DJ-1在前列腺癌中的表达及其与新辅助内分泌治疗疗效的关系分析

韦高猛， 唐毓金 ， 黄勇平

(右江民族医学院附属医院泌尿外科， 广西 百色 533000)

前列腺癌是男性最常见的恶性肿瘤，其发病率较高，严重威胁男性生命健康及生活质量。既往研究显示[1]，前列腺癌的发生、发展与众多因素相关，如遗传因素、性活动、饮食结构等。一般而言，前列腺癌在早期无明显典型症状体征，此后随着肿瘤的不断发展，前列腺癌主要表现为尿流缓慢、排尿不尽且费力、尿频尿急甚至尿失禁等。自新辅助内分泌治疗方法问世以来，前列腺癌的治疗从既往单一治疗手段发展成了目前多种治疗方式相结合的治疗策略[2]。近些年，新辅助内分泌治疗方式对于降低肿瘤切缘阳性率及前列腺特异抗原(prostate specific antigen，PSA)水平的作用得到了医学界的认可[3]。因此，寻找辅助临床诊断的分子标志物，对监测患者病情、制定合理的治疗方案及改善预后显得至关重要。近年来越来越多的学者报道，DJ-1在多种肿瘤中高表达，且与肿瘤的发生、发展、转移及预后密切相关[4]。基于此，本研究探讨了DJ-1在前列腺癌中的表达及其与新辅助内分泌治疗疗效的关系，旨在探讨DJ-1在前列腺癌中的表达规律及其临床意义。

1 资料与方法

1.1研究对象:收集本院2015年1月至2016年4月穿刺确诊为前列腺癌患者的癌组织、同例患者的癌旁3cm新鲜组织对应蜡块98例，其中新辅助内分泌治疗前后的标本全部来自于穿刺活检组织。纳入标准：患者入组前未接受其他癌症相关治疗；临床和病理资料清晰、完整；排除标准：合并严重心、肝、肺功能不全或其他恶性肿瘤患者；伴自身免疫性疾病者。本组病例年龄51～70岁，平均年龄(63.57±10.15)岁，肿瘤TNM分期为Ⅱ期63例，Ⅲ期35例。另选取同期50～70岁的98例病理检查为良性的前列腺增生患者的前列腺增生组织对应蜡块。所有患者已签署知情同意书，本研究经院伦理委员会批准。

1.2方 法

1.2.1免疫组化技术检测DJ-1:蜡块组织以4μm为标准连续切片，烤片、脱蜡、梯度酒精水化，3% H2O2(10min)去除内源性过氧化物酶，微波抗原修复，PBS冲洗后加DJ-1一抗，室温孵育3h，冲洗后加入增强液反应20min，PBS冲洗，加入辣根过氧化物酶标记的二抗，室温孵育30min，冲洗后DAB显色，苏木素复染，PBS液返蓝，梯度酒精脱水后吹干，中性树胶封片。以PBS液代替一抗作为阴性对照。DJ-1兔抗人单克隆抗体购于英国abcam公司。

1.2.2新辅助内分泌治疗方法:前列腺癌患者均在根治术前行3个月标准内分泌治疗：诺雷得(英国AstraZeneca UK Limited，国药准字J20160052，3.6mg/支)，腹前壁皮下注射，3.6mg/次，每28d注射1次。康士得(德国CORDEN PHARMA GMBH，国药准字J20150050，50mg*28片)，口服，50mg/次，每天1次。连续治疗3个月。

1.3免疫组化结果判定:染色结果采用半定量积分法分析[5]：DJ-1蛋白的表达主要位于细胞浆，少部分位于胞核，阳性染色的标准为胞浆内出现棕黄色颗粒。染色强度计分：无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。阳性细胞百分比计分：0～10%为0分，11%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。髙倍镜下，每张切片随机选取5个视野，每个视野至少含有200个细胞，以染色强度与平均阳性细胞百分比之乘积作为最后得分：0分为阴性(-)，1～3分为弱阳性(+)，4～6分为中度阳性(++)，7分及以上为强阳性(+++)。

1.4临床疗效判定标准:参照实体瘤疗效评价标准评定前列腺癌患者经新辅助内分泌治疗后3个月的临床疗效，将临床疗效划分为4个等级：①完全缓解，肿瘤持续1个月完全消失；②部分缓解，肿瘤持续1个月体积缩小50%及以上，且无其他病变扩展；③稳定，肿瘤体积缩小不足50%，增大不超过25%；④进展，肿瘤体积增大超过25%。治疗有效率=(完全缓解+部分缓解)例数/总例数×100%；疾病控制率=(完全缓解+部分缓解+稳定)例数/总例数×100%[8]。

1.5随访:采用门诊方式随访，随访期为3年，统计患者生化复发时间。生化复发时间定义：从手术日期到连续两次检测出血清PSA水平>0.2μg/L的时间间隔。

2 结 果

2.1DJ-1在不同组织中的免疫组化染色结果:采用非参数Mann-Whitney U检验等级检验比较前列腺增生组织与前列腺癌组织及前列腺癌旁组织中DJ-1蛋白表达量差异，结果显示，前列腺增生组织的DJ-1蛋白表达量明显低于及前列腺癌组织(Z=53.950，P=0.000)，而与癌旁组织组对比无统计学差异(Z=3.012，P=0.083)；采用Willcoxon符号秩和检验比较前列腺增生组织与前列腺癌组织中DJ-1蛋白表达量差异，结果显示，癌旁组织DJ-1蛋白表达量明显低于前列腺癌组织(Z=10.220，P=0.001)，见表1。前列腺癌、癌旁与前列腺增生组织免疫组化图片见图1。

表1 DJ-1蛋白在不同组织中的免疫组化染色结果(n)

图1 前列腺癌、癌旁与前列腺增生组织免疫组化

2.2DJ-1在新辅助内分泌治疗前后的免疫组化染色结果:采用Willcoxon符号秩和检验进行比较发现，DJ-1在新辅助内分泌治疗后整体阳性表达情况下降，差异有统计学意义(Z=9.115，P=0.001)。见表2。

2.3DJ-1与前列腺癌临床病理参数及新辅助内分泌治疗疗效的关系:经比较，DJ-1阳性患者和阴性患者在年龄(χ2=0.251，P=0.616)、肿瘤直径大小(χ2=1.274，P=0.259)等方面无统计学意义，但在Gleason分期(χ2=3.857，P=0.049)、有无淋巴结转移(χ2=8.632，P=0.003)、TNM分期(χ2=10.917，P=0.001)及临床疗效(Z=6.185，P=0.013)方面差异有统计学意义。见表3。

表2 DJ-1蛋白在不同组织中的免疫组化染色结果(n)

表3 DJ-1与前列腺癌临床病理参数及新辅助内分泌治疗疗效的关系(n)

2.4DJ-1与前列腺癌无生化复发生存率的关系:强阳性(+++)组有3例患者失访，随访率为96.94%。生存曲线结果显示，DJ-1阴性(-)、弱阳性(+)、中度阳性(++)、强阳性(+++)组3年无生化复发生存率分别为93.33%、87.50%、74.07%、70.27%，经Log-rank检验，四组的3年无生化复发生存率差异具有统计学意义(χ2=4.426，P=0.036)。见图2。

图2 DJ-1与前列腺癌无生化复发生存率的关系

3 讨 论

前列腺癌是指发生在前列腺的上皮性恶性肿瘤，临床上较为常见，其发病率随年纪增长而上升，高峰年龄是70～80岁[6]。前列腺癌不仅会给患者带来排尿费力，尿等待、排便困难等生理方面不适，还会给患者造成严重的心理负担，影响日常的生活工作[7]。因此，寻找可用于监测患者病情的分子标记物，对于治疗前列腺癌具有重要的积极意义[8]。有研究显示[9]，DJ-1基因在多种肿瘤中的表达异常，与肿瘤的发生发展有密切的关系。DJ-1基因位于染色体1P36.2-1P36.3 PARK7点，故又名park7基因，全长24 kb。DJ-1蛋白属于DJ-1蛋白/ThiJ/PfpI蛋白超家族，含有189个氨基酸残基。在有关肿瘤发病机制的研究中，DJ-1被发现是一种致癌基因，且有证据显示，DJ-1蛋白能够通过负调控PTEN的活性，促进肿瘤细胞的生长增殖[10]。本研究对比了前列腺癌、癌旁组织及前列腺增生组织中DJ-1的表达水平后发现，DJ-1高表达于癌组织中，显著高于癌旁组织及前列腺增生组织(P<0.05)；在癌旁组织及前列腺增生组织中DJ-1多呈不表达或阴性表达。上述结果提示DJ-1在前列腺癌中表达异常，可能可以作为一种标记物用于鉴别前列腺癌。

本研究通过免疫组化的方法分析DJ-1在前列腺癌新辅助内分泌治疗前后组织中的表达，结果显示，经新辅助内分泌治疗后，DJ-1阳性表达情况明显下降(P<0.05)。诺雷得是一种合成的、促黄体生成素释放激素的类似物，能够抑制脑垂体促黄体生成素的分泌，使得男性血淸睾丸酮水平降低；康士得是一种非甾体类抗雄激素药物，能够与雄激素受体竞争性结合，而不激活基因表达，从而抑制雄激素的刺激，二者联合使用，有效抑制了肿瘤生长。治疗后，DJ-1在癌组织中表达下调，证实了新辅助内分泌治对前列腺癌组织的作用，且进一步探讨DJ-1与新辅助内分泌治疗疗效的关系发现，DJ-1阳性患者和阴性患者的临床疗效情况差异显著(P<0.05)，提示DJ-1与临床疗效相关，其可能成为反映前列腺癌病情变化的一种潜在标志物。此外，本研究结果显示，DJ-1阳性患者和阴性患者在肿瘤分化程度、有无淋巴结转移及TNM分期方面差异显著(P<0.05)，肿瘤分化程度越高、TNM分期越晚或有淋巴结转移时，DJ-1的阳性表达越高。提示DJ-1可能参与了前列腺癌的发展、浸润和转移等环节的调控，其表达情况与前列腺癌患者的肿瘤进展程度呈正相关关系。对比DJ-1阴性(-)、弱阳性(+)、中度阳性(++)及强阳性(+++)组3年无生化复发生存率发现，随着DJ-1表达的增强，其3年无生化复发生存率随之降低，提示DJ-1可以用来预测前列腺癌生化复发的风险。

综上所述，前列腺癌组织中DJ-1的表达明显高于癌旁组织及前列腺增生组织，且与肿瘤分化程度、淋巴结转移、TNM分期及3年无生化复发生存率相关，经新辅助内分泌治疗后，DJ-1的表达明显下调，提示DJ-1对于患者预后有一定预测价值。然而本组研究例数较少，随访时间较短，仅探讨了两组无生化复发生存率之间的差异，关于DJ-1能否作为患者预后的预测指标，尚需要更多的深入研究。