三阴性乳腺癌SLC29A1基因单核苷酸多态性在吉西他滨化疗耐药中的作用

李智慧

（常州妇幼保健院乳腺外科，江苏常州，213000）

三阴性乳腺癌是一种特殊亚型的乳腺癌，特指雌激素受体、孕激素受体及HER-2 3种受体均为阴性的乳腺癌，亚洲女性属于该类亚型乳腺癌常见人群之一，需要接受化疗方式，有效改善患者临床疾病[1-2]。吉西他滨属于临床一线常用乳腺癌化疗药物，受疾病耐药性，影响对三阴性乳腺癌疾病治疗效果低于预期。因此分析三阴性乳腺癌患者SLC29A1基因单核苷酸多态性变化，对提高治疗效果具有重要价值。本研究分析三阴性乳腺癌患者SLC29A1基因单核苷酸多态性对吉西他滨化疗耐药性的作用，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究选择2016年9月～2018年9月期间，常州妇幼保健院接收并确诊三阴性乳腺癌患者20例为研究对象。同时患者年龄42～53岁，患者平均年龄（46.36±3.26）岁。满足本研究需求。同时所有患者及患者家属对本研究知情，且自愿加入该研究中。本院伦理委员会对该研究完全知情，并批准相关研究进行。

1.2 方法

1.2.1 SLC29A1基因SNP测序

所有患者接受化疗当日清晨采集外周静脉血10mL，使用全血基因组提取试剂盒Ⅱ，依据试剂盒步骤开展操作。使用发光光度计测定DNA纯度，并在测定后将其置入-20℃冰箱内保存。完成上述环节后，使用应用Primer Premier(6.0版)软件设计相应基因片段的上下游引物，上游引物序列为5’-TTTTTCAGCTTTTTGAACTGTGA-3’，下游引物序列为 5’-CTTGCTGTGTTGATTAGGGACAT-3’。应用PCR法扩增靶基因产物。PCR 反应条件：95℃ 5 min；94℃ 30s；57℃ 30s；72℃45s；共进行35个循环，最后72℃延伸7min。最后使用ABI公司DNA测序仪3730直接测序，测序结果由专业软件Mutation Surveyor（2.0版本）分析，明确177、1288位点SNP序列。

1.2.2 免疫组织化学染色hENT1表达测定

选择患者彩色多普勒超声下穿刺三阴性乳腺癌患者病理科切片，采用常规免疫组织化学染色法进行测定。采用相应抗体，并确保抗体稀释比例为1：200，使用DAB显色试剂盒以及免疫组化全自动染色仪，使用PBS为阴性对照，由医院2位病理科主任医生对每张病理切片读片。其中患者病理切片出现棕黄色颗粒为染色阳性，并依据染色阳性细胞百分率以及染色情况进行评分。其中阳性细胞低于10%为1分，阳性细胞占11%～25%为2分，26%～50%为3分，占比超高50%为4分；染色强度评分中，无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，褐色为3分。两种评分相加评估患者总评分。其中分数低于2分判定为阴性，3～4分为弱阳性，5～6分为阳性，7分以上为强阳性。最后，划分患者hENT1中阴性及弱阳性为低表达组，阳性及强阳性为高表达组。

表1 患者SLC29A1基因SNP测序与耐药性 [n（%）]

表2 患者免疫组织化学染色hENT1表达测定 [n（%）]

1.3 观察指标

对比分析SLC29A1基因SNP测序后，177位点以及1288位点野生型与突变型患者耐药性差异，其中患者耐药性是指耐药患者数/总病例数×100%。

对比分析免疫组织化学染色hENT1表达测定下，高表达与低表达患者耐药性差异。

1.4 统计学方法

本研究使用SPSS21.0软件对数据进行分析，计数资料采用2检验，并以[n（%）]表示，＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 患者SLC29A1基因SNP测序与耐药性

在20例患者中，177位点野生型13例患者中，耐药6例；突变型患者中，耐药6例；1288位点野生型12例患者中，耐药5例；突变型患者中，耐药7例。其中177位点突变型耐药性高于野生型耐药性，1288位点突变型耐药性高于野生型耐药性，对比差异有统计学含义意义（＜0.05）。见表 1。

2.2 患者免疫组织化学染色hENT1表达测定

患者免疫组织化学染色hENT1表达测定结果分析，其中高表达患者9例，耐药7例，低表达患者11例，耐药4例。两种表达下患者吉西他滨耐药性具有一定变化，其中高表达患者耐药性明显高于低表达耐药性，差异具有统计学含义意义（＜0.05）。见表 2。

3 讨论

三阴性乳腺癌属于乳腺癌中常见亚型，在亚洲女性患者中具有较高发病率，需要采用针对性化疗方式，有效控制疾病进一步发展，提高其生存质量。吉西他滨属于临床常见一线乳腺癌化疗药物，在患者疾病治疗过程中具有较高抗肿瘤效果，对提高患者生存率具有显著效果。但是该类化疗药物在临床使用过程中，存在一定耐药性，无法有效发挥其临床治疗作用。因此具体分析三阴性乳腺癌患者SLC29A1基因单核苷酸多态性，对准确掌握吉西他滨耐药性具有显著效果。

在患者相关疾病检测治疗过程中发现，核苷转运载体在介导核苷及核苷类药物的跨膜转运过程中发挥重要作用。其中hENTl和hENT2参与吉西他滨的跨膜转运过程，hENTl是目前发现的在人体内转运吉西他滨的主要蛋白，可以发现hENTl表达程度对吉西他滨耐药性具有一定影响。而随着针对三阴性乳腺癌研究的深入，SLC29A1基因SNP中不同位点序列对及系统并耐药性具有一定影响，其关键在于相应的编码序列氨基酸发生一定变化。具体而言，SLC29A1基因SNP177，1288位点可在亚洲人群中检测发现，而由于三阴性乳腺癌患者不同位点序列发生一定变化，从而影响了在临床治疗过程中吉西他滨耐药性[3-4]。因此在临床开展三阴性乳腺癌患者诊断与治疗过程中，可通过SLC29A1基因单核苷酸多态性分析，相应掌握患者耐药性变化情况，以便于及时采用相应药物治疗，提高临床治疗效果[5-6]。

在本研究中，三阴性乳腺癌患者SLC29A1基因单核苷酸多态性对吉西他滨耐药性具有较大影响，其中1288、177位点突变型耐药性较高，hENTl中高表达耐药性较强，对患者治疗效果造成一定影响，差异有统计学意义（＜0.05）。

综上所述，针对采用吉西他滨治疗三阴性乳腺癌患者，具体分析其SLC29A1基因单核苷酸多态性，准确掌握吉西他滨耐药性情况，对调整患者治疗方案具有重要价值。