细胞质动力蛋白轻链1在肾癌组织中的表达及其临床意义

汪 宁， 王荣江， 邵四海， 汤建儿， 陈 煜， 高建国

肾癌是泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，其发病人数约占全身恶性肿瘤的3%[1]。良性肾肿瘤包括肾血管平滑肌脂肪瘤、肾纤维瘤和肾腺瘤等，而肾癌多为原发性肾肿瘤。肾癌以根治性手术为主，而出现远处转移将会失去治疗时机[2]，因此寻找有效的肾癌标志物对指导疾病诊断、判断预后、指导治疗具有重要临床意义。动力蛋白轻链家族包括细胞质动力蛋白轻链1（Tctex-1/Dynlt-1)、Dynlt3、Dynll-1、Dynll-2、Dynrb-1、Dynrb-2。Tctex-1的编码基因位于6q25.2，分子量12 ku，含有113AA，由2个α螺旋和4个β链组成的二聚体。它主要富集在间质成纤维细胞的高尔基体上，同时也表达于间质微管和核膜上[3]。本实验采用免疫组化法检测肾癌组织中Tctex-1的表达，比较肾癌组织与癌旁正常肾脏组织中的Tctex-1阳性表达率，并分析肾癌组织中Tctex-1阳性表达率与临床病理特征的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取湖州师范学院附属第一医院2010年至2018年收治的136例肾透明细胞癌患者，取其癌组织及癌旁正常肾组织作为研究对象，均通过病理证实。136例肾癌患者中男80例，女56例；年龄31～83岁，平均（61.5±10.2）岁；透明细胞癌97例，嫌色细胞癌15例，乳头状腺癌10例，囊性肾癌14例；右侧70例，左侧66例；采用1997年WHO分级系统进行病理分级：Ⅰ、Ⅱ级81例，Ⅲ、Ⅳ级55例；采用2009年AJCC肾癌分期系统进行临床分期：Ⅰ、Ⅱ期76例，Ⅲ、Ⅳ期60例。所有肾癌患者手术前均无其他恶性肿瘤病史，手术前均未接受放、化疗或免疫治疗。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂 兔超敏免疫组化检测试剂、山羊血清、DAB显色试剂购自北京中杉金桥生物科技公司；Tctex-1多克隆抗体购自Abcam公司。

1.2.2 标本采集 标本先经10%甲醛固定，石蜡包埋后常规脱水，将石蜡切片制成厚4 μm，HE染色。

1.2.3 免疫组化 将石蜡切片滴加一抗Tctex-1（1:800），孵育清洗后滴加二抗，显色、苏木素复染、脱水、封片，在显微镜下观察并拍照。

1.2.4 结果判定 （1）根据阳性细胞的染色强度进行评分：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。（2）切片中选取5个视野，根据阳性细胞数占实质细胞的百分比进行评分：阴性为0分，＜10%为1分，10%～50%为2分，50%～75%为3分，≥75%为4分。以上2项评分结果相乘结果即为阳性等级：0分为阴性（–），1～4分为弱阳性（+），5～8分为阳性（++）；9～12分为强阳性（+++）。

1.3 统计学处理 采用SPSS17.0软件进行统计分析，计数资料以例（%）表示，采用χ2检验进行组间比较，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Tctex-1在肾透明细胞癌及癌旁组织中的表达情况 Tctex-1在肾癌组织中呈阳性表达，而在癌旁组织中呈阴性或弱阳性表达。Tctex-1蛋白定位在肾实质细胞胞浆中，而在肾小管、肾小球、集合管中为阴性表达，见图1。

图1 Tctex-1在肾透明细胞癌及其癌旁组织中的表达（HE染色，×100）

2.2 不同类型肾癌与癌旁组织中Tctex-1阳性表达率比较 肾癌组织中Tctex-1的阳性表达率为91.9%，明显高于癌旁组织（12.5%），差异有统计学意义（P＜0.01），见表1。

2.3 Tctex-1阳性表达率与肾癌患者临床病理特征的关系 肾癌组织病理分级Ⅲ、Ⅳ级的Tctex-1阳性表达率均高于Ⅰ、Ⅱ级，临床分期Ⅲ、Ⅳ期的Tctex-1阳性表达率高于Ⅰ、Ⅱ期，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表1 肾癌组织与癌旁组织Tctex-1阳性表达率比较

表2 肾癌组织中Tctex-1阳性表达率与患者临床特征的关系

3 讨论

胞质动力蛋白是由轻链、中间链、重链等组成的多亚基蛋白复合体[4]，能将生物能转化为机械能，通过微管运动进行物质运输。在有丝分裂中胞质动力蛋白可促进中心体分离、核膜解体、纺锤体组装[5-6]；还能与动力激活蛋白相结合，从而驱动染色体分离以及膜性细胞器运输。Tctex-1作为一种重要的细胞因子，参与多个生物学过程，如介导逆行囊泡运输，参与直接的物质运输，应力纤维和黏着斑的形成，轴突发育，病毒感染，细胞的破骨过程等，同时也参与多种肿瘤的发生发展及迁移过程。通过RNA干扰沉默Tctex-1基因能够加重缺氧诱导的线粒体损伤[7]。亦有报道称Tctex-1Ser82磷酸化会降低与中间链的亲和力，参与微管和线粒体的调节[8]。通过酵母双杂交实验发现Tctex-1与Dkk-3相互作用。免疫荧光实验发现Tctex-1与Dkk-3共定位于人成纤维细胞的内质网附近。而Dkk-3是Dickkopf蛋白家族一员，在多种肿瘤包括肾癌中表达下调，过表达Dkk-3可通过内质网应激信号诱导凋亡[9-13]。研究发现Tctex-1在90%的乳腺癌中高表达，并作为p21活化酶1的底物，与Pak1形成复合物促进乳腺癌发生、生长及乳腺癌细胞存活[14]，提示Tctex-1可能是一种促癌因子。

本研究组通过前期研究发现下调Tctex-1基因可以降低人肾癌786-O细胞的增殖、迁移以及侵袭能力，其机制可能与下游Wnt、VDAC1信号通路有关[15]。本研究结果显示，Tctex-1在肾癌组织中呈阳性表达，在癌旁组织中呈阴性或弱阳性表达，提示Tctex-1可能扮演一种癌基因参与肾癌的发生及发展，并为肾癌早期诊断以及预防提供依据。并且研究发现Tctex-1在肾癌不同病理类型中均有所表达，Tctex-1在肾癌组织病理分级和临床分期Ⅲ、Ⅳ级（期）中的阳性表达率均分别高于病理分级和临床分期Ⅰ、Ⅱ级（期）；提示Tctex-1表达量可随疾病进展而提高，更验证了它作为促癌基因存在，而高表达的Tctex-1可能会进一步促进肾癌细胞增殖及浸润，而抑制Tctex-1表达可能会抑制癌细胞进展。

综上所述，高表达Tctex-1基因与肾癌发生发展过程有密切联系，是肾癌的促癌基因。Tctex-1蛋白表达量因肾癌的病理分级以及临床分期提高而增加，具有正相关性。今后仍需进一步研究Tctex-1在肾癌中的遗传学机制、信号通路以及对肾癌细胞生物学行为的影响，从而为肾癌的早期诊断以及治疗提供新的分子靶标。