AP-2α ITGB1在宫颈鳞癌中的表达及与预后的相关性分析

李 波， 伍立群， 方 恋， 徐 丹， 肖凤仪

(湖北医药学院附属随州医院/湖北省随州市中心医院妇产科， 湖北 随州 441300)

宫颈癌是妇科常见恶性肿瘤，主要组织学是鳞癌，常在50岁左右人群中发病，近年来趋于年轻化[1]。宫颈癌细胞学筛查技术应用广泛，宫颈癌能够被及早发现和治疗，患者预后明显改善[2]。有研究报道，转录因子激活蛋白-2α(Transcription factor activator protein-2α，AP-2α)在胃癌组织中表达水平显著低于癌旁组织，AP-2α低表达与肿瘤低分化、不良预后有关[3]。AP-2α上调可明显降低肝癌细胞生长和增殖能力，抑制肝癌组织侵袭和迁移[4]。整合素β1蛋白(Integrin β1，ITGB1)与上皮性恶性肿瘤进展有关。结直肠癌中ITGB1表达上调，可促进结直肠癌细胞增殖和侵袭[5]。ITGB1高表达与结直肠癌患者整体生存时间短等不良预后有关，可作为潜在预后预测因子[6]。二者均与上皮间充质转化过程密切相关[7,8]。然而二者在宫颈鳞癌中表达情况研究较少，因此，本研究通过检测宫颈鳞癌组织中二者表达水平，分析与患者预后关系，以期为宫颈鳞癌临床治疗及预后改善提供一定帮助。

1 资料与方法

1.1一般资料:选择2013年10月至2016年12月本院收治的宫颈鳞癌患者93例，患者年龄31～74岁，平均(52.34±10.26)岁。纳入标准：①经临床及病理切片检测确诊为宫颈鳞癌。②需行子宫切除术。③FIGO分期[9]Ⅰ～Ⅲ期患者。④入组前未进行任何治疗。⑤临床及随访资料完整。排除标准：①合并患有其它部位肿瘤者。②心、肾、肝脏功能异常者。③患有严重精神疾病者。根据国际妇产科联盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO)分期标准[9]分为：Ⅰ～Ⅱ期47例，Ⅲ期46例；根据分化程度分为：高、中分化60例，低分化33例；根据肌层浸润程度分为：<1/2浸润38例，≥1/2浸润55例。根据淋巴结转移情况分为：无淋巴结转移61例，有淋巴结转移32例。另选取同期因子宫肌瘤需行全子宫切除术患者正常宫颈组织93例作为对照。两组患者年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)。本研究经本院伦理委员会批准同意。所有患者及其家属同意并签署知情同意书。

1.2主要试剂和仪器:兔抗人AP-2α多克隆抗体、兔抗人ITGB1多克隆抗体(货号分别为：PAB27019、PAB16520，美国Abnova公司)；鼠抗兔IgG二抗(货号：211-035-109，美国Abcam公司)；免疫组织化学染色试剂盒(货号：CD-104007GM，武汉纯度生物科技有限公司)；光学显微镜(型号：DSX100，日本奥林巴斯有限公司)

1.3方 法

1.3.1样本采集:分别于术中收集入组宫颈鳞癌患者癌组织及子宫肌瘤患者正常宫颈组织。10%福尔马林浸泡后，常规石蜡包埋制成4μm厚石蜡切片，用于免疫组织化学染色。

1.3.2免疫组织化学染色:严格按照免疫组织化学染色试剂盒说明书进行操作，将光学显微镜调至400倍镜观察最终所得切片，并选取6个视野计阳性细胞数。细胞核中呈棕黄色或棕褐色为AP-2α阳性细胞，细胞质中呈棕黄色或棕褐色为ITGB1阳性细胞。染色结果评定标准：根据染色强度和阳性细胞比例记分。染色强度：无色0分，淡黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分；阳性细胞所占百分比：<5%计0分，5%～25%计1分，26%～50%计2分，51%～75%计3分，>75%计4分。两组分值相乘，≤3分为阴性表达，>3分为阳性表达。

1.4随访:本研究中入组宫颈鳞癌患者经治疗出院后，以复查或电话形式对其进行3年随访，截止日期2019年12月31日，期间观察并记录患者生存情况。

2 结 果

2.1两组AP-2α、ITGB1蛋白表达水平:AP-2α蛋白表达主要定位于细胞核中，ITGB1蛋白表达主要定位于细胞质中，见图1。宫颈鳞癌组织中AP-2α蛋白阳性表达率显著低于正常宫颈组织(P<0.05)，ITGB1蛋白阳性表达率显著高于正常宫颈组织(P<0.05)，见表1。

表1 两组AP-2α ITGB1蛋白表达水平比较n(%)

2.2宫颈鳞癌组织中AP-2α、ITGB1蛋白表达水平与患者临床病理特征关系:宫颈鳞癌组织中AP-2α、ITGB1蛋白阳性组与阴性组患者年龄、肿瘤直径、肿瘤分化程度之间比较，差异无统计学意义(P均>0.05)。AP-2α、ITGB1蛋白表达水平均与肌层浸润、FIGO分期及是否有淋巴结转移有关(P均<0.05)，见表2。

图1 免疫组织化学染色法检测AP-2α、ITGB1蛋白表达(×400)

图2 Kaplan-Meier生存分析

2.3AP-2α与ITGB1蛋白表达水平相关性:宫颈鳞癌组织中AP-2α与ITGB1蛋白表达水平呈负相关(r=-0.582，P<0.05)。见表3。

表2 宫颈鳞癌组织中AP-2α ITGB1蛋白表达水平与患者临床病理特征关系n(%)

表3 AP-2α与ITGB1蛋白表达水平相关性

2.4AP-2α、ITGB1蛋白表达与宫颈鳞癌患者预后关系:AP-2α阳性组患者3年总生存率为78.57%，显著高于AP-2α阴性组患者3年总生存率32.31%(P<0.05)。ITGB1阳性组患者3年总生存率为44.44%，显著低于ITGB1阴性组患者3年总生存率76.92%(P<0.05)，见图2。

2.5宫颈鳞癌患者不良预后影响因素分析:Cox单因素回归分析结果显示，年龄、肿瘤直径与宫颈鳞癌患者预后无关(P均>0.05)；分化程度低、浸润程度≥1/2、FIGO分期Ⅲ期、淋巴结转移、AP-2α阴性、ITGB1阳性是影响宫颈鳞癌患者不良预后危险因素(P均<0.05)。多因素分析结果显示，FIGO分期Ⅲ期、淋巴结转移、AP-2α阴性、ITGB1阳性影响宫颈鳞癌患者不良预后独立危险因素(P均<0.05)。见表4。

表4 Cox回归分析宫颈鳞癌患者不良预后影响因素

3 讨 论

宫颈鳞癌患者常出现阴道不规则出血、阴道排液异常等症状，随疾病进展常伴有输尿管梗阻、尿毒症、多种器官衰竭等并发症，预后极差[10]。研究报道，上皮间充质转化过程是肿瘤进展的主要机制和治疗靶点[9]。

Ross等研究表明，AP-2α在乳腺癌组织中表达水平较低，与乳腺癌细胞增殖率较高有关，AP-2α可能作为抑癌因子，抑制肿瘤增殖和侵袭[11]。本研究结果显示，与正常宫颈组织相比，AP-2α蛋白在宫颈鳞癌组织中阳性表达率显著降低，提示AP-2α蛋白阴性表达可能与宫颈鳞癌发生有关，AP-2α蛋白在宫颈鳞癌中可能作为抑癌因子。研究报道，AP-2α表达水平与大肠癌患者淋巴结转移有关[12]。本研究结果中，AP-2α蛋白表达水平与肌层浸润、FIGO分期及是否有淋巴结转移有关，提示AP-2α低表达可能通过影响肿瘤肌层浸润加深、FIGO分期加重、淋巴结转移，促进宫颈鳞癌进展。AP-2α与上皮间充质转化机制密切相关，内源性AP-2α表达水平下调对上皮间充质转化起抑制作用[7]。推测AP-2α也可能通过调控上皮间充质转化，影响癌细胞增殖和迁移，进而影响宫颈鳞癌发展。

研究发现，ITGB1在前列腺癌组织中过表达，可促进癌细胞增殖、迁移和侵袭[13]。本研究结果显示，ITGB1蛋白在宫颈鳞癌组织中阳性表达率显著升高，与肌层浸润加深、FIGO分期升高及淋巴结转移有关，提示ITGB1可能通过影响宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭等促进宫颈鳞癌发生发展。有研究证实，过表达ITGB1可激活上皮间充质转化参与乳腺癌进展[14]。上调ITGB1表达可诱导肝细胞癌上皮间充质转化，促进癌细胞转移[15]。提示本研究中，ITGB1可能通过影响上皮间质转化，促进宫颈鳞癌细胞增殖和转移，影响宫颈鳞癌疾病进展。进一步研究发现，宫颈鳞癌组织中AP-2α与ITGB1蛋白水平呈负相关，提示AP-2α与ITGB1可能存在相互作用，通过共同调控上皮间充质转化影响宫颈鳞癌发生发展。但具体机制有待进一步深入研究。

胃癌和乳腺癌中AP-2α、ITGB1异常表达已被证实与患者生存率低有关[3,14]。本研究结果显示，AP-2α阴性组及ITGB1阳性组患者3年总生存率显著降低，提示AP-2α、ITGB1水平变化可能与宫颈鳞癌患者预后有关，AP-2α阴性及ITGB1阳性可能预示患者不良预后。本研究还发现，AP-2α阴性、ITGB1阳性影响宫颈鳞癌患者不良预后独立危险因素，提示AP-2α、ITGB1可能作为宫颈鳞癌患者生物标志物，对评估患者预后有重要意义。

综上所述，宫颈鳞癌组织中AP-2α阳性表达率降低，ITGB1阳性表达率升高，与肌层浸润、FIGO分期、淋巴结转移及患者生存率有关，二者可能共同参与宫颈鳞癌发生发展，影响患者预后。但由于本研究样本量较少，研究方法较简单，具体机制尚需大量研究证实。