，导致大鲵活性肽的空间结构发生变化，产生了更好的ACE 抑制活性。

4 结论

通过体外ACE 抑制作用试验发现，大鲵活性肽具有较好的抑制ACE 作用，牡蛎多糖具有一定的抑制ACE 作用。大鲵活性肽牡蛎多糖复合粉在抑制ACE 活性时产生了协同作用，一定质量浓度的大鲵活性肽牡蛎多糖复合粉对ACE 抑制率高于相应质量浓度的大鲵活性肽与牡蛎多糖对ACE 抑制率之和。研究结果为下一阶段对大鲵肽牡蛎多糖复合粉在协同抑制ACE 作用的机理研究提供了良好的基础，也为具有降血压作用的大鲵肽牡蛎多糖复合粉保健食品的开发提供了基础数据。