成人及新生儿血红蛋白NewYork的血液学特征分析

李育敏， 蔡钦泉， 金 潇， 覃俊龙， 陈亚琼， 莫云均， 李 瑞， 张秀明

（1. 深圳市罗湖区人民医院医学检验科，广东 深圳 518001；2. 深圳市罗湖区人民医院感染管理科，广东 深圳 518001）

异常血红蛋白（hemoglobin，Hb）是由于珠蛋白基因缺陷使珠蛋白一级结构发生改变，导致Hb分子结构发生变异的一组遗传性Hb病[1]。Hb NewYork是由于β珠蛋白肽链第113位密码子GTG→GAG突变，使该位点谷氨酸代替甘氨酸，引起β链G螺旋段构象改变所致。秦良谊[2]对我国β链异常Hb进行大规模群体遗传学研究发现，Hb NewYork在我国南方地区β链异常Hb分布中居第2位，仅次于HbE。由于不同年龄段及性别血液学参数存在差异，且大部分进行Hb电泳筛查的成年女性为妊娠期，存在生理性贫血可能，因此本研究通过对Hb NewYork进行筛查，并按年龄段及性别分析其血液学特征，为Hb NewYork的遗传学研究提供系统、详细的参考资料。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取2016年6月—2019年5月在深圳市罗湖区人民医院进行Hb检测的72 397名成人及新生儿。对检出Hb NewYork者按年龄及性别分为新生儿组、成年男性组和成年女性组。

1.2 仪器与试剂

XN-1000全自动血液分析仪及配套试剂（日本Sysmex公司），Capillarys 2全自动毛细管电泳仪及配套试剂（法国Sebia公司），T960扩增仪（珠海黑马公司），ChemiDoc MP全自动凝胶成像分析仪（美国Bio-Rad公司），DYY-6C型电泳仪（北京六一仪器厂），YN-H16恒温杂交仪（深圳亚能公司），3730XL遗传分析仪（美国ABI公司）。

1.3 方法

1.3.1 样本采集 采集成人外周静脉血2 mL，乙二胺四乙酸二钾抗凝，2～8 ℃保存，用于红细胞参数检测和Hb电泳分析。采集新生儿脐带血2 mL，肝素锂抗凝，2～8 ℃保存，用于Hb电泳分析。

1.3.2 血液学分析 采用XN-1000全自动血液分析仪及配套试剂检测Hb、红细胞平均体积（mean corpuscular volume，MCV）、平均红细胞血红蛋白含量（mean corpuscular hemoglobin，MCH）。采用毛细管电泳法进行Hb分析，鉴别Hb条带的类型及分析各条带的相对比例。严格均按仪器和试剂盒说明书进行操作。

1.3.3 地中海贫血（简称地贫）基因检测 采用跨越断裂点聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）检测3种中国人群常见缺失型α地贫基因（--SEA、-α3.7和-α4.2）。采用PCR结合反向点杂交检测常见3种非缺失α地贫基因（αQS、αCS、αWS）和17种β地贫基因点突变类型（-28、-29、CD17、CD41-42、CD43、βE、CD71-72、IVS-Ⅱ-654、-32、-30、CAP、Initiation condon、CD14-15、CD27-28、IVS-Ⅰ-1、IVS-Ⅰ-5、CD31）。严格按仪器和试剂盒说明书进行操作及结果判读。

1.3.4 珠蛋白基因序列分析 珠蛋白基因测序由深圳亚能公司检测。采用PCR扩增β珠蛋白基因，Sanger双脱氧链终止法进行珠蛋白基因序列测定，Vector NET 8.0软件进行测序结果比对，在人类异常Hb和地贫数据库（http：//globin.bx.psu.edu）中查找突变位点。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0软件对数据进行统计学分析，连续变量采用x±s表示。

2 结果

2.1 基因型分析

DNA测序检出64例Hb NewYork，均为杂合子，发生率为0.088%（64/72 397），包括62例单纯Hb NewYork杂合子，其中成人57例（男21例、女36例），新生儿5例；1例Hb NewYork复合-α3.7杂合缺失和1例Hb NewYork复合IVS-Ⅱ-81杂合突变（图1），均为成人。

2.2 血液学表型分析

成人单纯Hb NewYork杂合子、Hb NewYork复合-α3.7杂合缺失和Hb NewYork复合IVS-Ⅱ-81杂合突变（C＞T）血液学表型正常，具体结果见表1。5例新生儿Hb NewYork杂合子的Hb NewYork含量为（4.7±0.6）%，毛细管电泳分析结果见表2。

图1 Hb NewYork复合IVS--81杂合突变的测序图

表1 成人Hb NewYork的血液学表型

表2 5例新生儿Hb NewYork杂合子的毛细管电泳分析

3 讨论

我国南方地区高发的β链异常Hb主要为HbE、Hb NewYork和Hb J-Bangkok等[2-5]。广西地区Hb NewYork发生率为0.12%[3]，广东梅州地区为0.079%[6]，韶关地区为0.062%[7]，深圳地区为0.101%[8]，本研究结果为0.088%，高于韶关和梅州地区[6-7]，但低于冉健等[5]报道的深圳地区Hb NewYork发生率（0.115%），这可能与样本选择有关。冉健等[5]选择深圳地区妊娠妇女作为调查对象，而本研究选择的样本量大、人群范围广，更具代表性，对深圳地区异常Hb的筛查和遗传学研究具有参考价值。

异常Hb病表型取决于突变位点是否影响到Hb生物学功能。一方面，除有明显功能改变的异常Hb如HbS、HbM和HbE等，多数异常Hb单纯杂合子血液学表型正常；另一方面，异常Hb合并地贫可表现为贫血，其贫血程度取决于合并的地贫类型，合并静止型地贫时，红细胞参数和Hb分析均正常，携带者终生可无临床症状；合并轻型地贫时，红细胞参数降低和/或伴贫血。因此未影响到Hb功能的单纯异常Hb杂合子携带者与地贫基因携带者结合的夫妻双方可不需进行产前诊断。

Hb NewYork血液学表型也符合上述特征。有研究表明，单纯Hb NewYork杂合子及合并静止型α地贫患者红细胞参数指标正常；合并轻型α地贫患者红细胞参数降低或有轻度贫血，两者Hb电泳分析均表现为HbA2正常，异常Hb NewYork变异体含量在40%左右[3，9-10]。Hb NewYork合并轻型β地贫（β0杂合突变），表现为轻、中度小细胞低色素贫血，无HbA存在，HbA2增高，Hb NewYork含量约占90%[10-11]。由于Hb NewYork合并β0地贫时，Hb NewYork量与β基因缺陷数量呈正相关，β0杂合突变即1个β基因失活，而剩下1个β基因发生突变形成Hb NewYork，因此成人Hb NewYork合并β0地贫无HbA合成，而以Hb NewYork为主，且HbA2升高。β链其他异常Hb合并β0地贫的Hb各组分的变化也遵循此规律，如Hb J-Bangkok及HbE合并β0地贫也无HbA及HbA2升高[12-13]，前者Hb J-Bangkok在90%左右，含量基本同Hb NewYork；但后者HbE含量在50%左右，而HbF升高（40%左右），这是由于HbE属于地贫样变异，影响了Hb的功能，使β链合成减少，γ-基因重新开放使HbF升高，以降低α和β珠蛋白链的不平衡性，使临床表现减轻，而Hb NewYork和Hb J-Bangkok均为Hb的分子结构发生改变，属于异常Hb病，未影响到Hb的生物学功能，临床表型正常。这也提示临床可以根据Hb各条带相对含量来初步判断异常Hb的类型，必要时进一步行地贫基因检测及DNA测序，以明确其是否与地贫相关，并结合是否引起异常临床表现来开展遗传咨询工作。

鉴于不同性别血液学参数不同，且女性妊娠期存在生理性贫血可能。本研究首先对成人按性别进行Hb NewYork血液学表型分析，结果表明成人单纯Hb NewYork杂合子及合并静止型α地贫血液学表型正常，与文献报道相符[3，9-10]。本研究还发现1例成人Hb NewYork复合IVS-Ⅱ-81杂合突变，其血液学表型正常。β珠蛋白基因IVS-Ⅱ-81（C＞T）突变（HBB：c.315+81C＞T）在HbVar数据库上的记录显示发生于印度人群，可能为中性多态性位点。我国对IVS-Ⅱ-81突变位点的报道较少，李育敏等[8]曾发现1例Hb Queens合并IVS-Ⅱ-81杂合突变，其血液学表型表现为正常。这表明IVS-Ⅱ-81杂合突变不影响β珠蛋白基因的表达，其合并同样不影响Hb功能的单纯异常Hb杂合子时临床表型也正常。但由于未进行家系调查，尚不清楚本例携带者的Hb NewYork和IVS-Ⅱ-81是否发生于同一条β链上。其次，鉴于不同年龄段的血液学参数不同，成人和新生儿Hb NewYork Hb电泳特征存在差异。本研究分析了5例新生儿Hb NewYork杂合子的Hb电泳结果，其Hb NewYork含量为（4.7±0.6）%。由于脐带血Hb电泳分析在新生儿地贫筛查中较传统的红细胞脆性试验及血细胞分析筛查效果更佳[14]，因此本研究提供的临床资料对新生儿Hb病的筛查具有重要的参考价值。

在Hb分析中同一电泳分区可能存在不同的异常Hb[15]，需通过DNA测序才能鉴定其类型，因此临床应注意区别各异常Hb，重视异常Hb及其合并地贫时的表型与基因型的相关规律，以更好地进行Hb病的筛查、诊断和遗传咨询。