miR-92a 在结直肠癌组织中表达与肿瘤恶性指标的关系及对预后的预测价值

王林刚，杜三威，任家正

（河南红阳工业有限责任公司职工医院外科，河南 南阳474678）

miRNA 是人类的一组小单链RNA，可与靶向mRNA 相互集合，并诱导mRNA 降解，或抑制蛋白质翻译，并以此调整下游基因的表达，形成多种病理生理功能，如作用造血系统分化，促进胰岛素合成，参与细胞增殖、分化以及凋亡等[1]。miRNA 在肿瘤细胞内存在高或低表达情况，并生成抑癌或促癌效应参与肿瘤发生发展[2，3]。 微小 RNA-92a（miR-92a）是miRNA 家族成员之一，临床业已证实，miR-92a 与乳腺癌、肺癌以及胰腺癌等肿瘤疾病密切相关[4]。 但miR-92a 在结直肠癌中的表达水平如何，其与患者肿瘤恶性程度指标间的联系如何，临床研究较少。 为此本研究选取我院获取的结直肠癌组织标本90 例、90 例结直肠癌癌旁组织标本进行了如下研究。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取 2016 年 1 月至 2017 年 12 月我院获取的90 例结直肠癌患者的结直肠癌组织标本和结直肠癌癌旁组织标本。

90 例结直肠癌患者，年龄 36～76 岁，平均 54.8±10.0 岁，男 56 例、女 34 例，TNM 分期：Ⅰ期 21 例、Ⅱ期37 例、Ⅲ期26 例、Ⅳ期6 例；淋巴结转移阳性43 例；分化程度：低分化35 例、中分化28 例、高分化27 例；肿瘤直径≥5cm 49 例；其中结肠癌55 例、直肠癌35 例；术后1 年随访出现复发或远处转移24 例。

入选标准： ⑴结直肠癌的诊断标准参考人民卫生出版社《外科学》第八版中的标准；⑵经结直肠镜检查及手术后病理学检查证实； ⑶在获取患者的病理学标本前，患者未接受放化疗、免疫学治疗；⑷患者的病理学资料、病例记录等完整。

排除标准：⑴伴有其他部位的恶性肿瘤；⑵资料缺失、无法统计分析的患者；⑶伴有结直肠其他类型疾病。

1.2 RT-qPCR 方法 采用实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）技术检测并计算两组标本中的miR-92a 相对表达量，具体操作如下：根据TRIzol法检测样本总RNA，参照上海生工提供的RNA 逆转录试剂盒进行反转录。 取各组样本2μg 总RNA进行逆转录反应，条件参照如下：42℃，60min；72℃，10min。 取 2μl cDNA 进行 PCR 反应， 条件参照如下:50℃，2min；75℃，10min，95℃，15s；60℃，1min，共38 个循环。 随后选用西安天隆科技有限公司提供的荧光定量PCR 仪检测结果。并分析肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、TNM 分期的结直肠癌组织中的miR-92a 表达差异。

1.3 统计学方法 采用美国IBM SPSS 公司的统计软件包SPSS21.0 版本对本研究的数据进行统计学处理，采用±s 表示符合正态分布的计量资料，应用t 检验进行数据分析； 应用χ2检验分析计数资料；绘制ROC 曲线分析miR-92a 相对表达量预测患者术后复发或远处转移的价值。 P＜0.05 为差异具有统计学显著性。

2 结果

2.1 癌组织和癌旁组织中的miR-92a 表达差异结肠癌癌组织中的miR-92a 相对表达量显著的高于癌旁组织，差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表1、图1。

表1 癌组织和癌旁组织中的miR-92a 表达差异（±s，2-△△ct）

表1 癌组织和癌旁组织中的miR-92a 表达差异（±s，2-△△ct）

组别 n癌组织癌旁组织P 值90 90 miR-92a t 值0.894±0.204 0.371±0.116 21.1430.000

图1 癌组织和癌旁组织中的miR-92a 表达情况，1、2 为癌旁组中的U6 表达，3 为结肠癌组织中的miR-92a 表达，4 为癌旁组织中的miR-92a 表达

2.2 不同病理学特征及预后的结肠癌癌组织的miR-92a 相对表达量差异 Ⅲ+Ⅳ期、低分化、发生淋巴结转移及术后12 个月有复发或远处转移的结肠癌癌组织中的miR-92a 相对表达量显著的高于Ⅰ+Ⅱ期、高+中分化、未发生淋巴结转移及无复发或远处转移的结肠癌组织，差异具有统计学意义（P＜0.05）；在不同结直肠癌肿瘤直径的结肠癌组织中的miR-92a 相对表达量差异无统计学意义 （P＞0.05）。 见表2。

表2 不同病理学特征及预后的结肠癌癌组织的miR-92a 相对表达量差异（±s，2-△△ct）

表2 不同病理学特征及预后的结肠癌癌组织的miR-92a 相对表达量差异（±s，2-△△ct）

病理学特征 n TNM 分期Ⅰ+Ⅱ期Ⅲ+Ⅳ期分化程度高+中低分化淋巴结转移miR-92a t 值P 值58 32 0.840±0.188 0.967±0.1923.0450.003 55 35 0.852±0.174 0.957±0.1962.6560.009是 否43 47 0.977±0.201 0.815±0.1843.9920.000肿瘤直径≥5cm＜5cm术后12 个月复发或远处转移49 41 0.910±0.163 0.870±0.1921.0690.288有 无24 66 0.989±0.188 0.803±0.1924.0860.000

2.3 miR-92a 相对表达量对结直肠癌患者术后复发或远处转移的预测价值 根据12 个月随访结果，通过绘制ROC 曲线确定miR-92a 相对表达量预测结直肠癌患者术后复发或远处转移的临界值，以大于临界值者为有复发或远处转移，否则为无复发或远处转移，结果显示，以miR-92a 相对表达量临界值 0.904（2-△△ct）预测结直肠癌患者术后发生远处转移或复发的ROC 曲线下面积AUC 值为 0.861（0.824～0.918），灵敏度、特异度、阳性预测值 和 阴 性 预 测 值 分 别 为 0.750、0.818、0.600 和0.900。 见图2。

图2 miR-92a 相对表达量预测患者发生复发或远处转移的ROC 曲线

3 讨论

结直肠癌发生、发展与多种癌基因激活，抑癌基因突变、失活以及细胞周期调控基因突变有关[5]。大量研究显示，结直肠癌患者存在多种miRNA 表达情况，这些miRNA 的靶基因参与着结直肠细胞的恶性化、分化以及转移[6，7]。 miR-92a 属于 miR-17-92 基因簇的一员，有研究发现，miR-92a、miR-363 在结直肠癌组织及血浆内存在明显高表达情况[8]。 本组研究中，结肠癌癌组织中的miR-92a 相对表达量水平显著的高于癌旁组织，差异具有统计学意义，这与相关研究结果相似，表明miR-92a 是结直肠癌重要参与因子。miR-92a 是促癌基因的一种，可有效增强结直肠癌细胞活力，并促其集落的生成[9]。 miR-92a 参与结直肠癌病变的作用机制尚不明确，但可能为：miR-92a 可通过mTOR 信号通路来调节细胞代谢、生长以分裂[10]。 mTOR 是细胞内的一种丝氨酸/络氨酸激酶， 其是多种信号路径的参与因子，这些信号路径参与着细胞代谢、生长分裂，血管新生以及细胞自噬等多种生物效应[11]。

miRNA 可靶向调控血管生成因子及蛋白激酶的表达，并促进或抑制肿瘤血管新生[12，13]。有研究发现[14]，恶性转化的肠道细胞内可见miR-17-92 基因簇，并且这些基因簇可有效促进肿瘤血管新生。本组研究中，Ⅲ+Ⅳ期、低分化、发生淋巴结转移的结肠癌癌组织中的miR-92a 相对表达量水平显著的高于Ⅰ+Ⅱ期、高+中分化、未发生淋巴结转移的结肠癌组织，差异具有统计学意义，表明miR-92a相对表达量水平与患者肿瘤恶性程度密切相关，miR-92a 或可用于评估结直肠癌患者恶性程度。有研究发现[15]，结直肠癌患者miR-92a 表达水平显著增高，并且与患者TNM 分期，淋巴结转移以及生存期相关， 进一步的研究显示，miR-92a 或可用于鉴别转移或非转移性结直肠癌，这与本组研究结果相似。miR-92a 可靶向调节磷酸酶和张力蛋白同源性蛋白表达， 并以此负性调节PI3K/AKt 信号路径内的磷酸化蛋白表达，最终影响细胞增殖、分化以及凋亡[16，17]。 有研究发现[18]，miR-92a 高表达的上清液可有效增强 HUVEC 小管的生成能力， 表明miR-92a 或可通过促进肿瘤微小血管新生，增强肿瘤增殖、分化能力。 有研究发现[19]，结直肠癌miR-92a 表达水平与患者磷酸酶和张力蛋白同源性蛋白表达水平负向相关，表明miR-92a 可通过抑制磷酸酶和张力蛋白同源性蛋白表达来促进结直肠癌血管新生，最终参与肿瘤增殖、转移。 还有研究发现[20]，结直肠癌细胞可合成含有miR-92a 的微泡，这些微泡可与血管内皮细胞结合， 并下调Dkk-3基因表达，并增强内皮细胞增殖、迁移，为肿瘤血管新生提供有利微环境，促进肿瘤生长。 但本组研究发现， 在不同结直肠癌肿瘤直径的结肠癌组织中的miR-92a 表达水平差异不具有统计学意义，表明miR-92a 与患者病灶体积无相关性， 其原因可能与不同病灶体积内的新生血管平均密度相似有关，还可能与本组研究样本数量较小有关。

本研究通过RT-qPCR 检测，发现结直肠癌组织内miR-92a 相对表达量水平显著高于癌旁组织，其可通过作用mTOR 信号通路来调节细胞代谢、生长以分裂， 还可通过多种路径促进肿瘤血管新生，最终参与肿瘤增殖、分化。 因此，miR-92a 或可成为结直肠癌新的诊断标志物及靶向治疗新方向。随访12 个月显示，miR-92a 相对表达量预测结直肠癌患者术后发生远处转移或复发的ROC 曲线下面积AUC 值为0.861，对应的截断值为0.904，其灵敏度和特异度分别为0.750 和0.818，提示miR-92a 或可作为结直肠癌术后复发或远处转移的预测指标。

综上所述， 结直肠癌组织中miR-92a 呈高表达，且与结直肠癌的恶性程度有关，同时对结直肠癌术后复发与远处转移具有一定的预测价值。