不同产地铁皮石斛中柚皮素和石斛酚含量测定

陈丹　吴梅青　张广宁　李金科　李柯

【摘  要】目的：对15份不同产地铁皮石斛中柚皮素和石斛酚的含量进行测定，为科学评价及有效控制其质量提供参考。方法：采用WelchUltimateXB-C18色谱柱（4.6×250mm，5μm）;以乙腈-0.4%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，流速为1.0mL·min-1，检测波长269nm，柱温25℃。结果：柚皮素和石斛酚质量浓度分别在4.31～86.2μg（r=0.9998）、2.57～51.4μg（r=0.9997）范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率（n=6）分别为96.74%、99.03%。结论：不同产地铁皮石斛中柚皮素和石斛酚含量存在差异。

【关键词】铁皮石斛;柚皮素;石斛酚;高效液相色谱法

【中图分类号】R284      【文献标识码】A      【文章编号】1672-3783（2020）06-0257-01

铁皮石斛（DendrobiiOfficinalisCaulis）为兰科植物铁皮石斛Dendrobiumofficinale KimuraetMigo的干燥茎，《中国药典》一部（2015年版）称其性味甘，微寒，归胃、肾经;具有益胃生津，滋阴清热之功效，临床上常用于缓解人体疲劳、增强免疫力、改善胃肠道功能、治疗糖尿病与辅助抗肿瘤等[1-2]。文献报道铁皮石斛所含柚皮素具有明显的抗炎、抑菌、镇痛、抗氧化、抗肿瘤和免疫调节等作用[3]。联苄类化合物石斛酚具有抗诱变活性，可阻滞由脂多糖诱导的诱导型的一氧化氮合酶和环氧合酶-2的表达[4]。近年来石斛的保健功能日趋受到重视，人工栽培得到较大的发展，在全国多个省区（浙江、云南、福建、江西、安徽等）形成了大规模的人工种植区域，产地的自然环境差异大，为考察不同产地铁皮石斛的质量，本试验以柚皮素和石斛酚为指标成分，采用RP-HPLC法对来自于不同产地的15批铁皮石斛样品进行质量分析，为铁皮石斛药材质量评价及合理利用该药用植物资源提供参考。

1仪器、试剂与试药

高效液相色谱仪（LC-20AT型，日本岛津），紫外检测器（SPD-20A型，日本岛津），电

子分析天平（XPE105，瑞士MettlerToledo，十万分之一），超声波清洗器（HX-06，武汉

恒信世纪科技有限公司）。

石斛酚对照品（批号：111875-201202）由中国食品药品检定研究院提供;柚皮素对照品（批号：MUST-16032406，含量以99.18%计）由成都曼思特生物科技有限公司提供;乙腈为色谱纯（Tedia公司），甲酸为色谱纯（天津市科密欧化学试剂有限公司）;蒸馏水（华润怡宝饮料（中国）有限公司）。

铁皮石斛药材，无限极（中国）有限公司提供，批号：201603007、201603009、201604009、201605007、20160525、201606009、20160613、20160625、201607007、201607009、20160725、20160825、201609007、201609009、201610009，经湖南省中医药研究院李若存研究员鉴定为兰科植物铁皮石斛DendrobiumofficinaleKimuraetMigo的干燥茎。

2方法与结果

2.1色谱条件

WelchUltimateXB-C18色谱柱（4.6×250mm，5μm）;柱温：25℃;流动相：乙腈（A）-0.4%甲酸水溶液（B），梯度洗脱（Time：0→5→10→25→45→60min;B：75%→70%→70%→60%→45%→30%）;检测波长：269nm;流速：1.0ml/min;进样量10μL。色谱图见图1。

2.2对照品溶液的制备

取柚皮素、石斛酚对照品各适量，分别精密称定，加甲醇制成每1mL分别含柚皮素86.2μg、石斛酚51.4μg的对照品溶液。

2.3供试品溶液的制备

取铁皮石斛（批号：201603007）药材粉末（过三号筛）约1.0g，精密称定，置100ml圆底烧瓶中，加甲醇50ml，加热回流提取2h，放冷，滤过，滤液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，0.45μm微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液。

2.4线性关系考察

分别精密吸取上述2种对照品溶液0.5、1、2、5、10mL，每种对照品溶液单独按浓度由低至高的次序加入至5个10mL量瓶中，分别加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。进样10μL，按“2.1”项下色谱条件进样检测，记录峰面积。以对照品溶液浓度为横坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归计算，得回归方程，柚皮素：回归方程y=4814x-478.19，r=0.9998;石斛酚：回归方程y=9495.5x+1764.9，r=0.9997，结果说明柚皮素和石斛酚质量浓度分别在4.31～86.2μg/ml、2.57～51.4μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5精密度试验

取同一供试品溶液连续进样测定6次，以柚皮素、石斛酚峰面积计，结果：RSD分别为1.28%、1.52%，表明仪器精密度良好。

2.6稳定性试验

取供试品溶液（201603007），分别于放置0、2、4、8、12、24h进样测定，以柚皮素、石斛酚峰面积计，结果：RSD分别为1.32%、1.75%，表明供试品溶液在24h内保持稳定。

2.7重复性试验

取同一批样品（201603007）适量，按供试品溶液制备方法制备6份溶液，测定，记录峰面积，计算。结果，柚皮素、石斛酚含量平均值分别为0.1081mg·g-1、0.0275mg·g-1，RSD分别为1.67%、2.39%，表明本方法重复性良好。

2.8加样回收率试验

精密称取同一批已知含量样品（201603007）6份，分别加入与供试液中柚皮素、石斛酚约成1∶1对照品量，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，计算样品含量，并计算加样回收率，结果柚皮素和石斛酚的平均加样回收率分别为96.74%（RSD=1.76%）、99.03%（RSD=2.65%），说明本方法准确度良好。

2.9样品含量测定

取15批铁皮石斛，分别测定石斛酚、柚皮素含量，结果见表1。

3讨论

查阅文献，柚皮素的最大吸收波长有290nm，280nm，310nm，270nm，226nm等[5-9]，石斛酚的最大吸收波长有230nm，270nm等[10-11]。采用紫外分光光度法对柚皮素及石斛酚的甲醇溶液进行扫描，结果柚皮素在290nm处有最大吸收，石斛酚在269nm处有最大吸收，采用290nm和269nm对2种成分进行测定，柚皮素含量相差不大，但石斛酚在269nm下含量更高，因此选择269nm作为2种成分的测定波长。

不同产地铁皮石斛含量测定结果显示，安徽霍山产柚皮素及石斛酚均可检出，且含量高于其它3个产地，其它3个产地铁皮石斛只能检出柚皮素，石斛酚在铁皮石斛中的含量很低，与文献报道[11]相符。安徽藿山产铁皮石斛为野生条件下生长，其它产地均为种植基地栽培，石斛酚含量高低与产地、种植方式的关系还有待进一步研究。

参考文献

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作者简介：

陈丹（1982-），女，汉族，副教授，硕士。主要研究方向：中药制剂开发及中药质量标准研究。