风疹疑似样本ELISA与RT-PCR检测结果研究

辽宁省本溪市疾病预防控制中心（117000）陈清

风疹是一种以急性发热出疹为特点的呼吸道传染病症，因具有流行性和爆发性趋势，严重危害青少年生命安全[1]。同时孕期女性在妊娠前90日如果感染风疹病毒，将导致胎儿出现先天性风疹综合征，造成流产、死胎或者畸形。所以风疹的早期治疗十分关键。常规风疹诊断为病毒分离培养法，血清IgM抗体测定，但是存在较多局限性，如培养时间较久、诊断复杂、抗体存在交叉性等，无法满足当前快速诊断需求[2]。因此本文将针对ELISA与RT-PCR检测形式的临床价值，分析测定结果。

附表1 ELISA计算的结果(47例)

附表2 RT-PCR计算的结果（13例）

附表3 不同采样时间同一方式测定结果分析

附表4 同一采集时间不同方式测定的结果

1 数据、方法

1.1 样本分析 依据卫生部印发的《全国麻疹监测方案(2014版)》要求，对收集的风疹疑似患者病例，同时予以血清样本和咽拭子样本测定。

1.2 方法

1.2.1 ELISA测定 应用风疹病毒IgM抗体测定试剂盒测定血清样本，应用样本稀释液，按照1∶100比例稀释后，以阴性、临界、阳性对照及稀释好的样本分别选取100μL，加进反应孔中，在37℃下放置60分钟；洗板5次；应用酶标物稀释液将酶标物作1∶70稀释，每孔加进100μL，在37℃下放置60分钟；洗板5次；加底物A和B液室温避光静置15～30分钟，酶标仪450nm波长测定结果。

1.2.2 RT-PCR测定 应用RNA/DNA试剂盒提取咽拭子洗液，应用风疹病毒核酸测定试剂盒，对提取液进行扩增和测定。

1.2.3 实验室确诊 选取ELISA和RT-PCR任意一种方式的测定结果为阳性患者，判定为实验室确诊。

1.3 统计学分析 采用SPSS17.0软件记录本次研究数据，计数资料用率（%）形式表达，行卡方检验。组间P＜0.05证实有差异性。

2 结果

2.1 不同方法呈现的结果 本次共纳入风疹麻疹疑似血清47份和咽拭子样本13份。47份血清样本经由ELISA测定阳性16份，ELISA阳性率34.04%（16/47），实验室确诊21份，确诊率44.68%（21/47）；ELISA和RT-PCR灵敏度为76.19%（16/21）和7.69%（1/13）。13份咽拭子样本RT-PCR测定阳性1份，RT-PCR阳性率7.69%（1/13）；经过卡方检验，ELISA阳性率和RT-PCR阳性率对比有差异性（X2=4.6626，P=0.0308）。具体由附表1、附表2可知。

2.2 采集时间不同所测定的结果 出疹当天采集时间记录为24小时，分析采集时间和测定结果的关联性。出疹48小时以内采集的样本为20份，出疹72小时为25份。

ELISA，48小时以内收集的血清样本阳性率和72小时以上收集的血清样本阳性率对比有差异性（P＜0.05）。对RTPCR，48小时以内收集的咽拭子样本阳性率和72小时以上收集的咽拭子样本阳性率对比存在统计学意义（P＜0.05），具体由附表3可知。

2.3 同一采集时间不同方式测定的结果 出疹48小时内收集ELISA测定阳性5份，ELISA阳性率25.00%（5/20）；RT-PCR测定阳性3份，RT-PCR阳性率15.00%（3/20）；卡方检验RT-PCR阳性率和ELISA阳性率对比存在差异性（P＜0.05）。

出疹72小时以上收集ELISA测定阳性8份，ELISA阳性率为32.00%（8/25）；RT-PCR测定阳性1份，RT-PCR阳性率为4.00%（1/25）；卡方检验ELISA阳性率和RT-PCR阳性率对比有差异性（X2=4.5000，P=0.0338），见附表4。

3 讨论

当前，在我国相关报道中，认为风疹疑似样本采用ELISA和RT-PCR测定阳性率，具有较大的差异性，临床研究认为ELISA测定比率最高为84.00%，最低为1.30%，RT-PCR测定阳性率最高为100.00%[3]，最低为1.30%。本次数据分析中ELISA和RT-PCR测定阳性率在34.04%及7.69%，虽然在相关报道范围内，但是仍然低于临床研究。分析因素可能是由于样本质量或者临床医师鉴别诊断水平较低导致少数样本中的特异性目标测定物浓度过低，甚至不存在。这也说明今后采集操作流程应科学规范，从而提升鉴别诊断的价值。

也有数据证实，RT-PCR测定阳性率高于ELISA测定，但是本研究结果却与其不符。PCR02号样品第一次抗体未检测出阳性，二次采样检测出风疹IgM阳性，与咽拭结果一致；PCR03号样品检出风疹IgM阳性，而咽拭结果未检出，究其因素可能是由于血清相比于咽拭子采集技术和保存条件要求较低，血清中的抗体和咽拭子中的病毒比较[4]，不容易受到环境因素影响，从而造成抗体滴度下降或者病毒RNA降解。因此今后临床中应提升咽拭子采集质量，对保存条件进行控制，以此提升RT-PCR测定效果。

根据采集时间的不同来分析，依据出疹48小时内收集的样本RT-PCR测定阳性率＞72小时采集数据，而ELISA测定阳性率相反且出疹48小时以内收集的样本数＜72小时以上，这也说明早期数据过少是导致ELISA阳性率＞RT-PCR的另一因素。根据同一收集时间不同方式来分析，出疹48小时以内收集的样本，其RT-PCR阳性率＜ELISA，出疹72小时以上收集的样本[5]，ELISA阳性率＞RT-PCR。这可能是因免疫力差异导致抗体出现的早晚有所区别，从而造成病症早期应用ELISA无法测定出抗体出现较晚的样本；且RT-PCR能够直接测定出病毒RNA，病症早期阶段病毒复制较为活跃，所以病症早期测定更加敏锐。

综上所述，为了更进一步提升风疹测定能力，今后应提升样本质量和临床医师的鉴别诊断能力，尤其是咽拭子质量，这对于临床研究具有十分重要的价值。