lncRNA SNHG20表达与乳腺癌放疗敏感性及预后的关系

文兰香， 覃世运， 陈丽君

(海南省三亚市中心医院/海南省第三人民医院肿瘤中心， 海南 三亚 572000)

乳腺癌属于乳腺上皮组织来源恶性肿瘤，一般为女性发病。由于生活环境、饮食习惯、妊娠、精神状态、遗传等因素影响，乳腺癌在女性中发病率逐年升高，位居妇科恶性肿瘤之首。乳腺癌中晚期患者生存率低，预后极差，严重影响患者生存质量[1]。肿瘤放射治疗简称放疗，目前临床多采用手术、放疗、化疗等手段结合治疗乳腺癌，可明显提高患者生存率[2]。放疗疗效与肿瘤放疗敏感性有关，放疗敏感性差异导致乳腺癌患者接受放疗后生存率等预后状况明显不同[3]。有研究表明，宫颈癌组织中lncRNA SNHG20表达明显增加，抑制其表达可降低宫颈癌细胞增殖和侵袭能力[4]。与癌旁组织相比，lncRNA SNHG20在肝癌组织中表达显著上调，与肝癌患者总生存率较差有关，是肝癌患者预后独立影响因素[5]。然而lncRNA SNHG20在乳腺癌组织中表达及其与乳腺癌放疗敏感性、患者预后关系研究较少。本研究通过检测lncRNA SNHG20在乳腺癌组织中表达水平，分析其与乳腺癌放疗敏感性及患者预后关系。

1 资料与方法

1.1一般资料:选取2013年11月至2016年10月本院收治的乳腺癌患者119例作为研究对象，患者年龄29～67岁，平均(43.28±10.31)岁。纳入标准：①经穿刺活检或病理组织切片检查确诊为乳腺癌；②临床及随访资料完整；③入组前未进行任何治疗；④患者及其家属同意并签署知情同意书。排除标准：①不能接受放、化疗者；②合并患有其它部位肿瘤者；③患有严重精神疾病者。根据国际抗癌联盟(TNM)分期系统[6]，将乳腺癌患者分为：Ⅰ～Ⅱ期80例，Ⅲ期39例；根据分化程度分为高、中分化74例，低分化45例；根据淋巴结转移情况分为：无淋巴结转移77例，有淋巴结转移42例；根据ER、PR表达情况分为：ER阳性63例、ER阴性56例，PR阳性72例、PR阴性47例；根据治疗手段分为：有辅助化疗60例，未辅助化疗59例。取入组乳腺癌患者活检癌组织，另取本院病理库正常乳腺组织119例作为对照。两组年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经海南省第三人民医院伦理委员会批准同意。

1.2主要仪器和试剂:实时荧光定量(Quantitative Real-time PCR，qRT-PCR)仪(型号：ABI 7500 Fast，美国ABI公司)；总RNA提取试剂盒(货号：TR205-10，北京天漠科技开发有限公司)；反转录试剂盒(货号：ALH266-PTO，北京百奥莱博科技有限公司)；qRT-PCR试剂盒(货号：RR820A，大连宝生物工程有限公司)。

1.3qRT-PCR法检测lncRNA SNHG20表达水平:将癌组织及正常组织液氮迅速冷冻研磨后Trizol法提取总RNA，反转录为cDNA后，用于qRT-PCR实验。20μL反应体系如下：SYBR Premix Ex Taq II 10μL，ROX Dye 0.4μL，上游引物0.8μL，下游引物0.8μL，cDNA 2μL，无酶水6μL。反应步骤如下：95℃ 30s，1循环；95℃ 5s、60℃ 33s，40循环。采用2-△△CT法计算lncRNA SNHG20相对表达量。本次实验所用引物如表1，以β-actin为内参基因。引物由大连宝生物工程有限公司合成。

表1 qRT-PCR引物序列

1.4放疗及疗效评定:入组患者进行根治性放疗，分别用6 MV X射线照射胸壁及锁骨上下区，5次/周，照射剂量40 Gy，治疗4周。疗效：放疗结束1个月后，根据RECIST疗效评价标准[7]分为：完全缓解(CR)：肿瘤完全消失，且维持4周；部分缓解(PR)：目标病灶最长径总和减少≥30%，维持4周；疾病稳定(SD)：变化在PR与PD之间；疾病进展(PD)：目标病灶最长径总和增加20%。缓解率=(CR+PR)/总例数×100%；总有效率=(CR+PR+SD)/总例数×100%。

2 结 果

2.1乳腺癌组织及正常乳腺组织中lncRNA SNHG20表达水平:乳腺癌组织中lncRNA SNHG20表达水平显著高于正常乳腺组织(P<0.05)，见表2。

表2 lncRNA SNHG20表达水平比较

2.2乳腺癌组织中lncRNA SNHG20表达与临床病理特征关系:以lncRNA SNHG20在乳腺癌组织中表达平均值(3.15)为界分为高表达组和低表达组。乳腺癌组织中lncRNA SNHG20表达水平与年龄、肿瘤直径、ER值及PR值无关(P均>0.05)，与分化程度、TNM分期、淋巴结转移及辅助化疗有关(P均<0.05)，见表3。

表3 lncRNA SNHG20表达水平与乳腺癌患者临床病理特征关系n(%)

2.3乳腺癌组织中lncRNA SNHG20表达与患者近期放疗疗效关系:lncRNA SNHG20高表达组患者放疗后缓解率显著低于低表达组(P<0.05)。lncRNA SNHG20高表达与低表达组放疗总有效率相比，差异无统计学意义(P>0.05)，见表4。

表4 乳腺癌组织中lncRNA SNHG20表达与患者近期放疗疗效关系n(%)

2.4乳腺癌组织中lncRNA SNHG20表达与患者远期生存情况关系:Kaplan-Meier生存分析结果显示，lncRNA SNHG20高表达组患者3年累积生存18例，lncRNA SNHG20低表达组患者3年累积生存48例。lncRNA SNHG20高表达组患者3年总生存率为34.62%，显著低于lncRNA SNHG20低表达组3年总生存率71.64%( 2=13.750，P<0.05)。见图1。

2.5Cox回归模型分析乳腺癌患者预后影响因素:Cox回归模型单因素分析结果显示，分化程度低、TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移、lncRNA SNHG20高表达、未辅助化疗是影响乳腺癌患者不良预后危险因素(P均<0.05)。多因素分析结果显示，TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移、lncRNA SNHG20高表达是影响乳腺癌患者不良预后独立危险因素(P均<0.05)。见表5。

表5 乳腺癌患者预后影响因素分析

图1 Kaplan-Meier生存分析

3 讨 论

lnc RNA是一类长度大于200碱基的非编码RNA，具有调控细胞周期、细胞分化等功能。Wu等[8]研究证实，lncRNA SNHG20在前列腺癌中表达显著上调，下调其表达可抑制前列腺癌发生发展。本研究结果显示，与正常乳腺组织相比，lncRNA SNHG20在乳腺癌组织中表达显著升高，与Wu等[8]在卵巢癌中研究结果一致，提示SNHG20可能与乳腺癌发生有关。Zhenyao等[9]研究发现，非小细胞肺癌组织中lncRNA SNHG20表达明显升高，与高TNM分期、淋巴结转移及总生存率低有关。本研究结果发现，不同分化程度、TNM分期、淋巴结转移情况乳腺癌患者lncRNA SNHG20表达水平不同，与Zhenyao等[9]在非小细胞肺癌中研究结果相似，提示lncRNA SNHG20可能与乳腺癌发展有关。

放疗是通过α、β、γ等放射线进行局部治疗，是乳腺癌治疗的主要手段之一。有研究表明，lncRNA SBF2-AS1在非小细胞肺癌组织中表达上调，抑制SBF2-AS1表达则可增强非小细胞肺癌细胞放疗敏感性[10]。Lai等[11]研究报道，放射敏感性乳腺癌组织中lncRNA CCAT1表达水平显著低于耐辐射癌组织，lncRNA CCAT1是乳腺癌预后生物标志物。提示lncRNA可能与肿瘤放疗敏感性及患者预后有关。本研究结果显示，lncRNA SNHG20高表达组患者放疗后缓解率显著低于lncRNA SNHG20低表达组患者，提示lncRNA SNHG20表达水平升高可能与患者放疗敏感性降低降低有关。Hu等[12]在乳腺癌研究中发现，lncRNA HOTAIR晚期癌细胞中表达量较高，能显著增强癌细胞抗辐射性、促进癌细胞增殖。提示lncRNA SNHG20高表达可能通过抑制乳腺癌细胞放疗敏感性促进乳腺癌进展。

Gao等[13]研究发现，lncRNA SNHG20在口腔鳞癌组织中表达水平明显升高，与患者生存期较短有关，是影响患者不良预后危险因素。本研究结果发现，lncRNA SNHG20高表达组患者3年总生存率明显降低，提示lncRNA SNHG20高表达可能与乳腺癌患者预后不良有关。放疗敏感性是影响肿瘤放疗疗效及患者预后重要因素。提示本研究中lncRNA SNHG20高表达可能通过抑制乳腺癌放疗敏感性，影响患者3年总生存率低等不良预后。本研究还发现，TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移、lncRNA SNHG20高表达是影响乳腺癌患者不良预后独立危险因素，提示lncRNA SNHG20表达水平可能成为判断乳腺癌恶性程度、评估患者预后标志物。

综上所述，lncRNA SNHG20在乳腺癌组织中高表达，与乳腺癌放疗敏感性低、TNM分期、淋巴结转移及患者总生存率有关。lncRNA SNHG20可能通过抑制乳腺癌放疗敏感性，促进乳腺癌进展，进而影响患者总生存率低等不良预后。但由于本研究样本量较少，研究较为基础且随访时间较短，lncRNA SNHG20在乳腺癌中具体作用尚需进一步深入研究。