LncRNA SNHG7在肝癌组织中的表达水平及临床意义

郭克锋 常英英 李宗民 柳玉花

肝细胞癌(HCC)是一种常见的恶性肿瘤,具有发展迅速、侵袭性强、预后差等特点[1-2]。长非编码RNA(lncRNA)是指长度超过200个核苷酸，缺乏蛋白质编码能力的RNA[3]。很多lncRNA已被证实在肿瘤中异常表达，参与各种肿瘤的发生和进展过程[4]。这些异常表达的lncRNA可以作为生物学标志物用于判断肿瘤的进展情况及评价预后[5-6]。

Cui等人[7]通过比较早期复发的有转移的HCC组织和晚期复发的无转移的HCC组织的lncRNA表达谱，确定了SNHG7可能参与HCC细胞转移，并在体外证实SNHG7参与了肝细胞癌细胞的侵袭。然而，SNHG7与HCC患者临床指标及预后的关系尚未有相关报道。因此，本研究通过检测SNHG7在HCC组织中的表达情况，分析其表达的临床意义。

资料和方法

一、研究对象

本研究经本院研究伦理委员会批准，所有患者均获得知情书面同意。组织从我院60例肝癌患者的术后肿瘤组织及相应的正常肝组织标本中采集，所有肿瘤均经手术标本病理证实。所有患者均未接受术前放化疗，临床基本特征见表1。

二、细胞培养

采用含90%DMEM高糖+10%FBS的培养基培养人肝癌细胞系HepG2、Huh6、Huh7、Hep3B和人正常肝细胞系LO2(ATCC)。细胞培养环境为37℃和5%二氧化碳。

三、组织RNA提取及qRT-PCR

根据说明书，用Trizol试剂(Invitrogen)提取总RNA。采用Primer- Script one step RT-PCR kit试剂盒(Takara)将RNA逆转录成cDNA，使用ABI Prism 7900HT(Biosystems)系统进行qPCR。以GAPDH的表达为内参，SNHG7的相对表达量用2-ΔΔCt法计算。引物序列，SNHG7-F: 5′-GTGTGTCCCT-TGGTGGAGAG-3′, SNHG7-R: 5′-TCCCAGATACCAGCG-AAGGA-3′；GAPDH-F: 5′-CGCTCTCTGCTCCTCCTGTTC-3′, GAPDH-R: 5′-ATCCGTTGACT-CCGACCTTCAC-3′。

四、统计学分析

采用SPSS 17.0软件对数据进行分析，数据以均数±标准差表示。使用t检验或χ2检验比较两组间差异，采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，Cox比例风险回归模型进行单因素及多因素分析。P<0.05为差异具有统计学意义。

结 果

一、SNHG7在HCC组织和细胞系中高表达

首先，我们采用qRT-PCR检测了60对肝癌组织及相应的肝正常组织(NLT)中SNHG7的表达水平。结果显示，肝癌组织中SNHG7的表达水平明显高于正常肝组织(P<0.05)。而且，人肝癌细胞系HepG2、Huh6、Huh7和Hep3B中SNHG7的表达水平明显高于人正常肝细胞系LO2(P<0.05)。此结果表明SNHG7在HCC组织和细胞系中高表达。

二、 SNHG7表达与HCC患者临床病理因素的相关性

用SNHG7表达的中位数将HCC患者分为SNHG7高表达组(n=30)和SNHG7低表达组(n=30)，并与患者临床病理因素进行比较。结果表明SNHG7表达与TNM分期、肿瘤数目及肿瘤微血管侵犯密切相关(P<0.05)(表1)。

表1 SNHG7表达与HCC患者临床病理因素比较

三、SNHG7高表达与HCC患者低生存率有关

我们用Kaplan-Meier法对两组患者进行生存分析。结果显示，SNHG7高表达的HCC患者无瘤生存时间(DFS)和总体生存时间(OS)较短(P<0.05)(图1)。这个结果表明SNHG7高表达提示HCC患者低生存率。

图1 SNHG7高表达与低表达的HCC患者的无瘤及总体生存比较

四、SNHG7表达是影响HCC患者预后的独立危险因素

用COX单因素分析寻找影响HCC患者预后的因素，将P<0.05的因素纳入COX多因素分析，结果表明，TNM分期、肿瘤数目、肿瘤微血管侵犯和SNHG7表达是影响HCC患者无瘤生存的独立危险因素；TNM分期、肿瘤微血管侵犯和SNHG7表达是影响HCC患者总体生存的独立危险因素。因此，SNHG7表达是影响HCC患者预后的独立危险因素。

讨 论

我们的研究发现，SNHG7在HCC组织中的表达明显高于正常肝组织，而且，SNHG7在HCC细胞系中的表达亦明显高于人正常肝细胞系。研究表明，SNHG7可作为癌基因在多种肿瘤中表达上调并发挥促进肿瘤发展的作用。例如，Zhang等[8]报道SNHG7在黑色素瘤中高表达，可通过上调SOX4促进黑色素瘤细胞的侵袭和迁移；Sun等[9]证实SNHG7在乳腺癌中上调，并通过miR-34a启动EMT和Notch-1通路促进乳腺癌的发生和进展。因此，HCC中高表达的SNHG7也可能发挥癌基因的作用促进肿瘤进展。

也有研究表明，SNHG7的表达与肿瘤的预后相关。例如，Cheng等[10]的研究表明SNHG7在胰腺癌组织和细胞系中高表达，其高表达与胰腺癌预后不良相关；Chi等[11]发现在神经母细胞瘤中上调的SNHG7与神经母细胞瘤患者的低生存率相关。本研究中，我们将SNHG7的表达与HCC患者的临床病理因素进行了对比，结果表明SNHG7的表达与TNM分期、肿瘤数目及肿瘤微血管侵犯密切相关。生存分析发现，SNHG7高表达提示HCC患者低无瘤生存率和总体生存率。同时，COX单因素和多因素分析表明SNHG7表达是影响HCC患者预后的独立危险因素。因此我们认为SNHG7在HCC中有作为临床生物学标志物的潜力。

综上，我们的结果表明，SNHG7在HCC中高表达，其表达与肿瘤的进展情况及不良预后密切相关。SNHG7在HCC发生和发展过程中的作用及相关分子机制需进一步研究。