四川德阳地区解脲脲原体感染现状分析及两种核酸检测方法比较

文强，曹桂群，王秀，徐志红

（四川省德阳市人民医院生殖遗传科， 四川 德阳 618000）

解脲脲原体(ureaplasma urealyticum，UU)，亦称溶脲脲原体，是六种脲原体属中的一种，与人类泌尿生殖道感染有密切关系[1]。 它是人类泌尿生殖道常见寄生菌之一，也存在于呼吸道，在特定环境下可以致病。 解脲脲原体在一定条件下能引起泌尿系统感染和不孕症，常常引起男性前列腺炎或附睾炎、女性阴道炎、宫颈炎，是非淋菌性尿道炎的主要病原体[2]，并妊娠期感染可导致胎膜早破(PROM)、早产、胎儿宫内感染、孕妇产褥期感人及低体重胎儿等，还可引起新生儿呼吸道和中枢神经系统感染[3，4]。 近年来，入院检查 UU 的人数逐年升高，且受检人群偏向低年龄段，大多UU 携带者都正处于最佳生育年龄阶段，加之，随着感染人数的增多以及抗生素的滥用，UU 耐药株的出现已多有报道[5]，因此，本市需要及时了解当地UU 感染的现状以及开展更好更多样的检测方法以对UU 进行更好的检测和临床疗效的监测。

本文研究了我院近两年来受检人群UU 感染的现状，旨在了解我市UU 的感染分布特征以便今后开展对UU 更好的防治。 同时，随着分子生物学诊断技术的发展，UU 的检测在核酸类型上也分为了DNA 检测和RNA 检测。 本文对在我院进行DNA 检测和RNA 检测的受检人群的UU 检出情况进行了比较分析，以深入了解两种技术在检测中的差异和特点。

1 材料和方法

1.1 研究对象 本研究对象为 2016 年 11 月至2018 年10 月于德阳市人民医院生殖遗传科的分子生物实验室进行UU 检测的体检、婚检、生殖系统炎症、不孕症、孕期异常患者，总计2033 例。 研究对象年龄分布在 10～77 岁， 其中 UU-RNA 检测共 1001 例， 包含 611 例男性和 390 例女性；UUDNA 检测共1032 例，包含564 例男性和 471 例女性。

1.2 标本采集 UU-DNA 检测的标本采集:女性:用无菌生理盐水棉球洗去宫颈外分泌物，再换取样拭子伸入宫颈1～2cm， 停留数秒并旋转2 周后取出。男性：将拭子伸入男性尿道2～4cm，停留数秒并旋转2 周后取出。 采集的分泌物保存于含1ml 生理盐水的无菌采集管内，冷藏保存，4h 内送检。

UU-RNA 检测的标本采集： 男性与女性均自行取样， 用无菌带盖尿杯接取中段尿液3～5ml，无菌密封，冷藏保存，1h 内送检。

1.3 检测方法 UU-RNA 检测： 采用解脲脲原体（UU）核酸检测试剂盒（RNA 恒温扩增）（上海仁度生物科技有限公司）检测；UU-DNA 检测：采用解脲脲原体（UU）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）（凯杰生物工程（深圳）有限公司）检测。 具体检测步骤严格按照试剂盒说明书操作。 荧光定量PCR 仪为 Roche LightCycler 480 实时荧光定量PCR 仪。

1.5 统计学分析 应用SPSS 23.0 软件进行数据处理分析，计数资料采用χ2检验，两方法的比较采用简单四格表χ2检验，趋势判断采用χ2检验线性组合结果判断[6]。 P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 UU-RNA 与 UU-DNA 检测方法对比 UURNA 检测共 1001 例，阳性 460 例，阳性率 45.95%；UU-DNA 检测共 1032 例， 阳性 561 例， 阳性率54.36%。UU-DNA 的检出率明显高于UU-RNA，差异具有统计学意义（χ2=14.364，P=0.000＜0.05）。 见表1。

表1 UU-RNA 与UU-DNA 检测结果

2.2 不同性别间的UU 阳性率对比 在UU-RNA检测的结果中，男性611 例，阳性252 例，阳性率41.24%；女性390 例，阳性208 例，阳性率53.33%。女性的阳性率明显高于男性，差异具有统计学意义（χ2=14.009，P=0.000＜0.05）。 在 UU-DNA 检测的结果中，男性564 例，检出252 例，阳性率44.68%；女性468 例，检出309 例，阳性率66.03%。 数据经处理分析，同样发现女性阳性率显著高于男性，差异具有统计学意义（χ2=46.968，P=0.000＜0.05），见表2。

表2 不同性别间的UU 阳性率比较

2.3 年龄段间的阳性率趋势变化 对UU-RNA 和UU-DNA 受检人群进行年龄段分组后，根据检测结果发现不论是RNA 检测还是DNA 检测，其阳性率在＜20 年龄段组中均最高（UU-RNA 中为58.82%；UU-DNA 中为 84.00%），在＞60 岁年龄段组中阳性率均最低 （UU-RNA 中为 25.00%；UU-DNA 中为15.00%），并且整体呈现随年龄的增加，阳性率逐渐降低的趋势，线性趋势具有统计学意义（UU-RNA中，χ2=5.004，P=0.025＜0.05；UU-DNA 中，χ2=7.289，P=0.007＜0.05），见表3。

表3 年龄段间的阳性率趋势变化

2.4 UU-RNA 与UU-DNA 对复检人群的检测对比在UU-RNA 的受检人群中，筛选出174 例患者，该群体均在不同时间进行了两次以上的UU-RNA 检测。 其中33 例患者，多次检测均为阳性，占总数的18.97%，129 例患者在多次检测中UU 感染已由阳转阴，占74.14%，另有12 例多次检验均为阴性。在UU-DNA 的受检人群中，同样筛选出100 例进行了多次UU-DNA 检测的患者，其中有32 例患者反复检验均为阳性，占总数32.00%，另有57 例患者UU感染由阳转阴，占57.00%。 对比发现，UU-RNA 的复检转阴率显著高于UU-DNA， 差异具有统计学意义（χ2=8.569，P=0.014＜0.05），见表4。

表4 UU-RNA 与UU-DNA 在复检人群中的比较

3 讨论

解脲脲原体（ureaplasma urealyticum，UU）是目前发现的最小的能够在无生命体培养基中繁殖的微生物。 其主要存在于泌尿生殖道和呼吸道中，在1954 年被 Shepard M 等人从非淋菌性尿道炎（nongonococcal urethritis，NGU） 患者的尿道中分离发现的[7]。它是一种条件致病微生物，可以在机体免疫抑制或器械检查时侵犯宿主粘膜。 UU 的感染可引起人体泌尿系统的感染和不孕不育症[4，8]，与男性前列腺炎或附睾炎和女性阴道炎、宫颈炎等疾病都有关系，是非淋菌性尿道炎发生的常见病原体之一，还可引起早产、胎膜早破、绒毛膜羊膜炎和自然流产等不良妊娠结局[9]。 常见的UU 感染途径包括性接触传播、母婴垂直传播和胎儿出生时通过体液传播。

本文对德阳地区来院就诊的包括疑似患者和体检筛查患者进行UU 核酸检测，统计分析后发现，UU-RNA 和UU-DNA 的阳性率分别为45.95%和54.36%，总体在50%左右，相比于江苏地区（UU 感染率 61.61%）[10]和湖北地区（UU 感染率 65%）[11]，我院检出的感染率略低，但高于台州地区（UU 感染率 40.70%）[12]和宁夏地区（UU 感染率 36.9%）[13]。UU 是人类泌尿生殖道常见寄生菌之一，其感染率较高，但不同地区间的UU 感染率还是有较大的差异[14]，不同地区的人群差异、文化差异、医疗水平、经济水平等对UU 的感染、传播及治疗都有影响。

在对德阳地区受检人群的性别分析后，发现两种检测方法都显示女性的UU 感染率都明显高于男性，与已有文献报告的国内大部分地区结论一致[15，16]。 由于女性泌尿生殖道短且浅，阴道环境温湿，易于UU 等常见条件致病菌的定殖。 有文献也讲到，由于性别生理结构的差异，女性是生殖道感染的弱势群体[17]。另外，本文的统计分析也显示，随着年龄的增长，UU 的感染率呈降低趋势。但阳性率的大幅下降在50 岁以上年龄段才开始，50 岁以内人群的感染率均在44%以上，不容忽视。同时，在对受检人群进行分析，发现 21～30 及 31～40 岁这两个年龄段受检人数之和占据了总人数的60%以上（UURNA 中为 67.33%，UU-DNA 中为 63.66%），且该年龄段的阳性率总体较高。 这与袁柳凤等[7]的研究结果一致。 这提示我们，正值育龄的青中年人群可能已为UU 的感染所累。 不孕不育、流产、早产、孕期胎膜早破[2]等问题都将因UU 的感染而危害到我们年轻的一代，更可能通过垂直传染，引起新生儿呼吸道和中枢神经系统感染[18]，因此，迫切需要我们医疗单位和科研人员提供对UU 更加准确、方便的检测方法和有效、长久的治疗手段。

此外， 在分析了德阳地区复检人群检测结果后，发现在经过临床治疗后UU 阳性患者的转阴例数还是约达到60%以上，但仍有20%～30%的患者经过治疗后检测仍为阳性，反映了临床治疗效果的不佳或UU 感染的反复，难治愈性。 目前已有多篇国内文献报告了 UU 的药物敏感性情况[17，19]，警示临床医师和患者在治疗UU 感染时，切不可再随意使用抗生素，谨防UU 耐药株的出现和扩大。 在治疗UU 感染前应先做UU 的药物敏感性分析，在药敏分析结果的指导下合理使用抗生素[18]。

关于UU-DNA 和UU-RNA 两种不同方法检测结果的比较，本文发现RNA 检测技术（核酸等温扩增技术，SAT） 的检出阳性率低于常用的DNA检测方法。 在复检人群的检测也中发现，UU-RNA检测的复检转阴率是低于UU-DNA 的。 这主要归因于SAT 技术只能检测存在完整RNA 片段的活病原体，排除了经临床有效治疗后已死亡的病原体[20]。 因此，UU-RNA 检测技术适合作为临床用药治疗监测的方法，可及时反映治疗效果，符合精准医疗的要求[21]，同时减轻患者身心负担。

综上所述，解脲脲原体（UU）在德阳地区的感染率较高，且女性的阳性率显著高于男性，已有不少正值育龄期的青中年正为UU 的感染所累。在临床治疗上，UU 的反复感染提示我们抗生素的使用更需谨慎。 SAT 技术更适合用于临床疗效监测。